發(fā)布時間：2020-06-13 15:23

【摘要】：實驗?zāi)康?21三體綜合征是由于21號染色體不分離所導(dǎo)致的一種染色體病,表現(xiàn)為嚴重的智力發(fā)育障礙和多發(fā)性先天畸形,是臨床最常見的嚴重出生缺陷之一,由于該病缺乏有效的治療手段,給社會、家庭帶來異常沉重的負擔,因而進行孕早期篩查和產(chǎn)前染色體診斷是降低其發(fā)生率的有效途徑。但目前仍未見21三體患者CpG島DNA甲基化狀態(tài)的相關(guān)報道,因此,研究21三體患者CpG島甲基化狀態(tài),這對探索更有效、更特異的用于21三體產(chǎn)前風(fēng)險評估的表觀遺傳學(xué)分子靶點具有重要的科學(xué)意義和臨床實踐價值。 實驗方法:運用HpaII McrBC PCR(HM-PCR)方法篩檢分析21qCpG島甲基化狀態(tài)。首先從UCSC數(shù)據(jù)庫獲得21qCpG島DNA序列,并與華大基因炎黃數(shù)據(jù)庫比對,驗證序列和引物。然后建立HM-PCR檢測方法,并利用HM—PCR技術(shù)篩查和分析了150例21三體患者21q上2690個CpG島,并將患者CpG島甲基化狀態(tài)與正常個體進行比較。 實驗結(jié)果:本研究首先驗證了149個CpG島的DNA序列和148對CpG島引物的準確性,明確序列和引物在中國漢族人群運用的可行性。建立了簡化的HM—PCR方法。HM—PCR篩查發(fā)現(xiàn)21三體患者21號染色體長臂的CpG島中, 98個無甲基化,30個完全甲基化,12個雜合甲基化,8個不完全甲基化,在健康個體21號染色體長臂的148個CpG島中也得到完全相同結(jié)果。有4個雜合甲基化CpG島(編號:11,15,27,71)與日本人存在差異,日本人群呈現(xiàn)出無甲基化狀態(tài);有1個雜合甲基化CpG島(編號:93)與日本人不一致,日本人群呈現(xiàn)出完全甲基化狀態(tài)。這種差異是否是種族之間的差異,尚需對這5個CpG島進行重亞硫酸鹽測序確認。第103號CpG島沒有HpaII和HhaI酶切位點,因此,需要利用重亞硫酸鹽測序檢測。 實驗結(jié)論:21三體患者與健康個體之間在21qCpG島上不存在DNA甲基化狀態(tài)的差異;21qCpG島DNA甲基化狀態(tài)在同一種族內(nèi)高度一致,那么21qCpG島DNA甲基化狀態(tài)可否為種族間識別的表觀遺傳學(xué)標記,尚需重亞硫酸鹽測序法予以證實。
【圖文】：

45867388”，然后點擊 get DNA 按鈕，獲得 130 號的 DNA 序列。1.2.2 華大基因炎黃數(shù)據(jù)庫比對 CpG 島 DNA 序列（1）打開華大基因炎黃數(shù)據(jù)庫頁面，如圖1-4：第11期 夏茵茵：21三體綜合征21qCpG島DNA甲基化水平研究 E069-11-11

如果兩者完全一致，則紅線連成一條直線，一致率為 100%判定為完全匹配（圖1-5）；若紅線無法連成一條直線，比對結(jié)果一致率處于>95%且<100%，，則判定為匹配度>95%（圖 1-6）；比對結(jié)果一致率處于>90%且≤95%，判定為匹配度>90%（圖 1-7）；比對結(jié)果一致率處于>85%且≤90%，判定為匹配度>85%；比對結(jié)果一致率處于>80%且≤85%，判定為匹配度>80%；比對結(jié)果一致率處于>75%且≤80%，判定為匹配度>75%；比對結(jié)果一致率處于>70%且≤75%，判定為匹配度>70%；比對結(jié)果一致率處于>65%且≤70%
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R725.9

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本文編號：2711367