【摘要】： 白血病是造血系統(tǒng)的惡性疾病,是國(guó)內(nèi)十大高發(fā)惡性腫瘤之一,其特點(diǎn)為造血組織中某一類型的白血病細(xì)胞在骨髓或其他造血組織中惡性增生,并浸潤(rùn)體內(nèi)各臟器、組織,導(dǎo)致正常造血細(xì)胞受抑制,產(chǎn)生各種癥狀。急性白血病中一部分病例因化療耐藥,效果不佳,并發(fā)癥多者預(yù)后較差。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展與進(jìn)步,急性白血病的治療水平也有了很大提高,積極預(yù)防治療并發(fā)癥,提高機(jī)體抗病能力,可以挽救患者生命�，F(xiàn)在,白血病的治療方法有化療、中西醫(yī)結(jié)合治療、骨髓移植、生物調(diào)節(jié),而目前基因治療白血病是研究領(lǐng)域的難點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。我國(guó)白血病患者約為3-4人/10萬(wàn)人口,小兒的惡性腫瘤中以白血病的發(fā)病率最高。由于白血病的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,困擾著臨床治療,因此闡明白血病的發(fā)病機(jī)制,進(jìn)一步研究基因在兒童白血病發(fā)病機(jī)制中的作用,應(yīng)用基因來(lái)達(dá)到治療目的是一條新的途徑。 原癌基因BMI-1(B-cell specific moloney leukemia virus insertion site 1, BMI-1)屬于PcG (Polycomb group, PcG)家族中PRCI復(fù)合體系,與其他各種PcG蛋白一起通過(guò)形成多蛋白復(fù)合體參與同源盒基因(homobox, HOX)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),維持HOX的抑制狀態(tài)。HOX在決定細(xì)胞定向分化與增殖,調(diào)控機(jī)體組織器官發(fā)育方面起決定性作用,BMI-1基因表達(dá)異常導(dǎo)致HOX基因表達(dá)抑制或激活異常,影響HOX基因正常功能的發(fā)揮。PcG介導(dǎo)的基因沉默是局部事件,不會(huì)影響較大范圍的染色質(zhì)區(qū)域,調(diào)節(jié)基因表達(dá)的中心環(huán)節(jié)是BMI-1,其他的PcG蛋白影響很小。研究提示PcG蛋白家族中的BMI-1和Ring1B是PRC1復(fù)合體的核心亞單位,該復(fù)合體在調(diào)節(jié)HOX基因表達(dá)、X染色體失活、腫瘤發(fā)生和干細(xì)胞自我更新中發(fā)揮重要作用。越來(lái)越多的證據(jù)表明,HOX基因在白血病的形成中起到了重要的作用。HOX家族基因廣泛的分為兩大類：HOX基因和non—HOX基因。HOX家族中HOXA9、HOXA10、HOXB3、HOXB4、HOXB6在許多急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia, AML)患者中�？蓹z測(cè)到高水平的表達(dá)。HOXA9在AML中表達(dá)較為普遍,除FAB分型為M3型的AML外均高度表達(dá),在慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloegenous leukemia, CML)和骨髓增生異常綜合征-原始細(xì)胞增多型(myelodysplastic syndrome, MDS-RAEB)中也有表達(dá)。在24個(gè)白血病細(xì)胞系中,8個(gè)髓系白血病細(xì)胞株除HL60、TMM外均可檢測(cè)到HOXA9的表達(dá),HOXA9在鼠骨髓細(xì)胞中無(wú)限制的表達(dá)3-10個(gè)月后,將不可避免的導(dǎo)致白血病的發(fā)生,提示AML發(fā)生前已有遺傳學(xué)的改變。 BMI-1基因可維持干細(xì)胞池,是成體干細(xì)胞及白血病干細(xì)胞自我更新所必需的基因之一,作為致癌基因,BMI-1與造血系統(tǒng)惡性腫瘤及實(shí)體瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。BMI-1基因有望成為一種用于惡性腫瘤的診斷、病情評(píng)估、患者預(yù)后和判斷惡性腫瘤進(jìn)展的新指標(biāo)之一。BMI-1是HOX基因高度特異的靜止子,將基因?qū)肓馨图?xì)胞白血病或淋巴瘤細(xì)胞中,可下調(diào)淋巴祖細(xì)胞中HOX靶基因。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)BMI-1和／或HOX在多種腫瘤高表達(dá),提示BMI-1/HOX 在研究腫瘤發(fā)病機(jī)制和治療等方面可能具有較高的潛在價(jià)值。BMI-1作為一個(gè)在多種腫瘤中異常表達(dá)的癌基因,隨著基因治療研究的進(jìn)展,在未來(lái)基因治療人類腫瘤上的應(yīng)用前景將是十分廣闊的。人們?cè)O(shè)想使BMI-1基因和／或HOX基因增加和／或缺失,作為靶點(diǎn)來(lái)治療由上游或者下游基因變化引發(fā)的白血病。但目前關(guān)于BMI-1在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或下調(diào)后對(duì)HOX基因表達(dá)變化的影響的研究還很少。 由此設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn),觀察BMI-1mRNA、HOXA9mRNA在兒童急性白血病外周血及健康兒童外周血中的表達(dá)狀況和兩者間的相關(guān)性及其相互影響,進(jìn)一步探討白血病的發(fā)病機(jī)理,為以后白血病的基因治療提供理論依據(jù)。 目的 1.觀察BMI-1及HOXA9基因在兒童急性白血病(acute leukemia, AL)外周血中的表達(dá)情況及在AL發(fā)生中的臨床意義。 2.探討AL中BMI-1與HOXA9基因兩者間的相關(guān)性。 3.探討白血病的發(fā)病機(jī)理,為以后白血病的基因治療提供依據(jù)。 材料與方法 標(biāo)本取自2008年6月至2009年6月鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院和鄭州市其他醫(yī)院診治的急性白血病兒童及健康兒童的外周血。初治患者經(jīng)聯(lián)合化療第19天復(fù)查骨髓象判斷是否完全緩解(CR)。其診斷、CR及復(fù)發(fā)的判斷標(biāo)準(zhǔn)均符合2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)修訂的急性白血病診斷標(biāo)準(zhǔn)。急性白血病兒童標(biāo)本57例,男女比例為35：22(1.59：1),年齡3個(gè)月～14歲,中位年齡5歲。其中急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)38例(B型27例；T型11例),急性髓性白血病(AML)19例(M13例、M25例；M36例；M42例；M53例),經(jīng)過(guò)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞免疫表型、染色體等檢查確診。以年齡3個(gè)月-12歲,中位年齡6歲健康兒童30例為對(duì)照組,男(18例)：女(12例),比例為：1.50：1。各組年齡、性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。運(yùn)用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測(cè)其外周血BMI-1和HOXA9基因的表達(dá)情況,并追蹤隨訪上述基因陽(yáng)性及陰性患者的緩解率及生存期。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,所有原始數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示,多樣本均數(shù)比較用單因素方差分析,相關(guān)分析用pearson線性相關(guān)分析方法,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1. BMI-1基因、HOXA9基因在急性白血病患兒外周血中的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(p0.05)。 2. BMI-1基因在B淋巴細(xì)胞性白血病外周血中均有表達(dá),其在粒細(xì)胞性白血病外周血中部分表達(dá)或弱表達(dá),在B淋巴細(xì)胞性白血病表達(dá)高于粒細(xì)胞性白血病(p0.05)。 3. HOXA9基因在急性髓系白血病(除AML-M3)外周血中表達(dá)較為普遍,HOXA9mRNA在急性髓系白血病中的表達(dá)水平明顯高于急性淋巴細(xì)胞白血病患者,兩者相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 4.聯(lián)合化療未緩解組BMI-1mRNA及HOXA9mRNA表達(dá)水平高于緩解組,但兩者相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),緩解后均未檢測(cè)到BMI-1mRNA及HOXA9mRNA表達(dá)；初治組、復(fù)發(fā)組與完全緩解組相比,前兩者表達(dá)顯著高于后者(p0.05)；初治組、復(fù)發(fā)組與對(duì)照組相比有顯著差異性(p0.05),完全緩解組與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異性(p0.05)。 5.在研究過(guò)程中,追蹤隨訪上述基因陽(yáng)性及陰性患者的緩解率及生存期,在57例患者中共有23例患者觀察到治療情況,其中緩解19例,未緩解4例,總緩解率為85%(19/23)；對(duì)其中白血病患兒HOXA9mRNA表達(dá)高低與臨床療效、生存率間進(jìn)行變量直線相關(guān)分析,分析結(jié)果提示臨床治療效果、生存率與HOXA9mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān),HOXA9mRNA表達(dá)水平越高,臨床治療就越差,生存率也就越低。相關(guān)系數(shù)r=-0.857,經(jīng)t檢驗(yàn)P0.01。 6.急性白血病患兒BMI-1、HOXA9兩者的表達(dá)水平進(jìn)行變量線性相關(guān)分析,結(jié)果提示BMI-1與HOXA9mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān),BMI-1mRNA表達(dá)水平越高,HOXA9mRNA表達(dá)水平越低；相反BMI-1mRNA表達(dá)水平降低,HOXA9mRNA表達(dá)水平升高。相關(guān)系數(shù)r=-0.667,經(jīng)t檢驗(yàn)P0.01。 結(jié)論 1. BMI-1基因具有淋系特異性,HOXA9具有髓系特異性,可作為區(qū)別淋巴細(xì)胞性白血病和髓性細(xì)胞性白血病的標(biāo)志性基因之一。 2. BMI-1基因、HOXA9基因亦可作為兒童急性白血病的發(fā)病、復(fù)發(fā)及治療和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。 3.原癌基因BMI-1與HOXA9表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞負(fù)荷有關(guān),高水平表達(dá)急性白血病兒童治療及預(yù)后可能較差。 4. BMI-1與HOXA9在兒童AL中表達(dá)水平兩者間有明顯負(fù)相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R733.7
【圖文】：

結(jié)果性白血病患者化療前后BMI一lmRNA表達(dá)受治療、治療過(guò)程中失訪和死亡患者外，在57例患療情況，其中緩解19例，未緩解4例，總緩解率為85解組BMI一lmRNA表達(dá)水平(1.35土0.41)高于緩解組BM29)，兩者相比(介0.1258，>0.05)，這尚不能說(shuō)明其表未檢測(cè)到BMI一1mRNA表達(dá)。初治組及復(fù)發(fā)組與完全組表達(dá)量顯著高于完全緩解組(介0.013，<0.05);初治表達(dá)量有顯著差異性(介0.009，<0.05)，完全緩解組與0.05)。見(jiàn)電泳結(jié)果圖2及表3。M1234567

圖3HOXAgmRNA在初診不同AL患兒中的電泳圖M:make:DL2000.Lanel普通B一ALL.Lane4:AML--MI.Lanes:AML一MS.Lane6:AML--M3.Lane7:AMLT一ALL.Laneg:早前B一ALL表4HOXAg基因在急性白血病患兒和對(duì)照組中的表達(dá)分組例數(shù)(n)陽(yáng)性率(0，0)HOxAgmRNA的水平(onR對(duì)照組3000AL5733%0.48士0.24*ALL3812%0.21士0.14#AML1974%0.69士0.43$$與#L匕較作0.005，<0.013.2(2)治療結(jié)果、生存率與HOXAgmRNA表達(dá)水平的關(guān)系除去未接受治療、治療過(guò)程中失訪和死亡患者外，在57例患者中患者觀察到治療情況，其中緩解19例，未緩解4例，總緩解率為85%(l血病患兒HOXAg表達(dá)高低與臨床療效、生存率間進(jìn)行變量直線相關(guān)分

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本文編號(hào)：2732425