【摘要】： 現(xiàn)代研究已經(jīng)證實，膳食營養(yǎng)結(jié)構(gòu)和成分的改變不僅會引起生物體各種生理過程變化，甚至會影響到某些易感基因的表達，體內(nèi)的脂肪細胞會敏感地感受到飲食因素的改變。 生酮飲食是一種特殊的高脂肪低碳水化合物飲食，歷史上一直被應用于抗癲癇病的治療，近幾年開始發(fā)展應用到體重調(diào)節(jié)方面，以往研究的干預對象大多為有代謝綜合癥或高血脂癥的肥胖或超重患者，但在現(xiàn)實生活中有許多正常人群也面臨著調(diào)節(jié)體重的難題，生酮飲食在正常個體中應用會產(chǎn)生什么樣的影響，亟待進一步研究。 隨著現(xiàn)代醫(yī)學研究進入到分子生物學時代，研究膳食脂肪對易感基因的作用，越來越受到人們的重視。酵母染色質(zhì)沉默因子1(silent information regulator 1，Sirt1)編碼的核蛋白參與多種新陳代謝活動，以往人們對Sirt1的研究多集中在與能量限制有關的長壽領域，有關Sirt1與肥胖之間的關系了解不多。 本研究觀察了生酮高脂飲食對正常大鼠生長、代謝和運動能力的影響，另外還利用傳統(tǒng)高脂飲食制造肥胖傾向和肥胖抵抗動物模型，比較高脂肪高能量條件對Sirt1通路的影響，為探索新的肥胖防治途徑提供科學依據(jù)。 實驗材料與方法 1、德國Harlan-Winkelman公司提供健康成年雄性Wistar大鼠23只，隨機按體重分為2組(11只生酮飲食組和12只對照組)。每日根據(jù)對照組每日平均能量攝入量給予生酮飲食組含同等能量的生酮飲食。配對喂養(yǎng)10天后開始訓練大鼠運動，每日在黑夜時相使大鼠被迫在勻速轉(zhuǎn)動的輪子內(nèi)跑步。 (1)訓練原則：人為控制轉(zhuǎn)速與時間，來確保兩組動物在規(guī)定時間內(nèi)的運動量一致。每日訓練大鼠被迫跑步，每3天一個周期增加訓練時間或者輪子轉(zhuǎn)速，來逐漸增加大鼠的運動量。訓練3周后，對動物進行耐力測試。 (2)耐力測試的原則為：①動物始終被迫在一個固定轉(zhuǎn)速的輪子上跑步，直至筋疲力盡；②筋疲力盡狀態(tài)指的是動物的跑動不能跟上輪子的轉(zhuǎn)動；③動物在筋疲力盡時的表現(xiàn)可為前后肢的動作不能協(xié)調(diào)，如：后肢拖拽在身體后；④3分鐘內(nèi)動物被輪子甩下5次，曾現(xiàn)“滾筒洗衣機”狀態(tài)；⑤2名操作者同時判斷，意見達成一致，終止測試。 (3)間接法測定代謝率 在配對喂養(yǎng)前1天將所有動物送入CaloSys系統(tǒng)1小時，檢測動物基礎水平的靜息代謝率，于配對喂養(yǎng)第4天、第9天再次將所有動物送入CaloSys系統(tǒng)2小時，檢測接受生酮飼料4天、9天后的靜息代謝率。此外，在訓練階段，每日有4只動物于訓練后立即送入CaloSys系統(tǒng)，監(jiān)測運動后16-22小時的代謝水平。在耐力測試階段，將動物送入CaloSys系統(tǒng)，同時監(jiān)測代謝水平。 (4)標本的采集與保存 耐力測試結(jié)束后恢復2天，動物禁食6小時后，乙醚麻醉，斷頭處死，留血分離出血清，密封于-80℃凍存。應用放射免疫法測血胰島素水平。 2、由中國醫(yī)科大學實驗動物部提供健康斷乳雄性Wistar幼年大鼠30只，自行配制高脂飼料，基礎飼料由中國醫(yī)科大學實驗動物部提供。 (1)動物的分組與飼養(yǎng) 大鼠適應性喂養(yǎng)一周，隨機按體重分為2組(高脂組和對照組)，20只給予高脂飼料，10只給予正常飼料，兩組動物均自由進食水，每日紀錄體重和進食量，喂養(yǎng)4周。 (2) OP與OR鼠的判定 實驗結(jié)束時高脂組按體重由高至低排序，體重位于上游的前1／3大鼠判定為肥胖傾向大鼠，體重位于下游的后1／3大鼠判定為肥胖抵抗大鼠。 (3)標本的采集與處理 動物乙醚麻醉后斷頭處死，剝離全部附睪周、腎周脂肪墊并稱重，另取少量腹部皮下脂肪組織迅速于-70℃凍存。 (4)指標的檢測 Sirt1及其下游轉(zhuǎn)錄因子叉頭轉(zhuǎn)錄因子O1(forkhead transcription factor 1，F(xiàn)OXO1)和過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator activatedreceptorγ，PPARγ)的mRNA測定采用RT-PCR法，PPARγ蛋白測定采用Western-blot法。 3、統(tǒng)計分析：采用SPSS軟件分析。 結(jié)果 1、生酮飼料喂養(yǎng)正常大鼠，導致體重生長落后于對照組。兩組間血總蛋白水平無顯著差異，生酮飼料組的白蛋白水平高于對照組。單純應用生酮飼料干預大鼠，具有降低總膽固醇和胰島素水平的作用，但使甘油三酯含量顯著高于對照組。被迫運動造成大鼠進食量下降，但未影響動物正常生長。生酮飼料使動物呼吸商下降，雖然總的代謝率水平差異不顯著，但生酮飼料組動物運動后2小時內(nèi)的代謝水平顯著高于對照組。比較生酮飼料喂養(yǎng)大鼠與正常大鼠耐力測試結(jié)果差異不顯著。 2、傳統(tǒng)高脂飼料喂養(yǎng)大鼠，有肥胖傾向與肥胖抵抗現(xiàn)象，體重出現(xiàn)顯著性差異。mRNA表達半定量分析結(jié)果顯示，肥胖傾向與肥胖抵抗大鼠皮下與內(nèi)臟白色脂肪中的Sirt1、FOXO1和PPARγ的mRNA表達水平差異不顯著，同時都低于對照組�？偟膩砜矗逝謨A向與肥胖抵抗大鼠的PPARγ蛋白水平差別不大，但高脂飼料喂養(yǎng)動物皮下脂肪中的PPARγ蛋白水平都顯著低于對照組，內(nèi)臟脂肪中的PPARγ蛋白水平都顯著高于對照組。 結(jié)論 1、本實驗結(jié)果表明在等能量配對喂養(yǎng)條件下，用生酮高脂飲食干預正常大鼠，可能通過提高運動后代謝水平途徑起到減緩體重增長的作用，同時生酮飲食對大鼠運動能力的影響不大，提示我們應用生酮飲食結(jié)合適當鍛煉可作為調(diào)節(jié)體重的有效方法之一。另外在干預時應注意所用脂肪的類型。 2、傳統(tǒng)高脂高能量飲食對大鼠Sirt1、FOXO1和PPARγ的mRNA表達有抑制作用，調(diào)節(jié)Sirt1／FOXO1通路可成為預防肥胖的潛在的作用靶點。傳統(tǒng)高脂飼料喂養(yǎng)會導致脂肪更易于在內(nèi)臟貯存。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R723.14
【圖文】：

實驗日程圖3，生酮飼料與基礎飼料配對喂養(yǎng)大鼠體重增加對比三、生酮飼料與基礎飼料配對喂養(yǎng)大鼠血清指標比較.基礎飼料口生酮飼料總蛋白白蛋白圖4，生酮飼料與基礎飼料配對喂養(yǎng)大鼠血清蛋白比較

口生酮飼料.基礎飼料

本文編號：2755648