【摘要】： 目的:研究環(huán)境內(nèi)分泌干擾物鄰苯二甲酸二(2-乙已基)酯(Di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)作用于孕鼠后,通過分析胎鼠基因組DNA甲基化水平和胰島素樣因子3(INSL3)基因CpG島甲基化狀態(tài),并檢測INSL3和三種DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá),探討DNA甲基化在DEHP誘發(fā)小鼠隱睪過程中的作用,以期初步揭示DEHP導(dǎo)致隱睪發(fā)生的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制。 方法:妊娠昆明小鼠(KM mice)隨機(jī)分為3組,每組20只:正常對照組、玉米油對照組和DEHP實(shí)驗(yàn)組。玉米油對照組和DEHP實(shí)驗(yàn)組自妊娠12.5d到妊娠18.5d分別持續(xù)經(jīng)口予以玉米油和DEHP[500 mg/(kg·d)],正常對照組不予灌藥。高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC )和甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性技術(shù)(Methylation-sensitive amplification polymorphism technique,MSAP)檢測基因組DNA整體甲基化水平;重亞硫酸鹽修飾后甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR, MSP)技術(shù)分析INSL3基因CpG島甲基化狀態(tài);同時實(shí)時熒光定量PCR檢測INSL3和三種DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)。 結(jié)果:DEHP實(shí)驗(yàn)組基因組DNA甲基化程度明顯增高,其甲基化水平為34.03%±3.05%;而正常對照組和玉米油對照組小鼠睪丸組織基因組DNA甲基化程度分別為28.37%±2.37%和28.58%±2.45%。DEHP實(shí)驗(yàn)組INSL3基因第一外顯子區(qū)CpG島存在異常甲基化,其mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量分別為對照組的1/3和1/4。三種甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)在DEHP實(shí)驗(yàn)組均有不同程度的增高,與對照組相比其差異具有顯著性(Dnmt1,P0.05;Dnmt3a,P0.01;Dnmt3b,P0.05)。 結(jié)論:環(huán)境內(nèi)分泌干擾物DEHP通過影響三種甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)而導(dǎo)致基因組DNA甲基化水平升高和INSL3基因CpG異常甲基化,從而抑制睪丸下降過程中包括關(guān)鍵因子(INSL3)的表達(dá),導(dǎo)致隱睪的發(fā)生。DNA甲基化等表觀遺傳調(diào)控在隱睪的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用,表觀遺傳修飾異�？赡苁荄EHP誘發(fā)隱睪的分子機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R726.9
【圖文】：

Normal control 10.2±1.5 1.1±0.2 1.28±0.16 2.6±0.6Corn oil control 10.1±1.5 1.1±0.1 1.26±0.25 2.7±0.6DEHP-exposed 10.3±1.5 1.1±0.3 1.25±0.22 2.1±0.2*與正常對照組和玉米油對照組比較，*：P <0.05Compared with the blank control and the corn oil group, *：P <0.052.2 胎鼠睪丸位置及睪丸引帶發(fā)育情況解剖顯微鏡下：⑴ 正常對照組和玉米油對照組睪丸及睪丸引帶發(fā)育正常，顱側(cè)懸韌帶完全退化，睪丸均位于腹腔底膀胱頸附近（圖 2-A，圖 2-B）；⑵ DEHP 組睪丸下降不足，顱側(cè)懸韌帶完全退化，睪丸引帶發(fā)育不良，睪丸位于腎臟下極與膀胱頸之間，其中大部分睪丸位于膀胱頸（圖 2-C）。

圖 3 仔鼠 30 日齡睪丸組織學(xué)觀察正常對照組和玉米油對照組睪丸曲細(xì)精管細(xì)胞層次清楚，結(jié)構(gòu)正常，可見各期生精細(xì)胞；DEHP實(shí)驗(yàn)組曲細(xì)精管上皮明顯萎縮，生精細(xì)胞減少、缺少，間質(zhì)病理性增生。(H.E. ×400)Fig.3. Histology of mouse testes on PND30The contorted seminiferous tubules were morphologically normal with regular arrangement innormal and corn oil group; the seminiferous epithelium decreased, arranged in disorder andleydig cells were pathological hyperplasia in DEHP group. (H.E. ×400)2.5 PND30 小鼠隱睪發(fā)生率仔鼠 30 日齡時檢查睪丸的下降情況，判斷隱睪的發(fā)生情況：⑴ 對照組小鼠睪丸位于陰囊內(nèi)，陰囊發(fā)育好；⑵ DEHP 實(shí)驗(yàn)組隱睪小鼠睪丸位于腹腔內(nèi)，陰囊皺襞發(fā)育差。

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本文編號：2722746