【摘要】： 目的：新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是新生兒常見疾病之一,是引起新生兒急性死亡和慢性神經(jīng)系統(tǒng)損傷的主要原因之一,目前尚無有效的治療方法。目前通過增強(qiáng)神經(jīng)保護(hù)機(jī)制和促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)來治療缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)逐漸受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注并已出現(xiàn)良好的勢頭。本實(shí)驗(yàn)通過建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)的模型,給予激活素A(Activin A, ACT A)干預(yù),觀察新生大鼠HIBD后腦組織病理變化,并測定各個時間點(diǎn)巢蛋白(nestin)的表達(dá),從而探討激活素A (Activin A, ACT A)對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷(HIBD)的保護(hù)作用和神經(jīng)修復(fù)功能及可能機(jī)制,以期為臨床治療新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)提供一定的指導(dǎo)。 方法：7日齡Wistar大鼠120只,雌雄不限,體重14±1g,隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組,HIBD模型組,ACT A治療組,每組40只,三組均根據(jù)處死時間不同又分為5個亞組：6h組、24h組、3d組、7d組、14d組,每亞組各8只。HIBD模型組和ACT A治療組均先制備HIBD模型,采用Rice法建立新生大鼠缺氧缺血腦損傷模型：假手術(shù)組給予頸正中切口游離左側(cè)頸總動脈,不進(jìn)行缺氧缺血,HIBD組及ACT A治療組游離并接扎左側(cè)頸總動脈后置于缺氧倉中(含8%氧氣和92%氮?dú)?2h,ACT A治療組于缺氧缺血后立即一次性腹腔注射激活素A (ACT A)1ml (0.005μg/ml),各組新生大鼠于相應(yīng)時間點(diǎn)斷頭取腦組織后肉眼觀察腦組織大體形態(tài)的改變,石蠟切片行HE染色光鏡下觀察左側(cè)腦組織病理變化,免疫組織化學(xué)方法檢測三組大鼠不同時間點(diǎn)左側(cè)腦組織巢蛋白(nestin)表達(dá)。 結(jié)果：(1)缺氧缺血后新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)缺氧缺血后可見腦組織大體可見不同程度的異常改變,ACT A治療后上述改變減輕。(3)HE染色：假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞層次清晰,神經(jīng)元排列整齊緊密,形態(tài)正常；HIBD組于術(shù)后6h-24h左側(cè)腦組織皮層細(xì)胞腫脹,神經(jīng)元排列紊亂,細(xì)胞間隙增大,海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞稀疏,3d病灶周圍神經(jīng)細(xì)胞壞死增多,膠質(zhì)細(xì)胞明顯增多,炎性細(xì)胞增多,7d后病變主要集中在皮層和海馬,神經(jīng)元壞死較多,細(xì)胞數(shù)目減少。14d神經(jīng)元大量消失,皮層、海馬形成膠質(zhì)瘢痕。ACT A治療組各時間點(diǎn)損傷程度較HIBD組明顯減輕,神經(jīng)細(xì)胞存活數(shù)量多,細(xì)胞排列尚規(guī)則。(4)免疫組織化學(xué)染色：nestin陽性染色呈棕黃色的細(xì)顆粒沉積,陽性細(xì)胞表達(dá)于大腦皮層和海馬,陽性著色主要位于胞質(zhì)和突起。假手術(shù)組中nestin表達(dá)弱,HIBD組各時間點(diǎn)陽性顆粒染色較之假手術(shù)組顏色深,陽性細(xì)胞數(shù)量較之假手術(shù)組增加明顯,24h表達(dá)增高,3d明顯增加,7d達(dá)高峰,14d表達(dá)下降,陽性細(xì)胞平均灰度值較之假手術(shù)組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。ACTA治療組陽性細(xì)胞較之HIBD組24h,3d,7d,14d時間點(diǎn)表達(dá)增高,細(xì)胞數(shù)目增加明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：(1)通過對缺氧缺血后新生大鼠行為能力的觀察以及大鼠腦組織病理學(xué)觀察,證實(shí)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型建立成功,并且ACT A治療后可減輕缺氧缺血所致的腦損傷。(2)ACT A可以減輕HIBD病理損傷過程,同時促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)再生,上調(diào)巢蛋白(nestin)標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)目,并使其維持在較高的表達(dá)水平,從而對缺氧缺血引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷起到一定的保護(hù)及修復(fù)作用,為臨床治療新生兒缺氧缺血性腦損傷,改善預(yù)后開辟新的治療思路。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R722.1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 閆煥利;HIF-1α及其抑制劑對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷時神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：2753109