發(fā)布時間：2020-07-12 15:50

【摘要】： 慢性腎臟病(chronic kidney disease, CKD)是嚴(yán)重威脅人類健康和生命的常見病之一,其發(fā)病率高、進展至終末期腎病(end stage renal disease, ESRD)死亡率高,給患者和家庭帶來巨大的經(jīng)濟和精神負(fù)擔(dān),并消耗大量的社會衛(wèi)生資源,已成為全球面臨的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題。流行病學(xué)調(diào)查顯示,CKD發(fā)病呈現(xiàn)年輕化趨勢,不少尿毒癥患者年齡僅有二三十歲。由此預(yù)測,兒童中的CKD不僅是兒童時期ESRD的重要病因,這部分患兒還將成為成年期CKD乃至ESRD的高�；疾∪后w。因此,兒童CKD同樣需引起重視。 面對CKD的嚴(yán)峻挑戰(zhàn),如何早期發(fā)現(xiàn)CKD高危人群,并及時有效干預(yù),是延緩CKD進展、減少ESRD發(fā)生、改善預(yù)后的重要途徑。另外,對部分進展至ESRD的兒童進行安全有效的腎替代治療、延長生命、提高生活質(zhì)量,同樣至關(guān)重要。因此,本研究就兒童CKD的早期發(fā)現(xiàn)和終末期腹透治療透析液生物相容性兩方面,展開進一步研究。 為探討兒童CKD早期發(fā)現(xiàn)的策略,本研究首先通過中小學(xué)生學(xué)校尿液篩查,分析上海市部分地區(qū)兒童血尿／蛋白尿的檢出率,評價不同的尿液篩查方法和篩查的合適年齡段,并根據(jù)隨訪資料及病例回顧性分析,進一步探討學(xué)校尿液篩查對兒童CKD早期發(fā)現(xiàn)的意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)一次尿檢血尿(隱血)和／或蛋白尿者超過5%,兩次均陽性者占1%；進一步通過四種不同篩查方案的比較,發(fā)現(xiàn)二次尿液試紙目測法既簡便經(jīng)濟,又具備一定的敏感性和特異性,是值得推廣的篩查方案；而篩查的適宜年齡段仍需更大樣本量的研究而進一步明確。 本研究篩查尿檢異常者的隨訪率較低(24%),但3年間67名長期隨訪的兒童中確診了3例IgA腎病；其中一例雖然臨床僅表現(xiàn)為無癥狀蛋白尿伴鏡下血尿,但腎活檢病理提示近40%腎小球硬化；經(jīng)積極治療,隨訪3年后尿檢正常,腎功能正常。進一步對我科1979-2009年腎活檢確診的158例兒童原發(fā)IgA腎病回顧性分析發(fā)現(xiàn),無癥狀尿檢異常者為33例(20.9%),其中有10%(3／33)患兒腎臟病理損害嚴(yán)重,該比例與有癥狀組中病理損害嚴(yán)重者占的比例(12／125)相似,提示學(xué)校尿液篩查對于早期發(fā)現(xiàn)這部分臨床無典型癥狀、隱匿起病但病理改變嚴(yán)重的重癥患兒具有重要的作用。 兒童CKD雖經(jīng)早期發(fā)現(xiàn)并合理干預(yù),仍有少部分會進展至ESRD。對這部分重癥患兒的精心治療同樣至關(guān)重要,目前由于腎源的緊缺,腹膜透析為兒童首選的腎替代治療方法。然而長期暴露于傳統(tǒng)的非生物相容性的腹透液(peritonealdialysis fluid, PDF)會導(dǎo)致腹膜間皮細(xì)胞(human peritoneal mesothelial cells, HPMC)損傷、脫落,腹膜纖維化和新生血管形成,最終導(dǎo)致超濾衰竭,腹透治療失敗。因此,新型腹透液相繼問世,以pH中性、葡萄糖降解產(chǎn)物水平低為特點的“新型腹透液”具有較好的生物相容性,能保護HPMC的生物活性和功能,維持腹膜穩(wěn)定性,改善腹膜超濾功能,延長ESRD患者的存活率。本課題著重于目前已應(yīng)用于臨床的兩種新型腹透液,研究其緩沖體系的差異,即碳酸氫鹽緩沖腹透液(bicarbonate-buffered PDF, B-PDF)和乳酸鹽緩沖腹透液(lactate-buffered PDF, L-PDF)對一個腹膜功能關(guān)鍵蛋白——水通道蛋白-1 (aquaporin-1, AQP1)表達(dá)和相關(guān)功能的影響,探討臨床慢性腹透患者透析液選擇的依據(jù)。 為研究不同腹透液對HPMC AQP1表達(dá)的影響,首先通過實時熒光定量PCR和western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn),B-PDF能夠以時間依賴的方式上調(diào)HPMC AQP1的表達(dá)；而L-PDF則以時間、劑量依賴的方式下調(diào)AQP1的表達(dá)。另外,細(xì)胞免疫熒光實驗也證實B-PDF刺激的間皮細(xì)胞膜上以及胞漿內(nèi)有更強的AQP1熒光信號。為進一步研究B-PDF和L-PDF pH值的微小差異(7.4 vs 7.0)對AQP1表達(dá)的影響,分別用NaOH或HCl調(diào)節(jié)腹透液pH值,結(jié)果顯示,隨pH值上升,B-PDF進行性上調(diào)HPMC AQP1 mRNA的表達(dá)水平；而L-PDF對AQP1表達(dá)的調(diào)節(jié)則無pH相關(guān)性,提示pH值不單獨發(fā)揮調(diào)節(jié)效應(yīng)。 為研究不同腹透液對HPMC遷移能力的影響,分別采用Transwell遷移實驗、細(xì)胞劃痕實驗以及實時顯微鏡三種方法檢測不同腹透液對HPMC遷移能力的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與L-PDF相比,B-PDF能顯著增加HPMC的遷移能力和損傷修復(fù)能力。并進一步通過siRNA干擾實驗發(fā)現(xiàn),AQP1而非AQP3參與調(diào)節(jié)HPMC的遷移和損傷修復(fù)能力,并且不同腹透液對HPMC遷移能力的影響是AQP1所依賴的。 此外,為研究不同腹透液對腹膜鈉過篩的影響,進一步通過大鼠腹膜平衡實驗觀察大鼠腹膜的鈉過篩效應(yīng),結(jié)果顯示,與L-PDF相比,B-PDF刺激的腹膜有較快較強的鈉過篩效應(yīng),提示其可能實現(xiàn)更好的超濾作用。 綜上所述,本研究通過對上海市部分中小學(xué)生的尿液篩查以及回顧性病例資料分析,發(fā)現(xiàn)“健康”兒童具有一定的尿檢陽性率,而二次尿液試紙目測法是值得推廣的篩查方案,病例隨訪和回顧性資料分析進一步肯定了尿液篩查在早期發(fā)現(xiàn)兒童CKD的意義；并關(guān)注兒童ESRD腹透治療透析液的生物相容性,通過體外原代細(xì)胞培養(yǎng),研究不同腹透液對腹膜間皮細(xì)胞AQP1表達(dá)和功能的影響,發(fā)現(xiàn)與L-PDF相比,B-PDF能上調(diào)HPMC AQP1的表達(dá)水平,并通過AQP1的作用增加細(xì)胞的遷移和損傷修復(fù)能力；進一步通過動物實驗研究不同腹透液對腹膜鈉過篩的影響,發(fā)現(xiàn)B-PDF較L-PDF能增加腹膜的鈉過篩效應(yīng)。比較兩種新型腹透液發(fā)現(xiàn),B-PDF可能更好的保護腹膜細(xì)胞功能,維持腹膜穩(wěn)定性和超濾作用,具有更好的生物相容性。對于新型腹透液生物相容性的深入研究有助于增進新型腹透液與腹膜之間相互作用的了解,還將為臨床長期慢性腹透患兒透析液的選擇提供實驗和理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R726.9
【圖文】：

養(yǎng)液(Medium)和含有2.3%葡萄糖的M199培養(yǎng)液(M一glu)分別作為普通對照組和含糖對照組。24小時后，裂解細(xì)胞，抽提總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成eDNA后實時熒光定量PCR檢測 AQPImRNA的表達(dá)水平。如圖2.1所示，與Meditun對照組相比較，B一PDF顯著上調(diào) HPMCAQp1mRNA的表達(dá)水平209士80%(P<0.001);而L一PDF則顯著下調(diào) HPMcAQPImRNA的表達(dá)水平48士18%(P<0.01)。比較B一PDF與L一PDF發(fā)現(xiàn)，即 MCAQPImRNA的表達(dá)水平在B一PDF組較L一PDF組上調(diào)427士 173%(P<0.001)。350「一’}***}---一l

本文編號：2752177