【摘要】： 注意缺陷多動(dòng)障礙(Attention Deficit Hyperactivity Disorder,ADHD)是兒童常見的神經(jīng)行為問題,發(fā)病率達(dá)2.59%～7.25%,嚴(yán)重影響兒童的身心健康和學(xué)習(xí)生活,因此,有關(guān)ADHD的研究一直是兒科學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。然而,由于ADHD涉及腦的多個(gè)解剖部位及神經(jīng)遞質(zhì)傳遞系統(tǒng)異常,以及以人體為研究對(duì)象存在局限性,其相關(guān)研究仍是,21世紀(jì)醫(yī)學(xué)難點(diǎn)之一。 Homer 1、Homer 2是本課題組先前通過基因芯片篩選出的差異表達(dá)于目前廣泛應(yīng)用的ADHD動(dòng)物模型SHR/WKY大鼠(Spontaneously Hypertensive Rat,SHR/Wistar Kyoto,WKY)前額葉的基因。Homer 1、Homer 2同屬Homer家族成員,各自存在多種不同剪切形式,其編碼的蛋白是新發(fā)現(xiàn)的一類位于突觸后膜的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白,主要通過和代謝型谷氨酸受體(groupⅠmetabotropicglutamate receptor,mGluRⅠ)、三磷酸肌醇受體(inositol trisphosphate,IP3R)、Shank等蛋白結(jié)合,在突觸后致密斑的重塑、受體細(xì)胞定位、突觸前后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、突觸形成中起重要作用。因此,提示該基因可能參與到ADHD的病因及發(fā)病機(jī)制中,然而國(guó)內(nèi)外均未見相關(guān)報(bào)道。 本課題分兩部分,通過觀察Homer不同亞型在SHR/WKY大鼠不同腦區(qū)的表達(dá)差異情況,以及探討臨床常用藥物-鹽酸哌甲酯(methylphenidate,MPH)對(duì)SHR大鼠行為、Homer及其相關(guān)基因mGluRⅠ、IP3R、Shank表達(dá)的影響,來闡明Homer與ADHD之間的密切關(guān)系。 本研究是針對(duì)注意缺陷多動(dòng)障礙發(fā)病機(jī)制的探索性研究,有利于了解兒童ADHD的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制,研究結(jié)果將為ADHD發(fā)病機(jī)制及治療機(jī)理提供新的線索和理論依據(jù)。 目的分析Homer不同亞型在ADHD動(dòng)物模型幼年SHR大鼠,及其對(duì)照組WKY大鼠不同腦區(qū)差異表達(dá)情況。方法(1)開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察幼年SHR/WKY大鼠自發(fā)活動(dòng)情況;(2)應(yīng)用RT-PCR、WesternBlotting技術(shù)檢測(cè)SHR/WKY大鼠前額葉、海馬、伏核、紋狀體等腦區(qū)中Homer 1a、Homer 1b/c、Homer 2a/b mRNA和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果(1)開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示,SHR大鼠水平活動(dòng)、直立次數(shù)均較對(duì)照WKY大鼠顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.34,p＜0.05;t=4.43,p＜0.05);(2)RT-PCR結(jié)果顯示,SHR大鼠前額葉中Homer 1a、Homer 2a/bmRNA表達(dá)豐度較WKY大鼠顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.56,p＜0.05;t=5.85,p＜0.05),而Homer 1b/c無顯著性差異。SHR大鼠海馬中Homer 1a、Homer 2a/b mRNA表達(dá)豐度較WKY大鼠顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.95,p＜0.05;t=2.66,p＜0.05),而Homer 1b/c無顯著性差異。SHR大鼠伏核中Homer 2a/b mRNA表達(dá)豐度較WKY大鼠顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.66,p＜0.05),而Homer 1a、Homer 1b/c無顯著性差異。SHR大鼠紋狀體中Homer 1a、Homer 1b/c、Homer 2a/b mRNA表達(dá)豐度與WKY大鼠均無顯著性差異;(3)WesternBlotting結(jié)果發(fā)現(xiàn),SHR大鼠前額葉中Homer 1a、Homer 2a/b蛋白表達(dá)豐度較WKY大鼠顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.76,p＜0.05;t=3.40,p＜0.05);SHR大鼠海馬中Homer 1a、Homer 2a/b蛋白表達(dá)豐度較WKY大鼠顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.31,p＜0.05;t=3.27,p＜0.05)。結(jié)論(1)本實(shí)驗(yàn)所用幼年SHR大鼠自發(fā)活動(dòng)水平顯著高于對(duì)照WKY大鼠,符合作為ADHD動(dòng)物模型的要求;(2)SHR大鼠前額葉、海馬腦區(qū)Homer 1a、Homer 2a/b表達(dá)較WKY大鼠顯著降低,伏核Homer2a/b mRNA表達(dá)亦較WKY大鼠顯著降低,提示Homer 1a、Homer 2a/b可能與ADHD密切相關(guān)。 目的觀察鹽酸哌甲酯對(duì)SHR大鼠行為、Homer及其相關(guān)基因mGluRⅠ、IP3R、Shank表達(dá)的影響。方法(1)急性給藥前,利用開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察鹽酸哌甲酯給藥組(MPH組)與生理鹽水對(duì)照組(Ctl組)基礎(chǔ)的自發(fā)活動(dòng)水平(指水平運(yùn)動(dòng)和直立次數(shù))有無差異;急性給藥后(鹽酸哌甲酯2mg/kg或生理鹽水灌胃(intragastric gavage,i.g.)單次給藥),利用Làt迷宮觀察兩組在自發(fā)活動(dòng)水平和非選擇性注意力水平(指斜搭次數(shù))有無差異。慢性給藥前,利用Làt迷宮評(píng)價(jià)MPH組與Ctl組基礎(chǔ)的自發(fā)活動(dòng)水平和非選擇性注意水平;慢性給藥后(鹽酸哌甲酯2mg/kg或生理鹽水i.g.bid持續(xù)給藥14天),第15天通過Làt迷宮、第16-18天通過Morris水迷宮,分別觀察兩組自發(fā)活動(dòng)水平、非選擇性注意力水平和學(xué)習(xí)記憶(指總路程和潛伏期)有無差異。(2)完成急、慢性給藥各自的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)后,立即斷頭處死大鼠,采用RT-PCR、Western Blotting技術(shù)檢測(cè)MPH組與Ctl組在急、慢性給藥后,前額葉、海馬中Homer 1a、Homer 2a/b mRNA和蛋白的表達(dá)有無差異,及其相關(guān)基因mGluR 1、mGluR 5、IP3R 1、IP3R 2、IP3R3、shank 1、Shank 2、Shank 3 mRNA表達(dá)有無差異。結(jié)果(1)急性給藥實(shí)驗(yàn),動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:給藥前,MPH組與Ctl組在開場(chǎng)中水平運(yùn)動(dòng)距離和直立次數(shù)方面均無顯著差異;給藥后,MPH組在Làt迷宮中的水平運(yùn)動(dòng)距離、直立次數(shù)、斜搭次數(shù)均較Ctl組有下降趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(2)急性給藥實(shí)驗(yàn),分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:給藥后,Homer 1a mRNA在MPH組前額葉、海馬中的表達(dá)豐度較Ctl組顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.41,p＜0.05;t=2.68,p＜0.05);Homer 1b/c、Homer 2a/b、mGluR 1、mGluR 5、IP3R1、IP3R 2、IP3R 3、Shank 1、Shank 2、Shank 3 mRNA表達(dá),兩組間無顯著性差異;Homer 1a蛋白在MPH組前額葉、海馬中的表達(dá)豐度亦較Ctl組顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.21,p＜0.05;t=4.07,p＜0.05),Homer 2a/b蛋白表達(dá)兩組間無顯著性差異(p＞0.05)。(3)慢性給藥實(shí)驗(yàn),動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:給藥前,MPH組與Ctl組在Làt迷宮中的水平運(yùn)動(dòng)距離、直立次數(shù)、斜搭次數(shù)均無顯著性差異;給藥后,MPH組在Làt迷宮中的水平活動(dòng)、直立次數(shù)、斜搭頻數(shù)均較Ctl組顯著減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.63,p＜0.05;t=3.24,p＜0.05;t=3.98,p＜0.05);MPH組在Morris水迷宮中第一天總路程和潛伏期較Ctl組尚無顯著性差異,第二、第三天MPH組總路程較Ctl組顯著減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.36,p＜0.05;t=2.30,p＜0.05),第二、第三天MPH組潛伏期亦較Ctl組顯著減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.76,p＜0.05;t=2.51,p＜0.05)。(4)慢性給藥實(shí)驗(yàn),分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:Homer 1a、Homer 2a/b、Shank 1 mRNA在MPH組前額葉中的表達(dá)豐度較Ctl組顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.82,p＜0.05;t=2.73,p＜0.05;t=3.34,p＜0.05),mGluR 1、mGluR 5、IP3R 1、IP3R 2、IP3R 3、Shank 2、Shank 3 mRNA表達(dá)兩組間無顯著性差異;Homer 1a、Homer 2a/b、shank 1 mRNA在MPH組海馬中的表達(dá)豐度較Ctl組顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.12,p＜0.05;t=2.36,p＜0.05;t=2.74,p＜0.05),mGluR 1、mGluR 5、IP3R 1、IP3R2、IP3R 3、Shank 2、Shank 3 mRNA表達(dá)兩組間無顯著性差異;Homer1a、Homer 2a/b蛋白在MPH組前額葉中的表達(dá)豐度較對(duì)照組(Ctl組)顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.41,p＜0.05;t=2.62,p＜0.05);Homer 1a、Homer 2a/b蛋白在MPH組海馬中的表達(dá)豐度較對(duì)照組(Ctl組)顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.04,p＜0.05;t=2.87,p＜0.05)。結(jié)論鹽酸哌甲酯單次用藥在引起前額葉和海馬Homer 1a mRNA和蛋白表達(dá)增加的同時(shí),改善了SHR大鼠的多動(dòng)和注意力障礙現(xiàn)象;鹽酸哌甲酯長(zhǎng)期用藥在引起前額葉和海馬Homer1a、Homer 2a/b mRNA和蛋白表達(dá)增加的同時(shí),改善了SHR大鼠的多動(dòng)、注意力障礙和學(xué)習(xí)記憶困難現(xiàn)象,并引起了前額葉和海馬腦區(qū)Shank 1 mRNA表達(dá)增加,提示Homer 1a、Homer 2a/b不僅參與了ADHD的發(fā)病機(jī)制,并且可能在鹽酸哌甲酯治療ADHD的作用機(jī)制中起重要作用。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R749.94
【圖文】：

可影響細(xì)胞內(nèi)的鈣離子通道、鷹架蛋白、小的GTP酶、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞骨架蛋白的功能，并進(jìn)一步與這些蛋白相互作用形成一組細(xì)胞效應(yīng)器蛋白，在調(diào)控細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要作用(見圖1一2)。因此，提示該基因可能參與ADHD的病因及發(fā)病機(jī)制，然而國(guó)內(nèi)外均未見相關(guān)報(bào)道。圖1一 1HO~不同亞型的不同剪切

Pi勝一1一丁llu、I，alio.，。fll、，Pulali.i，itor‘110，.，恤I，。en(A)co.、，t三loliv閃y，‘Pr。，，ed(cc)Horl。，P:ot，i，、，a，ld倒幾GHo.，一，:夕ro論ins側(cè) ththelrEvHI· boundPartnerswlthln由 ePOstS護(hù)aPticd印 sityofdsndritiCsPt姍、圖1一 2Homer及其相關(guān)基因之間的關(guān)系因此，有必要了解Homer不同亞型mRNA和蛋白在ADHD動(dòng)物模型SH側(cè)WKY大鼠前額葉、海馬、伏核、紋狀體不同腦區(qū)的表達(dá)情況，并探討鹽酸呱甲醋對(duì)Homer及其相關(guān)基因mGlu租、IP3R、Shank表達(dá)的影響，以便進(jìn)一步了解Homer基因在ADHD中可能的作用。為達(dá)到上述研究目的，我們擬(1)采用RT一PeR、 westemblotting技術(shù)觀察Homer不同亞型在幼年SHR八yKY大鼠前額葉、海馬、伏核、紋狀體等不同腦區(qū)中mRNA和蛋白的表達(dá)情況;(2)采用開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、L缸迷宮、MO幣s水迷宮觀察鹽酸派甲醋對(duì)SHR大鼠自發(fā)活動(dòng)和非選擇性注意力和學(xué)習(xí)記憶的影響;通過RT一PeR、 westernblotting技術(shù)檢測(cè)鹽酸呱甲醋急、慢性給藥對(duì)SHR大鼠不同腦區(qū)Homer不同亞型mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響，同時(shí)觀察其相關(guān)基因mGluRI、Ip3R、Shank等1llRNA表達(dá)的變化。本研究試圖通過探討Homer與注意缺陷多動(dòng)障礙之間的相互關(guān)系，進(jìn)一步了解兒童注意缺陷多動(dòng)障礙的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制，并為闡明ADHD的發(fā)病機(jī)制及治療機(jī)理提供新的線索和理論依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 池霞;郭錫熔;洪琴;費(fèi)莉;郭梅;潘曉琴;陳榮華;;SHR大鼠前額葉皮層基因表達(dá)譜特征的初步分析[J];中國(guó)兒童保健雜志;2007年04期

2 朱萍萍;吳小南;陳潔;;大蒜拮抗酒精攝入對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年05期

3 張敏;周穎斌;金毅;;缺血再灌注對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬神經(jīng)元Glu、NR_1和NR_(2B)表達(dá)的影響[J];齊魯醫(yī)學(xué)雜志;2006年04期

4 池霞;郭錫熔;陳榮華;費(fèi)莉;郭梅;潘曉琴;;注意缺陷障礙動(dòng)物模型的行為學(xué)特征檢測(cè)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年38期

5 蘇林雁;兒童注意缺陷多動(dòng)障礙的診斷進(jìn)展[J];中華兒科雜志;2001年11期

6 岳文浩,毛雪琴,王夢(mèng)欣;兒童注意缺陷與多動(dòng)障礙的病因與發(fā)病機(jī)理[J];中國(guó)心理衛(wèi)生雜志;2004年02期

本文編號(hào)：2714046