【摘要】： 目的缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是圍產(chǎn)期窒息的一個重要并發(fā)癥,也是新生兒期的常見病,嚴(yán)重威脅新生兒的生命和健康,并可導(dǎo)致兒童永久傷殘,至今缺乏理想有效的治療手段。對眾多動物模型的研究已證實:環(huán)境刺激及身體自愿物理運動可以誘導(dǎo)大腦結(jié)構(gòu)及功能的改變。本試驗將豐富環(huán)境刺激及水療運用于7日齡(postnatal day 7,P7)HIBD新生大鼠,予以不同方法對新生大鼠HIBD進(jìn)行干預(yù),檢測大鼠的體重,學(xué)習(xí)記憶能力,患側(cè)海馬的病理形態(tài)學(xué)改變和透射電鏡下超微結(jié)構(gòu)變化,以及大鼠海馬N-甲基-D-天門冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體蛋白的表達(dá),探討豐富環(huán)境刺激和水療對發(fā)育期腦損傷的作用效果及其可能的機(jī)制,旨在為臨床治療新生兒缺氧缺血性腦病,促進(jìn)患兒腦功能的恢復(fù)提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。 方法采用Rice法建立P7大鼠HIBD模型,分為干預(yù)組與非干預(yù)組,另設(shè)假手術(shù)對照組。干預(yù)組又分為豐富環(huán)境組、水療組、豐富環(huán)境+水療組,在缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)第2天分別予相應(yīng)干預(yù)治療,持續(xù)28 d。于生后不同時點(15d,22d,29d,36d)檢測大鼠體重,以免疫組織化學(xué)法檢測海馬CA1區(qū)NMDA受體NR1亞單位的表達(dá),HE染色觀察生后36d時相點大鼠患側(cè)海馬病理形態(tài)學(xué)改變,干預(yù)結(jié)束后(生后37d)利用Morris水迷宮測定各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,并于生后40d利用透射電鏡觀察海馬超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果: 1.體重上,HI后8d(生后15d),假手術(shù)組顯著高于干預(yù)組與非干預(yù)組(p＜0.01),干預(yù)組與非干預(yù)組無顯著差異(p＞0.05);HI后15d,22d及29d(生后22d,29d及36d),干預(yù)組和假手術(shù)組顯著高于非干預(yù)組(p＜0.01),干預(yù)組與假手術(shù)組無顯著差異(p＞0.05)。 2.新生大鼠HI后8d,各組HIBD大鼠均出現(xiàn)不同程度的左側(cè)腦組織萎縮,伴有發(fā)白梗死區(qū)、軟化灶等組織病理改變,其中非干預(yù)組最明顯。HI后29d(生后36d),HE染色見假手術(shù)組雙側(cè)海馬結(jié)構(gòu)清晰,布局有序,神經(jīng)元形態(tài)正常,排列整齊。干預(yù)組左側(cè)海馬輕度異常,神經(jīng)元排列稍紊亂,可見少量細(xì)胞丟失。非干預(yù)組左側(cè)海馬明顯異常,細(xì)胞層數(shù)減少,大量細(xì)胞丟失,神經(jīng)元排列稀疏、散亂,細(xì)胞間隙增大,核仁不清,可見核固縮、核碎裂。 3.透射電鏡下,HI后33d(生后40d),假手術(shù)組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)正常,染色質(zhì)密度中等,突觸發(fā)育成熟,突觸小泡豐富,突觸后膜致密物(postsynaptic density,PSD)多,結(jié)構(gòu)致密。干預(yù)組左側(cè)大鼠海馬神經(jīng)元無明顯病理改變,突觸小泡和PSD略有減少,其中又以豐富環(huán)境組及豐富環(huán)境+水療組稍好。非干預(yù)組大鼠見左側(cè)海馬神經(jīng)元固縮改變,核膜皺折,染色質(zhì)致密,突觸小泡和PSD明顯減少。 4.HI后29d(生后36d),干預(yù)組、假手術(shù)組海馬CA1區(qū)NR1表達(dá)明顯強于非干預(yù)組,其中豐富環(huán)境組、豐富環(huán)境+水療組與假手術(shù)組無顯著差異(p＞0.05),水療組仍明顯弱于假手術(shù)組。 5.Morris水迷宮實驗中,干預(yù)組、假手術(shù)組大鼠測試成績明顯優(yōu)于非干預(yù)組(p＜0.01),其中豐富環(huán)境組、豐富環(huán)境+水療組與假手術(shù)組無顯著差異(p＞0.05),而單純水療組明顯低于假手術(shù)組(p＜0.01)。 結(jié)論: 1.7日齡大鼠采用Rice法制成HIBD模型,非干預(yù)組大鼠體重在HI后增長緩慢;無論是HE染色還是電鏡觀察結(jié)果,非干預(yù)組大鼠患側(cè)腦組織均可見明顯的病理形態(tài)學(xué)改變;其遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力降低,均證實本實驗HIBD動物模型建立成功可行。 2.與非干預(yù)組HIBD大鼠相比,干預(yù)組HIBD大鼠體重經(jīng)過一短暫緩慢增長期后進(jìn)入快速增長期,體重增長明顯,并且海馬病理損害減輕,其遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力增強,提示豐富環(huán)境刺激及水療有利于體格發(fā)育及腦損傷修復(fù)。 3.新生大鼠HIBD后期存在海馬NMDA受體的表達(dá)下調(diào),降低了HIBD新生大鼠海馬內(nèi)的突觸傳遞效能,而豐富環(huán)境刺激和水療能有效改善HIBD新生大鼠發(fā)育過程中海馬內(nèi)的突觸傳遞,增強突觸可塑性。NMDA受體在海馬表達(dá)的變化可能是豐富環(huán)境刺激和水療促進(jìn)HIBD新生鼠腦功能恢復(fù)的機(jī)制之一。 4.豐富環(huán)境、豐富環(huán)境聯(lián)合水療干預(yù)HIBD大鼠,其海馬CA1區(qū)NR1蛋白表達(dá)量以及大鼠遠(yuǎn)期空間學(xué)習(xí)記憶能力幾乎恢復(fù)到正常水平,而單純水療干預(yù)HIBD大鼠,其海馬CA1區(qū)NR1蛋白表達(dá)量及遠(yuǎn)期空間學(xué)習(xí)記憶能力明顯低于假手術(shù)組,提示單純水療不如豐富環(huán)境刺激、豐富環(huán)境刺激聯(lián)合水療的干預(yù)效果。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 姚國恩,王景周,陳曼娥;血管性癡呆大鼠認(rèn)知障礙的NMDAR機(jī)制研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年12期

本文編號：2742566