發(fā)布時間：2020-07-13 18:01

【摘要】：小兒支氣管哮喘是兒童常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病。近年來其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢,發(fā)達國家兒童哮喘的患病率高達10%以上。由于哮喘常反復(fù)發(fā)作,難以根治,所以嚴重影響患兒的身心健康,也給患兒家長帶來了沉重的經(jīng)濟負擔和精神壓力。本實驗室研究發(fā)現(xiàn)膜聯(lián)蛋白A3在哮喘大鼠淋巴細胞中表達上調(diào),因此我們推測膜聯(lián)蛋白A3可能在哮喘病的起因和形成等過程中發(fā)揮重要的作用。 本研究根據(jù)NCBI上報道膜聯(lián)蛋白A3的序列設(shè)計引物,克隆得到膜聯(lián)蛋白A3基因anx A3,經(jīng)測序鑒定序列與已報道的完全一致,其ORF為1026bp,編碼341個氨基酸。我們利用原核表達載體pEASY成功構(gòu)建了重組載體pEASY-anx A3,并在大腸桿菌Transetta(DE3) (DE3)中成功表達。利用鎳柱親和層析的原理,成功純化蛋白ANX A3。利用商業(yè)化抗體和Western Blot技術(shù)檢測鑒定,表達純化的蛋白為膜聯(lián)蛋白A3。我們用純化的蛋白ANX A3免疫兔子,抽取血清,提取并純化抗體。點印記實驗表明我們純化的抗體可用于ANX A3蛋白的鑒定。利用Western Blot實驗,檢測了正常兒童和哮喘患兒ANX A3蛋白的表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在哮喘發(fā)作期患兒淋巴細胞中ANX A3的表達上調(diào),進一步證實了ANX A3與小兒哮喘發(fā)作相關(guān),ANX A3將來有望成為小兒哮喘的診斷標識分子和治療的靶點。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R725.6
【圖文】：

RNA提取結(jié)果

第3章結(jié)果與討論一個長約1100bp的片段(圖3.2)。 M1ZB ~1100圖3.2目的基因PCR擴增 Fig.3.2PCRamPlifyofaoAJ M:nLZO00Marker;l，2:PCR產(chǎn)物;B:空白對照 M:DL20OOMarker:1， 2:PCRProduction:B:Blankeontrol(3)重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果將目的片段連接到博As丫Blunt載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)腸皿51一Tl。利用菌落PCR鑒定陽性轉(zhuǎn)化克隆，隨機選取3個陽性克隆(圖 3.3)。 MB123 1100bD圖3.3菌落PCR鑒定Fig.3·

~11003.2目的基因PCR擴增.3.2PCRamPlifyofaoAJ2:PCR產(chǎn)物;B:空白對照PCRProduction:B:Blankeontrol結(jié)果As丫Blunt載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感化克隆，隨機選取3個陽性克隆(圖

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 閆雪冬;潘凌亞;;卵巢上皮性癌細胞系鉑類藥物耐藥相關(guān)蛋白的比較蛋白質(zhì)組分析[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2006年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李善玉;支氣管哮喘大鼠淋巴細胞的差異表達蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2007年

本文編號：2753793