【摘要】：目的 本實(shí)驗(yàn)建立新生鼠缺氧缺血腦損傷(HIBD)模型，觀察了HIBD后新生鼠腦組織caspase-3mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)一步探討缺氧缺血誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡的機(jī)制及意義；1，6-二磷酸果糖(FDP)是否通過(guò)影響凋亡調(diào)控基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)抗凋亡作用，尚不明確，本研究觀察了FDP對(duì)HIBD后新生鼠腦組織caspase-3基因表達(dá)的影響，來(lái)探討FDP腦保護(hù)作用的分子機(jī)制，為其臨床治療HIBD提供更深層次的理論依據(jù)。 方法 1．制備HIBD模型：新生7日齡Wistar大鼠行頸正中切口，分離結(jié)扎左頸總動(dòng)脈給予低氧(8％氧氣+92％氮?dú)?處理2小時(shí)，制成HIBD模型。觀察動(dòng)物行為變化，后于相應(yīng)時(shí)點(diǎn)取材光鏡下觀察腦組織病理改變。 2．Caspase-3 mRNA表達(dá)測(cè)定：將7日齡Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組、HIBD6h、24h、3d、5d組，每組5只動(dòng)物，應(yīng)用RT-PCR方法測(cè)定。 3．FDP神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的研究：將7日齡Wistar大鼠隨機(jī)分為HIBD對(duì)照組、鹽水組、FDP治療組，于缺氧缺血后立即給藥，其中FDP組又分為大、中、小劑量組，每組5只動(dòng)物，應(yīng)用RT-PCR觀察24小時(shí)后caspase-3mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果 1．動(dòng)物模型行為表現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)前各組新生鼠行為能力正常；HIBD組：進(jìn)入低氧環(huán)境后5-10min出現(xiàn)躁動(dòng)不安、翻滾，隨后逐漸出現(xiàn)肌肉顫動(dòng)、頭顫、翻身不能，甚至抽搐與意識(shí)障礙(如嗜睡)，嚴(yán)重于低氧過(guò)程中死亡，行為障礙一般在HI后很快消失；假手術(shù)組：未見(jiàn)行為異常表現(xiàn)。 天津醫(yī)界延才學(xué)碩全研蕪生學(xué)少淪丈 2.HE染色及光鏡檢查結(jié)果: 假手術(shù)組:腦組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞層次清楚，神經(jīng)元形態(tài)正常，無(wú)腦水腫; HIBD6h:出現(xiàn)輕度腦水腫，神經(jīng)元胞體輕度皺縮，胞漿呈均勻粉紅色，胞 核固縮; HIBD24樹(shù)72h:腦水腫程度加重，神經(jīng)元排列紊亂，胞體極度皺縮，胞漿深 染，核濃縮，伴膠質(zhì)細(xì)胞增生; HIBD5d:腦水腫減輕，膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，可見(jiàn)嗜神經(jīng)現(xiàn)象。 3.CasPase一3 mRNA動(dòng)態(tài)變化:假手術(shù)對(duì)照組即有相對(duì)高水平caspase一3 mRNA表達(dá)，HIBD6h其表達(dá)明顯增高(與對(duì)照組比較有顯著性差異， P0 .01)，24h達(dá)高峰，此后逐漸下降，HIBD5d其表達(dá)仍維持較高水平 (與對(duì)照組比較具有顯著性差異，P0.01)。 4.FDP的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制研究:鹽水組和HIBD組caspase一3基因表達(dá)無(wú)顯著 性差異(P0.05)，F(xiàn)DP小劑量組與鹽水組和HIBD對(duì)照組相比easpase一3 基因表達(dá)亦無(wú)顯著性差異(P0.05)，F(xiàn)DP大、中劑量組其表達(dá)均有不同程 度的下調(diào)，同以上三組比較均有顯著性差異(P0.05)，F(xiàn)DP大、中劑量組 相比無(wú)顯著性差異(P.05)。 結(jié)論 1，通過(guò)對(duì)HIBD后動(dòng)物行為能力觀察及其腦組織病理學(xué)檢查，證實(shí)新生鼠 HIBD模型制作成功。 2.缺氧缺血可誘導(dǎo)新生鼠腦組織caspase一3 mRNA表達(dá)，其過(guò)度表達(dá)在 HIBD后神經(jīng)元凋亡的調(diào)控中起一定的作用，針對(duì)caspase一3的治療對(duì)策為圍 產(chǎn)期缺氧缺血性腦損傷打開(kāi)了新視窗。 3.FDP的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制可能與下調(diào)腦組織caspase一3基因表達(dá)有關(guān)，從而起 到抗凋亡作用。為FDP對(duì)HIBD的臨床治療提供了更深層次的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R722.121

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本文編號(hào)：2740704