【摘要】： 肥胖是一種常見的能量代謝性疾病,其檢出率逐年增高,已成為全球性的流行性疾病。肥胖與2型糖尿病、高血壓、心腦血管疾病等關(guān)系密切,是2型糖尿病等嚴(yán)重并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的高危因素。由于近年來肥胖與2型糖尿病發(fā)生的低齡化趨勢日趨突出,兒童與青少年肥胖與2型糖尿病之間的關(guān)系也開始受到兒科學(xué)者的關(guān)注。 脂肪組織在體內(nèi)過度積聚是肥胖的重要特征,胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞功能障礙則是2型糖尿病最主要的兩個病理生理學(xué)變化。長期以來,研究者一直試圖闡明肥胖與2型糖尿病之間的關(guān)系,擬以脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,如:游離脂肪酸(Free Fatty Acids,FFA)、腫瘤壞死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)、Leptin、Adiponectin等,來解釋胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞功能障礙的發(fā)生發(fā)展,但均未獲滿意結(jié)果。 Resistin,是近年來通過差減雜交實驗發(fā)現(xiàn)的、由脂肪細(xì)胞分泌的胰島素抵抗候選分子。由于:1)飲食性或遺傳性肥胖小鼠血漿Resistin濃度明顯升高,禁食或TZDs類抗糖尿病藥物應(yīng)用后其血漿濃度明顯降低;2)重組Resistin能使正常小鼠出現(xiàn)明顯的胰島素抵抗癥狀,而應(yīng)用Resistin中和抗體則能顯著改善胰島素抵抗的癥狀,因此Resistin被認(rèn)為是聯(lián)系肥胖與2型糖尿病的紐帶。 胰島素抵抗涉及骨骼肌、脂肪、肝臟、胰島等多個重要靶組織的功能變化。有關(guān)Resistin與骨骼肌、脂肪細(xì)胞胰島素抵抗關(guān)系的研究,近年來已有較多文獻(xiàn)報道,但對肝臟、胰島功能影響的研究卻并不多見,具體表現(xiàn)在:1)盡管有報道指出Resistin可嚴(yán)重影響肝細(xì)胞的糖代謝,但Resistin與肝細(xì)胞胰島素抵抗之間的關(guān)系及其具體機制卻并不清楚;2)葡萄糖刺激的胰島素分泌(Glucose stimulated insulinsecretion,GSIS)功能低下、胰島β細(xì)胞凋亡是構(gòu)成胰島β細(xì)胞功能障礙的兩個重要方面,盡管目前研究證實Resistin可引發(fā)胰島細(xì)胞的GSIS功能障礙,但尚未見有關(guān)Resistin與胰島β細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究報道。 本研究分別以大鼠肝細(xì)胞H4IIE、大鼠胰島β細(xì)胞株RINm5F為研究工具,以初步闡明Resistin與肝臟胰島素抵抗、Resistin與胰島β細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。采用飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠和3T3-L1前體脂肪誘導(dǎo)分化來初步探討Resistin的分泌。 第一部分Resistin對H4IIE肝細(xì)胞胰島素敏感性的影響及其機制 目的:觀察Resistin對肝臟胰島素敏感性的影響,并初步探討其機制。方法:1)體外培養(yǎng)大鼠H4IIE肝細(xì)胞株,以重組Resistin蛋白干預(yù)H4IIE肝細(xì)胞,通過檢測胰島素刺激的糖原合成,評估肝細(xì)胞胰島素敏感性的變化;2)以Resistin干預(yù)的H4IIE肝細(xì)胞為研究對象,采用Western Blot技術(shù)測定胰島素受體后信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中IRS-1、Akt、GSK-3β的總蛋白水平和磷酸化水平,采用RT-PCR、Western Blot技術(shù)檢測IRS負(fù)性調(diào)節(jié)因子SOCS-3的mRNA水平、蛋白水平,初步分析Resistin影響肝細(xì)胞胰島素敏感性的機制;3)體外合成SOCS-3特異的ASO(anti-sense oligo),轉(zhuǎn)染H4IIE肝細(xì)胞株以抑制SOCS-3的表達(dá),以重組Resistin蛋白干預(yù)轉(zhuǎn)染有SOCS-3特異ASO的H4IIE肝細(xì)胞,通過檢測胰島素刺激的糖原合成,驗證SOCS-3在Resistin致肝細(xì)胞胰島素敏感性變化機制中的作用。結(jié)果:1)Resistin對胰島素刺激的肝細(xì)胞糖原合成具有抑制作用;2)Resistin抑制肝細(xì)胞中IRS-1、Akt、GSK-3β的活性,對IRS-Akt-GSK3整條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有抑制作用;3)Resistin上調(diào)肝細(xì)胞中IRS負(fù)性調(diào)節(jié)因子SOCS-3的mRNA水平、蛋白水平,SOCS-3特異ASO的應(yīng)用能顯著改善Resistin對胰島素刺激的肝細(xì)胞糖原合成的抑制作用。結(jié)論:1)Resistin可降低肝細(xì)胞的胰島素敏感性,誘導(dǎo)肝細(xì)胞胰島素抵抗;2)Resistin可能通過激活SOCS-3的機制,抑制胰島素受體后信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的作用,導(dǎo)致肝細(xì)胞胰島素抵抗。 第二部分Resistin對大鼠胰島β細(xì)胞功能的影響 目的:探討Resistin對胰島β細(xì)胞功能的影響,評價凋亡抑制蛋白TIMP-1在逆轉(zhuǎn)Resistin致胰島β細(xì)胞凋亡中的作用。方法:體外培養(yǎng)RINm5F大鼠胰島β細(xì)胞株,以重組Resistin蛋白或/和TIMP-1干預(yù)RINm5F胰島β細(xì)胞,MTT法檢測細(xì)胞活性,以Caspase-3活性、DNALadder等凋亡特異性檢測指標(biāo)鑒定細(xì)胞凋亡,Western Blot檢測IκB-α總蛋白和磷酸化水平。結(jié)果:1)大劑量(200ng/ml)Resistin能顯著降低RINm5F胰島β細(xì)胞的細(xì)胞活性,TIMP-1則能逆轉(zhuǎn)由Resistin引起的RINm5F胰島β細(xì)胞活性降低;2)Resistin誘導(dǎo)RINm5F胰島β細(xì)胞凋亡,TIMP-1則對Resistin誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡具有拮抗作用;3)Resistin能顯著上調(diào)IκB-αser32位點的磷酸化活性,TIMP-1則能抑制IκB-αser32位點磷酸化活性的上調(diào)。結(jié)論:1)Resistin可影響胰島β細(xì)胞的功能,具有誘導(dǎo)RINm5F胰島β細(xì)胞凋亡的作用;2)Resistin可能通過上調(diào)IκB-αser32位點磷酸化活性的機制,誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡;3)TIMP-1可能夠通過抑制IκB-αser32位點磷酸化活性的機制,拮抗Resistin對RINm5F胰島β細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。 第三部分3T3-L1脂肪細(xì)胞與飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠Resistin的分泌 目的:初步探討影響Resistin分泌的調(diào)節(jié)因素。方法:1)體外培養(yǎng)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞株,誘導(dǎo)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化為成熟的脂肪細(xì)胞,于3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化過程的第0、4、6、8天收集細(xì)胞培養(yǎng)的上清;2)以高能量飼料誘導(dǎo)SD大鼠,制備飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型,模型制備成功后采集大鼠血清;3)ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清、大鼠血清中的Resistin水平。結(jié)果:1)隨3T3-L1前體脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化,細(xì)胞培養(yǎng)上清中的Resistin分泌量逐漸增加;2)肥胖大鼠血清中的Resistin水平顯著高于正常對照大鼠。結(jié)論:1)脂肪細(xì)胞分泌Resistin的水平與脂肪細(xì)胞的成熟度有關(guān);2)Resistin的分泌與機體的營養(yǎng)狀態(tài)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R723.14;R725.8

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 韓學(xué)堯,紀(jì)立農(nóng),周翔海;2型糖尿病一級親屬病理生理和臨床特征的橫斷面研究[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

2 宋穎;李啟富;田波;鐘立;楊淑敏;夏偉;畢小云;;多囊卵巢綜合征患者血清游離脂肪酸水平測定及其相關(guān)因素分析[J];重慶醫(yī)學(xué);2012年16期

3 張磊,劉彥君,金真;磁共振氫譜對胰島素抵抗及Ⅱ型糖尿病的研究[J];放射學(xué)實踐;2005年03期

4 吳更,賈偉平;骨骼肌脂質(zhì)與胰島素抵抗:研究方法與意義[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊;2004年03期

5 陳弼滄;吳秋英;;糖耐量異常與動脈粥樣硬化的關(guān)系及中藥干預(yù)研究進展[J];甘肅中醫(yī);2006年01期

6 龍志芳;杜雪立;;胰島素抵抗的細(xì)胞機理[J];河北師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年06期

7 何勁;宋道飛;;降糖丸干預(yù)對2型糖尿病胰島素敏感性的影響[J];湖北中醫(yī)雜志;2009年07期

8 楊華;張戈;;高血壓人群中體質(zhì)指標(biāo)與游離脂肪酸的相關(guān)性[J];吉林醫(yī)學(xué);2009年04期

9 韓路軍;張雪林;;心肌~1H-MRS的臨床應(yīng)用[J];臨床放射學(xué)雜志;2010年01期

10 周鵬;關(guān)黎清;葉爾肯·多森拜克;;脂毒性對肥胖人群胰島素抵抗的影響[J];臨床內(nèi)科雜志;2007年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張亞非;2型糖尿病的流行病學(xué)及營養(yǎng)干預(yù)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

2 龔海霞;Resistin及其結(jié)合多肽與3T3-L1細(xì)胞分化關(guān)系的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2004年

3 肖_g君;多不飽和脂肪酸對大血管病變保護作用機制的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2004年

4 盛希群;硒與糖尿病關(guān)系的研究[D];華中科技大學(xué);2004年

5 姜淼;黃連人參對藥改善2型糖尿病胰島素抵抗機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2006年

6 郭艷英;β_3-AR基因及PPAR-γ_2基因復(fù)合變異與新疆哈薩克族人群代謝綜合征的關(guān)系[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

7 劉毅;長期高脂飲食對大鼠骨骼肌胰島素敏感性的影響及機制探討[D];山東大學(xué);2006年

8 陸志明;高游離脂肪酸誘導(dǎo)血管局部氧化應(yīng)激損傷的分子機制及中藥干預(yù)研究[D];四川大學(xué);2006年

9 王世東;清熱益氣中藥配伍治療2型糖尿病機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

10 王保平;高脂致糖尿病大鼠β細(xì)胞功能障礙的機制及胰島素治療作用的研究[D];華中科技大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 胡海波;非諾貝特微球制備和藥動學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

2 劉賢明;胃旁路術(shù)對營養(yǎng)性肥胖大鼠脂代謝影響的實驗研究[D];暨南大學(xué);2011年

3 鄭禎;游離脂肪酸與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)系[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

4 王國強;基于脂肪細(xì)胞FFA外溢評價人參皂苷Rb1抗糖尿病作用[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

5 華海茵;糖尿病腎病相關(guān)脂肪酸代謝研究[D];清華大學(xué);2010年

6 王寧;~1H-MRS對Ⅱ型糖尿病周圍神經(jīng)病變定性診斷的研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2011年

7 蔡鳳麗;燕麥產(chǎn)品的降血糖功效和機理研究[D];鄭州輕工業(yè)學(xué)院;2011年

8 王先令;阿卡波糖治療對糖耐量低減患者血清C反應(yīng)蛋白水平和游離脂肪酸譜影響的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2002年

9 馬慧娟;糖耐量減低和2型糖尿病患者血脂肪酸與胰島素抵抗關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2002年

10 杜云峰;小鼠過氧化物酶體增殖體激活受體γ_1高表達(dá)對游離脂肪酸介導(dǎo)的βTC3細(xì)胞損傷的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2003年

本文編號：2752839