【摘要】： 目的 探索神經(jīng)性因素在先天性腎盂輸尿管連接處梗阻性腎積水發(fā)病中的作用以及先天性腎盂輸尿管連接處梗阻性腎積水的發(fā)病的病因、病理基礎(chǔ)。 1.探討正常情況下胎兒-新生兒腎盂輸尿管連接處組織的神經(jīng)纖維分布特點(diǎn)、病理基礎(chǔ)。 2.探討在先天性腎盂輸尿管連接處梗阻性腎積水中病變段組織的神經(jīng)纖維分布特點(diǎn)作用以及變化和可能的作用。 3.探討神經(jīng)纖維在先天性腎盂輸尿管連接處梗阻性腎積水發(fā)病中的作用。 方法 1.實(shí)驗(yàn)分組 將先天性腎盂輸尿管連接處梗阻性腎積水患兒手術(shù)切除的腎盂輸尿管連接處狹窄段設(shè)為實(shí)驗(yàn)組A組,共31例;同一患兒輸尿管手術(shù)切緣設(shè)為對(duì)照組B組,共31例;產(chǎn)前排除泌尿系異常的32周以上引產(chǎn)或死亡并進(jìn)行尸解的胎兒-新生兒共30例設(shè)為正常對(duì)照組C組;其中,胎兒共26例,新生兒尸解4例(標(biāo)本的獲取均符合本單位醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的要求)。 2.標(biāo)本的獲取、制片 標(biāo)本獲取后于10%甲醛溶液中固定24h,二甲苯透明,梯度酒精脫水,石蠟包埋,做3μm厚連續(xù)切片。 3.HE染色 各組樣本在石蠟包埋切片后行常規(guī)HE染色,光鏡下觀察各組標(biāo)本是否存在有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 4.免疫組化檢測標(biāo)本中PGP9.5的表達(dá) 按照EnVision System二步法分步驟進(jìn)行免疫組化。棕褐色示PGP9.5免疫活性陽性部位。計(jì)數(shù)按照Weidner等的方法并加以改進(jìn):先在低倍視野內(nèi)(100×)找到組織切片內(nèi)神經(jīng)纖維密度最高的區(qū)域,即“熱點(diǎn)”,選取三個(gè)“熱點(diǎn)”;然后在高倍視野內(nèi)(200×)計(jì)數(shù)神經(jīng)纖維的數(shù)目。分辨不清的不計(jì)入計(jì)數(shù)結(jié)果。計(jì)數(shù)由兩名病理科主治以上醫(yī)師采用雙盲法分別對(duì)同一組織切片進(jìn)行計(jì)數(shù),取兩者計(jì)數(shù)中較高數(shù)據(jù)作為該片的計(jì)數(shù)結(jié)果。結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。 5.電子顯微鏡下觀察結(jié)果 各隨機(jī)從A、B組中選取10例,標(biāo)本取得后在2分鐘內(nèi)立即投入戊二醛中行固定,樹脂包埋,用特制的超薄切片機(jī)(ultramicrotome)切成超薄切片,再經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛等進(jìn)行電子染色,而后行電鏡檢查。電鏡下觀察神經(jīng)纖維情況。評(píng)價(jià)兩組間是否存在差異情況。 結(jié)果 1.HE染色 三組樣本:手術(shù)切除的腎盂輸尿管連接處狹窄段(實(shí)驗(yàn)組A組)31例;同一患兒輸尿管手術(shù)切緣(對(duì)照組B組)31例;產(chǎn)前排除泌尿系異常的32周以上引產(chǎn)或死亡并進(jìn)行尸解的胎兒-新生兒(正常對(duì)照組C組)30例。高倍視野(×200倍)經(jīng)觀察,均未見明顯神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 2.免疫組織化學(xué)檢測 對(duì)實(shí)驗(yàn)組A組、對(duì)照組B組、正常對(duì)照組C組三組共92個(gè)標(biāo)本分別進(jìn)行免疫組化檢測,結(jié)果顯示PGP9.5免疫陽性細(xì)胞主要分布神經(jīng)纖維的胞漿中,很好的顯示出神經(jīng)纖維。在高倍視野內(nèi)(200×)計(jì)數(shù)神經(jīng)纖維的數(shù)目。計(jì)數(shù)由兩名病理科主治以上醫(yī)師采用雙盲法分別對(duì)同一組織切片進(jìn)行計(jì)數(shù),取兩者計(jì)數(shù)中較高數(shù)據(jù)作為該片的計(jì)數(shù)結(jié)果。結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析神經(jīng)纖維在各組中的分布以及數(shù)量差異情況。 2.1 PGP9.5顯色顯示神經(jīng)纖維在不同組間的分布差異 本研究檢測了實(shí)驗(yàn)組A組、對(duì)照組B組、正常對(duì)照組C組三組樣本。通過免疫組化檢測,顯示神經(jīng)纖維。分析其在各組間的分布差異。在所有的樣本中,切面各層見神經(jīng)纖維并非同向性排列,可見神經(jīng)纖維的斜切面、縱切面、橫斷面。提示神經(jīng)纖維的走向并非單純的橫向或者縱向。 2.2 PGP9.5顯色顯示神經(jīng)纖維在不同組間的數(shù)量差異 各組樣本通過免疫組化檢測,顯示神經(jīng)纖維。高倍鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示手術(shù)切除的腎盂輸尿管連接處狹窄段A組神經(jīng)纖維明顯較同一輸尿管手術(shù)切緣B組分布密度低。而且,在所有的A組樣本中,顯色的神經(jīng)纖維均未出現(xiàn)在肌層,均處于肌層之外。而B、C組的神經(jīng)纖維可見部分位于肌層中,提示該兩處位置神經(jīng)纖維自外膜延伸入肌層。Nemenyi法統(tǒng)計(jì)分析提示B-A組、C-A組的比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);B-C組的比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 3.電子顯微鏡下觀察結(jié)果 電子顯微鏡下圖像定位于肌層以及肌層外系膜組織,A、B組于電子顯微鏡觀察下提示兩組之間神經(jīng)纖維組織在形態(tài)上并無明顯差異。其中大多數(shù)為無髓鞘神經(jīng)纖維。 結(jié)論 本研究采用PGP9.5進(jìn)行免疫組化檢測。PGP 9.5 (蛋白基因產(chǎn)物9. 5)是一種神經(jīng)元特異性蛋白,存在于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的各個(gè)水平及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中,在胞漿和細(xì)胞核中表達(dá)。傳統(tǒng)的HE染色很難辨別幼稚的神經(jīng)叢組織結(jié)構(gòu)。而PGP 9. 5的表達(dá)情況為:神經(jīng)組織(不論年齡段)皆陽性,且幼稚肌間神經(jīng)叢節(jié)細(xì)胞清晰;PGP 9. 5神經(jīng)細(xì)胞胞漿胞核皆陽性,核大,核仁清晰,而在未成熟神經(jīng)節(jié)細(xì)胞則染色更深,細(xì)胞核呈深棕色。1993年karahan實(shí)驗(yàn)表明:PGP9.5可以標(biāo)記上尿路的神經(jīng)元以及神經(jīng)纖維的表達(dá)。另外,還包括:NSE、S100。在國外關(guān)于神經(jīng)纖維的檢測中,都證明PGP9.5是一種理想的手段。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在患兒的輸尿管段中,切緣較狹窄段神經(jīng)纖維密度明顯增多明顯。并且,在狹窄段中的肌層中并未見明顯神經(jīng)纖維,同切緣比較有明顯差異,提示神經(jīng)纖維的發(fā)育分布差異情況。而同正常對(duì)照組比較同樣存在明顯異常。 輸尿管的發(fā)育是由輸尿管芽的主干形成輸尿管,其末端膨大并反復(fù)分支,形成腎盂、腎盞、乳頭管和集合小管。目前先天性腎盂輸尿管連接處梗阻性腎積水的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。通過實(shí)驗(yàn)對(duì)于其神經(jīng)因素的研究,探討可能的機(jī)制:神經(jīng)嵴細(xì)胞沿輸尿管芽發(fā)育的方向移行過程中發(fā)生停頓,導(dǎo)致輸尿管芽末端即腎盂輸尿管連接部神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育欠佳,進(jìn)而影響輸尿管肌層的發(fā)育以及運(yùn)動(dòng)控制,進(jìn)一步導(dǎo)致該處出現(xiàn)狹窄、蠕動(dòng)欠佳。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R726.9
【圖文】：

手術(shù)中切除的部分（箭頭所示為附

手術(shù)中切除的部分（箭頭所示為狹窄

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 同李平;袁世發(fā);豐帆;楊建軍;張洪偉;;食管鱗癌組織中的神經(jīng)纖維分布[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年14期

2 陳敏;鄂占森;徐文中;趙新宇;代宇;;正常成人上臂五大神經(jīng)分支的高頻超聲聲像圖表現(xiàn)與檢查方法[J];中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2011年07期

3 羅興中;;萎縮的視神經(jīng)能再生嗎[J];老友;2011年09期

4 史敏;陳穎;趙晨燕;張晶;倪燦榮;朱明華;;胰腺導(dǎo)管腺癌中CD74的表達(dá)及臨床意義[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2011年07期

5 伍新華;;餐桌上的護(hù)眼之道[J];食品與健康;2002年03期

6 李紅;王靜;;小兒離斷式腎盂成形術(shù)的圍手術(shù)期護(hù)理[J];吉林醫(yī)學(xué);2011年22期

7 吳浩;;例析神經(jīng)系統(tǒng)受損引起的幾種疾病[J];青蘋果;2011年02期

8 陳海濱;吳志宏;張永奇;;微針陣列經(jīng)皮促透NGF對(duì)家兔皮膚感覺神經(jīng)再生的影響[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年07期

9 馬聰慧;王麗婭;李晶;;Ⅱ型糖尿病患者角膜的共聚焦顯微鏡觀察[J];眼科;2011年03期

10 鞠文翠;林志雄;王牧民;黃靜;婁云峰;;立體定向照射兔坐骨神經(jīng)后S-100蛋白表達(dá)及超微結(jié)構(gòu)變化的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2011年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 趙驥騰;溫海濤;胡禮泉;;雙側(cè)海綿體神經(jīng)離斷對(duì)大鼠陰莖海綿體組織nNOS神經(jīng)纖維及eNOS表達(dá)的影響[A];2006年浙江省泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 楊敏;房殿春;李兆申;徐曉蓉;許國銘;鄒多武;孫振興;屠振興;;不同亞類的非糜爛性反流病、糜爛性食管炎患者LES局部肽能神經(jīng)纖維的免疫組化和電鏡觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上冊(cè)）[C];2007年

3 陶克;陳璧;胡大海;湯朝武;;hCGRP8～37對(duì)嚴(yán)重燙傷大鼠皮膚CGRP-IR陽性神經(jīng)的影響[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

4 李小勇;;人腦內(nèi)神經(jīng)纖維顯微手術(shù)解剖學(xué)(從大腦外表面向深層顯露部分的簡介)[A];中國醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)首屆全國代表大會(huì)論文匯編[C];2005年

5 劉軍;文玲英;郭敬俊;;齲病牙髓中P物質(zhì)及降鈣素基因相關(guān)肽免疫反應(yīng)神經(jīng)纖維的動(dòng)態(tài)變化研究[A];全國第四次牙體牙髓病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1995年

6 梁明惠;萬萍;;先天性腎積水術(shù)前及術(shù)后護(hù)理[A];全國外科護(hù)理學(xué)術(shù)會(huì)議暨專題講座論文匯編[C];2000年

7 辛龍;韓國燦;李鋼;趙鳳東;趙興;范順武;;兔腰椎間盤退變模型神經(jīng)纖維長入的實(shí)驗(yàn)研究[A];2008年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

8 王慧;夏力;殷善開;;可逆性噪聲源性聽閾變化對(duì)豚鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)及其神經(jīng)纖維的影響[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

9 付勇;丁大連;Richard Salvi;;大鼠耳蝸切片聽神經(jīng)纖維及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的定量觀察[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 王一兵;李霞;張芮;馮永強(qiáng);;增生期和成熟期皮膚瘢痕中的神經(jīng)纖維形態(tài)學(xué)觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 王忠田;泡手指檢測小神經(jīng)纖維病[N];健康報(bào);2008年

2 劉霞;神經(jīng)纖維的激增可逆轉(zhuǎn)中風(fēng)損傷[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

3 邱吉芬;春季防舊傷疼痛[N];保健時(shí)報(bào);2005年

4 胡蕓;紅燒肉可健腦[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

5 劉文華;如何治療耳鳴[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

6 本報(bào)記者 唐逸;換頭術(shù)難過技術(shù)倫理關(guān)[N];北京科技報(bào);2006年

7 霍雨佳;舊傷春天又疼痛,為何？[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

8 代　巧;春季要防舊傷疼痛[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2002年

9 本報(bào)記者　倪永華;有感覺假肢進(jìn)入臨床階段[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

10 楊淑娟;美分離出促進(jìn)神經(jīng)生長的新蛋白[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李真珍;水通道蛋白1-4在先天性腎積水腎組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2010年

2 張洪偉;胃癌組織內(nèi)SP陽性神經(jīng)纖維的分布及其意義[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

3 李曉燕;子宮內(nèi)膜異位癥疼痛與神經(jīng)生長因子及其受體關(guān)系的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

4 劉明學(xué);2，3，7，8-四氯二苯并二VA英所致先天性腎積水的發(fā)生機(jī)制及其預(yù)防的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

5 趙希梅;視神經(jīng)纖維自動(dòng)識(shí)別與分析關(guān)鍵技術(shù)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

6 王艷艷;子宮內(nèi)膜異位癥組織中神經(jīng)纖維的分布及其與疼痛的關(guān)系[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

7 崔紹山;慢性單純性苔蘚皮損處表皮神經(jīng)纖維數(shù)量、其與朗格漢斯細(xì)胞的關(guān)系及神經(jīng)生長因子mRNA表達(dá)情況的探討[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

8 王晉平;神經(jīng)因素對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈誘發(fā)心肌損傷的影響及機(jī)制探討[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

9 張宏軍;神經(jīng)生長相關(guān)蛋白-43在大鼠椎間盤炎癥模型中的表達(dá)及意義[D];浙江大學(xué);2007年

10 唐舉玉;股前外側(cè)皮瓣修復(fù)足跟大面積軟組織缺損感覺重建的解剖學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究[D];中南大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 洪淳;先天性腎盂輸尿管連接處梗阻性腎積水的神經(jīng)性因素探討[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2009年

2 孫勁松;先天性腎積水腎盂輸尿管連接梗阻部的病理學(xué)臨床研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

3 王從軍;先天性腎積水患兒尿液中水通道蛋白1的表達(dá)及意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

4 羅春峰;腎盂輸尿管連接部神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維的分布觀察[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2011年

5 顧鑫;小兒先天性腎積水的臨床病例分析[D];蘇州大學(xué);2011年

6 閆瑞玲;子宮內(nèi)膜異位癥組織中神經(jīng)纖維數(shù)目與疼痛相關(guān)性研究[D];暨南大學(xué);2010年

7 孫忠源;Cys C、β2-MG、α1-MG在小兒先天性腎積水血清中含量水平及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2012年

8 傅秀華;神經(jīng)纖維含量和神經(jīng)細(xì)胞黏附分子180亞型的表達(dá)在盆底器官脫垂中的改變及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

9 高立志;垂體前葉神經(jīng)纖維的功能學(xué)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

10 陳新光;檢測神經(jīng)纖維膜電位動(dòng)力學(xué)的光學(xué)二次諧波編碼及其數(shù)值模擬[D];福建師范大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2721961