【摘要】：目的 神經(jīng)干細胞(Neural stem cells NSCs)的研究是當前神經(jīng)科學研究的熱點,隨著神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)成功,探索神經(jīng)干細胞增殖、分化機制尤其是其定向分化機制受到人們的關(guān)注。研究表明,神經(jīng)干細胞屬于多能干細胞,在體外它能在含有EGF和/或bFGF的無血清培養(yǎng)基中保持不斷增殖狀態(tài),并一直保持干細胞的特性,在誘導因素作用下可以分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞。 神經(jīng)細胞發(fā)育過程中,細胞生長、遷移、軸突和樹突的發(fā)出、把大分子物質(zhì)和細胞器運送到突起的分支以及軸突與其他神經(jīng)細胞建立突觸聯(lián)系等,均與細胞骨架有關(guān)。微管是神經(jīng)元中重要的細胞骨架成分之一,不僅維持細胞的形態(tài),而且參與細胞的多種功能,包括物質(zhì)轉(zhuǎn)運、信息傳遞等等。tau蛋白是一種微管相關(guān)蛋白,是保持微管穩(wěn)定性的重要因素,在結(jié)構(gòu)和功能上與微管密不可分。另外,tau蛋白還參與軸突發(fā)育和維持軸突形態(tài)相關(guān)的信號傳導過程。 本實驗采用神經(jīng)干細胞分離、培養(yǎng)、鑒定及定向分化、免疫細胞化學、免疫熒光標記術(shù)、電鏡技術(shù)、圖像分析等方法研究細胞骨架蛋白-tau蛋白表達變化,并探討其與神經(jīng)干細胞定向分化的神經(jīng)元形態(tài)變化的相關(guān)性,希望對神經(jīng)干細胞定向分化機制及其與細胞骨架蛋白的關(guān)系提供實驗依據(jù)。 實驗方法 1.神經(jīng)干細胞原代及繼代培養(yǎng):無菌取新生大鼠大腦皮層組織,剪碎,0.25%胰蛋白酶消化,過濾,離心,以1～2×10~5個/ml密度種植于無血清培
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R722.1
【圖文】：

隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞突起逐漸伸長，突起數(shù)量增加。到第6一7天細胞成熟，胞體呈錐體形或圓形，核大，位于細胞中間，清晰可見，突起4一6個，細長，伸展良好(圖2)。·15·

2.nestin免疫細胞化學染色結(jié)果整個神經(jīng)球呈棕黃色染色(圖3A)，可見神經(jīng)干細胞呈圓形或橢圓形，細胞核較大、未著色，細胞質(zhì)較少，胞質(zhì)內(nèi)nestin表達呈強陽性(圖3B)。圖3大腦皮層神經(jīng)千細胞原代培養(yǎng)形成的神經(jīng)球nestin免疫細胞化學染色。x400A:可見整個神經(jīng)球呈棕黃色染色。B:nesnti在神經(jīng)干細胞的胞質(zhì)中有表達，核未著色。3.nestin免疫熒光細胞化學染色結(jié)果采用Txeas一erd熒光二抗標記nestni，可見整個神經(jīng)球發(fā)紅色熒光(圖4)。4.NSE免疫細胞化學染色結(jié)果光鏡下可見棕黃色NSE反應產(chǎn)物均勻分布于胞質(zhì)與突起中，核未著色(圖5)。

大腦皮層神經(jīng)干細胞繼代培養(yǎng)形成的神經(jīng)球nestin免疫熒光染色x400可見整個神經(jīng)球發(fā)紅色熒光

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2 湯其群;張素春;李華偉;鄒云增;;干細胞定向分化的基礎(chǔ)和臨床應用研究[J];生命科學;2007年04期

3 黃保勝;李立新;謝青松;田和平;胡衛(wèi)星;傅震;;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子促進神經(jīng)干細胞在體內(nèi)外的定向分化[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年37期

4 杜U

本文編號：2758402