【摘要】： 目的 (1)研究?jī)和陋?dú)癥發(fā)病的高危因素及孤獨(dú)癥兒童的早期發(fā)育特征。 (2)研究血漿谷氨酸和丫-氨基丁酸濃度變化與兒童孤獨(dú)癥的關(guān)系,及其在兒童孤獨(dú)癥易發(fā)癲癇病理機(jī)制中的作用。 (3)通過對(duì)Reelin基因上四個(gè)單核苷酸多態(tài)(SNP)位點(diǎn)rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559的檢測(cè),探討Reelin基因多態(tài)性與兒童孤獨(dú)癥的關(guān)系。 方法 (1)共入組兒童孤獨(dú)癥核心家系278例及正常對(duì)照兒童核心家系200例,調(diào)查一般人口學(xué)資料、母孕期情況、圍產(chǎn)期情況、發(fā)育性標(biāo)志出現(xiàn)時(shí)間、養(yǎng)育情況、既往史、家族史及體格檢查情況;對(duì)于孤獨(dú)癥兒童,尚需調(diào)查早期癥狀表現(xiàn)、評(píng)定兒童孤獨(dú)癥評(píng)定量表(CARS)及孤獨(dú)癥行為檢查量表(ABC)。 (2)27例伴癲癇的孤獨(dú)癥患者作為觀察組,30例不伴癲癇的孤獨(dú)癥患者為另一觀察組,36例正常兒童作為對(duì)照組。采用高效液相色譜法測(cè)定三組血漿谷氨酸和γ-氨基丁酸濃度,進(jìn)行組間比較。 (3)在中國(guó)漢族孤獨(dú)癥核心家系(孤獨(dú)癥患者234人,父母399人)及正常對(duì)照人群(286人)中,檢測(cè)Reelin基因上四個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559,采用TaqMan—PCR的方法確定樣本各位點(diǎn)的基因型,進(jìn)行以核心家系為基礎(chǔ)的傳遞不平衡檢驗(yàn)及病例對(duì)照的關(guān)聯(lián)研究。 (4)采用DNA測(cè)序和序列分析的方法,驗(yàn)證TaqMan-PCR等位基因鑒別分析技術(shù)的準(zhǔn)確性。 (5)使用GENEHUNTER(version 2.1)軟件對(duì)孤獨(dú)癥核心家系進(jìn)行傳遞不平衡分析,使用SAS軟件包構(gòu)建單倍體模型,以x~2檢驗(yàn)比較組間差異。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS14.0軟件包,根據(jù)資料特征分別進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、x~2檢驗(yàn)、方差分析、Logistic回歸分析以及計(jì)算暴露因素的優(yōu)勢(shì)比(OR值)。 結(jié)果 (1)兒童孤獨(dú)癥先證者中男性233人,女性45人,男女比例為5.18:1;患者起病年齡為22.36±8.29月。家長(zhǎng)感覺到孩子異常最早是在10個(gè)月時(shí),最晚在48個(gè)月。 (2)與正常兒童相比,孤獨(dú)癥患者的多項(xiàng)圍產(chǎn)期和母孕期高危因素差異具有顯著性。Logistic回歸發(fā)現(xiàn):母親受教育年限(P=0.009)、父親生育年齡(P=0.001)、家庭負(fù)擔(dān)(P=-0.001)、撫育者(P=0.001)、妊娠反應(yīng)(P=0.025)、孕期服藥史(P=0.014)、分娩方式(P=-0.045)、養(yǎng)育方式(P＜0.001)、主要教導(dǎo)者(P＜0.001)、陽性家族史(P=0.002)進(jìn)入回歸方程。 (3)計(jì)算回歸方程中有臨床意義的6項(xiàng)指標(biāo)的組間優(yōu)勢(shì)比(OR值),從強(qiáng)到弱依次為父親生育年齡＞30歲(OR=6.715)、家族史陽性(OR=5.798)、孕期服用藥物(OR=4.653)、非自然分娩(OR=4.147)、母親受教育年限＞11年(OR=1.373)、妊娠反應(yīng)中/重度(OR=1.044)。 (4)與對(duì)照組兒童相比,孤獨(dú)癥兒童的各項(xiàng)發(fā)育性標(biāo)志出現(xiàn)時(shí)間、孤獨(dú)癥早期表現(xiàn)總分、頭圍等指標(biāo),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。 (5)不伴癲癇的孤獨(dú)癥組(A組)血漿谷氨酸濃度為653.95±545.87pmol/L,伴有癲癇的孤獨(dú)癥組(B組)血漿谷氨酸濃度為1608.81±1478.22pmol/L,正常對(duì)照兒童(C組)血漿谷氨酸濃度為653.70±589.86pmol/L。A組與B組相比,差異具有顯著性(P＜0.05);B組與C組相比,差異具有顯著性(P＜0.05);A組與C組相比,無顯著性差異(P＞0.05)。A組血漿γ-氨基丁酸濃度為71.46±65.98pmol/L,B組為111.19±85.27pmol/L,C組為70.13±51.36pmol/L。A組與B組相比,差異具有顯著性(P＜0.05);B組與C組相比,差異具有顯著性(P＜0.05);A組與C組相比,無顯著性差異(P＞0.05)。 (6)孤獨(dú)癥核心家系單位點(diǎn)SNP傳遞不平衡分析,四個(gè)位點(diǎn)均無顯著性差異(P＞0.05);四個(gè)位點(diǎn)組成的單倍體中GTCC 5條全部未傳遞,未傳遞存在顯著性差異,其余各單倍體未發(fā)現(xiàn)不平衡傳遞。 對(duì)照組樣本在四個(gè)SNPs多態(tài)位點(diǎn)上全部符合H-W平衡。病例對(duì)照關(guān)聯(lián)研究中,孤獨(dú)癥組與對(duì)照組四個(gè)SNPs多態(tài)位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異(P＞0.05)。 孤獨(dú)癥組與對(duì)照組單倍體分型比較中,rs362691-rs2073559相鄰兩位點(diǎn)的CC、CT、GC三種單倍體,每一單倍體頻率在兩組之間比較,差異均無顯著性(P＞0.05);而GT單倍體頻率在兩組之間差異具有顯著性(x~2=5.805,P=0.020)。兩組單倍體頻率構(gòu)成具有顯著性差異(x~2=9.682,P=0.021)。其余相鄰兩位點(diǎn)、三位點(diǎn)以及四個(gè)位點(diǎn)組合的每一單倍體頻率、以及單倍體頻率構(gòu)成均無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論 (1)兒童孤獨(dú)癥在母孕期、圍產(chǎn)期高危因素明顯增多,前三位的高危因素分別是父親生育年齡大于30歲、家族史陽性、孕期服用藥物史。 (2)孤獨(dú)癥兒童整體發(fā)育落后于正常對(duì)照兒童,而且在發(fā)育過程中具有某些特征性的早期表現(xiàn),有望被早期識(shí)別。 (3)血漿谷氨酸/γ-氨基丁酸濃度異常在孤獨(dú)癥兒童中并不具有普遍性,僅在伴有癲癇的孤獨(dú)癥兒童中有異常升高。谷氨酸/γ-氨基丁酸系統(tǒng)功能異常可能是孤獨(dú)癥易發(fā)癲癇的病理機(jī)制之一。 (4)以孤獨(dú)癥核心家系為基礎(chǔ)的傳遞不平衡檢驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)Reelin等位基因的優(yōu)勢(shì)傳遞。病例對(duì)照關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)僅rs362691-rs2073559的GT單倍體頻率在兩組之間存在顯著性差異,提示Reelin基因與孤獨(dú)癥無關(guān)聯(lián)。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R749.94
【圖文】：

應(yīng)體系*反應(yīng)參數(shù)設(shè)置*反應(yīng)條件優(yōu)化*獲得實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線數(shù)據(jù)*終點(diǎn)讀板(s DS2.0軟件檢測(cè)和分析基因型)*數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化一測(cè)序比較驗(yàn)證*數(shù)據(jù)收集、轉(zhuǎn)化、統(tǒng)計(jì)分析。如圖3一2。

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 于紅;陸廷鳳;任慕蘭;王蓓;;中國(guó)人群兒童孤獨(dú)癥圍生期危險(xiǎn)因素的Meta分析[J];循證醫(yī)學(xué);2009年06期

本文編號(hào)：2723488