發(fā)布時(shí)間：2020-07-01 07:38

【摘要】： 背景與目的： 支氣管哮喘是一種常見的呼吸道疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未被完全闡明。已證實(shí)其發(fā)生過程受到遺傳、免疫調(diào)控和環(huán)境等多重因素的影響。近年來隨著對(duì)過敏性哮喘研究的深入，越來越多的證據(jù)表明過敏性支氣管哮喘與Th1／Th2細(xì)胞比例失衡密切相關(guān)。初始Th細(xì)胞分化為Th1型或Th2型細(xì)胞需要一些特異性轉(zhuǎn)錄因子的相互作用。新發(fā)現(xiàn)T-bet和GATA3是在Th細(xì)胞分化為Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞過程中起重要作用的兩種轉(zhuǎn)錄因子。T-bet屬于T盒家族的轉(zhuǎn)錄因子，是Th1類細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子，在初始T細(xì)胞分化為Th1細(xì)胞過程中被特異性上調(diào)表達(dá)，促使細(xì)胞Th1型應(yīng)答優(yōu)勢(shì)，同時(shí)，T-bet也可以抑制GATA3的功能。GATA3屬C4鋅指結(jié)構(gòu)家族成員，可以誘導(dǎo)Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，對(duì)早期T淋巴細(xì)胞形成及Th2細(xì)胞的定向分化具有重要作用，同時(shí)可以通過下調(diào)STAT4和IL-12Rβ2鏈的途徑來抑制Th1型細(xì)胞分化。在哮喘患者，主要表現(xiàn)為Th2型細(xì)胞的數(shù)量增多，使體液免疫應(yīng)答占優(yōu)勢(shì)。B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞，大量產(chǎn)生IgE，誘發(fā)Ⅰ型超敏反應(yīng)，從而引發(fā)支氣管的慢性炎癥。特異性免疫治療(specific immunotherapy，SIT)是WHO推薦，哮喘治療中唯一的對(duì)因治療方法。自1911年Noon和Freeman首先將變應(yīng)原特異性免疫治療應(yīng)用于變態(tài)反應(yīng)臨床治療以來，已經(jīng)取得了較好的效果，但至今對(duì)其治療機(jī)制不甚明了。本研究以哮喘患兒為研究對(duì)象，分析SIT治療前后轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA3在PBMCs(Peripheral Blood Mononuclear Cell外周血單個(gè)核細(xì)胞)的表達(dá)變化，揭示其在SIT中的作用，為哮喘治療和新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。 方法： 本實(shí)驗(yàn)選取的36例過敏性哮喘患兒來自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科門診，其中男性19例，女性17例；年齡6～14歲，平均年齡12.5歲。按照治療前，治療15周和治療51周分為三組，每組12人。所有病例有明確的哮喘病史和癥狀，符合支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)。皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)塵螨抗原陽性，采用Alutard屋塵螨變應(yīng)原制劑(ALK丹麥)脫敏方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化脫敏治療。分別于治療前、治療15周(此時(shí)為最大劑量)、治療51周后采集靜脈血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，提取總RNA放入-80℃冰箱保存。待RNA收集完成后，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。設(shè)計(jì)β-actin，T-bet，GATA3三對(duì)特異性引物，用熒光PCR的方法分別檢測(cè)T-bet，GATA3相對(duì)β-actin的表達(dá)變化，用2~(-ΔΔct)的方法進(jìn)行分析。 結(jié)果： 隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，15周時(shí)T-bet相對(duì)β-actin的表達(dá)是治療前的2.96倍，51周時(shí)，是治療前的0.35倍；15周時(shí)GATA3相對(duì)β-actin表達(dá)，是治療前的0.75倍；51周時(shí)，GATA3相對(duì)表達(dá)是治療前的0.09倍。T-bet／GATA3的比值隨著治療的進(jìn)展逐漸增高。15周時(shí)是治療前的3.78倍，一年時(shí)是治療前的4.69倍。 結(jié)論： 本試驗(yàn)表明在脫敏治療前后患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子T-bet基因表達(dá)水平相對(duì)與GATA3升高，表明轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA3在哮喘脫敏治療中起重要作用。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R725.6
【圖文】：

4.1目的基因擴(kuò)增結(jié)果:以逆轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，利用PCR擴(kuò)增得到p一actin，T一bet，GATA3三個(gè)目的基因，片段長(zhǎng)度分別為25obp，loZbp，loobp。見圖1。

本文編號(hào)：2736477