【摘要】：目的:新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic encephalopathy ,HIE)是指嬰兒在圍生期發(fā)生窒息,導(dǎo)致腦組織缺氧性損傷,常常是造成新生兒早期死亡、小兒智力及軀體發(fā)育障礙的重要原因。HIE發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,細(xì)胞凋亡是后期神經(jīng)細(xì)胞缺失和功能障礙的重要原因。因此根據(jù)該病發(fā)病機(jī)制采取合適的治療措施對(duì)HIE的預(yù)后有著十分重要的作用。本實(shí)驗(yàn)主要探討在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后,應(yīng)用神經(jīng)節(jié)苷脂及參附注射液治療后其腦組織中Bcl-2,Bax的變化趨勢(shì),從理論角度分析,聯(lián)合應(yīng)用兩種藥物對(duì)新生大鼠HIE后神經(jīng)系統(tǒng)功能恢復(fù)是否具有更為明顯的改善作用。 方法:(1)動(dòng)物分組:將新生7天SD乳鼠90只隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血缺氧組(HIBD組)、缺血缺氧+ GM1干預(yù)組(GM1組)、缺血缺氧+參附干預(yù)組(參附組)及缺血缺氧+ GM1及參附干預(yù)組(合用組)五組,每組各18只。后四組制成HIBD模型后根據(jù)處死動(dòng)物的時(shí)間不同分為3個(gè)亞組:6h組、24h組、48h組,每亞組6只。(2)模型制備:假手術(shù)組給予頸正中切口并游離左側(cè)頸總動(dòng)脈,不進(jìn)行缺氧缺血。模型組采用結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后置于低氧環(huán)境中2h制備而成。GM1組及參附組分別于缺氧缺血后立即給予腹腔注射GM1或參附注射液。合用組于缺氧缺血后腹腔注射兩種藥物。(3)觀察腦組織變化:各組動(dòng)物于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死后取其腦組織,肉眼觀察腦組織大體形態(tài)的變化,行HE染色后光鏡下觀察左側(cè)腦組織的病理變化,免疫組織化學(xué)方法半定量檢測(cè)左側(cè)腦組織Bcl-2、Bax表達(dá)。 結(jié)果:(1)行為改變:新生大鼠在缺氧缺血后會(huì)出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)肉眼觀察結(jié)果:假手術(shù)組腦組織大體無明顯改變;HIBD組腦組織大體形態(tài)有不同程度的異常改變;各治療組較HIBD組上述改變明顯減輕。(3)HE染色結(jié)果:假手術(shù)組海馬組織結(jié)構(gòu)基本正常,細(xì)胞排列整齊緊密,形態(tài)正常。高倍鏡下可見神經(jīng)元核大而圓,透明;HIBD組海馬組織結(jié)構(gòu)疏松,大腦皮層、海馬細(xì)胞排列紊亂,且出現(xiàn)空泡、變性和壞死,正常神經(jīng)元細(xì)胞減少;干預(yù)各組在各時(shí)間點(diǎn)損傷程度較HIBD組明顯減輕,大腦皮層、海馬細(xì)胞變性、壞死明顯減少,細(xì)胞排列尚規(guī)則,尤以合用組改變明顯。(4)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:①Bcl-2表達(dá):Bcl-2陽性細(xì)胞廣泛表達(dá)于大腦皮層和海馬,為胞漿著色,染色呈棕黃色或黃褐色顆粒。HIBD組和各治療組Bcl-2陽性表達(dá)高峰均在HIBD后24h。假手術(shù)組表達(dá)較弱,各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異;而HIBD組各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2陽性表達(dá)增加,陽性細(xì)胞平均灰度值較假手術(shù)組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);GM1組、參附組及合用組各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2陽性表達(dá)較HIBD組進(jìn)一步增加,陽性細(xì)胞平均灰度值較HIBD組進(jìn)一步降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而合用組各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2陽性表達(dá)較GM1組及參附組增加程度更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。②Bax表達(dá):Bax陽性細(xì)胞主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),染色呈棕黃色顆粒。HIBD組和各治療組Bax陽性表達(dá)高峰均在HIBD后24h。假手術(shù)組中有極少量Bax蛋白表達(dá);HIBD組各時(shí)間點(diǎn)Bax蛋白陽性表達(dá)明顯增加,染色最深,陽性平均灰度值表達(dá)較假手術(shù)組明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);GM1組、參附組及合用組各時(shí)間點(diǎn)Bax陽性表達(dá)較HIBD組下降,陽性平均灰度值表達(dá)較HIBD組增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而合用組各時(shí)間點(diǎn)Bax陽性表達(dá)較GM1組及參附組下降程度更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論:(1)成功建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型后,單獨(dú)腹腔注射神經(jīng)節(jié)苷脂或參附注射液均可不同程度減輕新生大鼠腦損傷,聯(lián)合使用兩種藥物腹腔注射對(duì)其腦損傷的改善作用更為明顯。(2)神經(jīng)節(jié)苷脂或參附注射液均可起到將腦組織中Bcl-2的表達(dá)上調(diào),Bax陽性表達(dá)下降的作用,改變腦組織中Bcl-2/ Bax的比值,從而減輕HIBD病理損傷,抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R722.1
【圖文】：

假手術(shù)組新生大鼠腦組織(HE400×)

HIBD組6h腦組織(HE200×)

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 閆煥利;HIF-1α及其抑制劑對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷時(shí)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2722773