膽紅素腦病時(shí)皮層及海馬TrkB及其mRNA表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究

發(fā)布時(shí)間：2020-06-13 08:11

【摘要】： 目的通過建立膽紅素腦病模型,觀察腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derivedneurotrophic factor,BDNF)的特異性受體酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B,TrKB)及其mRNA在大腦皮層及海馬的表達(dá)情況,探討其在膽紅素腦病中可能的保護(hù)作用及機(jī)制,為探索新生兒膽紅素腦病臨床治療提供新的理論基礎(chǔ)。方法取出生后2-5天內(nèi)的新生豚鼠60只(昆明醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供),隨機(jī)分為6組(C4h組、C8h組、T_14h組、T_18h組、T_24h組、T_28h組),每組10只。對(duì)照組分為4小時(shí)組(C4h組)和8小時(shí)組(C8h組);實(shí)驗(yàn)組分為:腹腔注射晶體膽紅素100μg/g后4h處死組(T_14h組)、8h處死組(T_18h組),腹腔注射晶體膽紅素200μg/g后4h處死組(T_24h組)、8h處死組(T_28h組)。分別在給藥后相應(yīng)時(shí)間處死,其腦組織按相應(yīng)步驟進(jìn)行固定、石蠟包埋等制成石蠟切片后用免疫組化、原位雜交技術(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,并應(yīng)用圖像分析儀分別進(jìn)行陽性細(xì)胞的計(jì)數(shù)和平均灰度值的測(cè)量,最后應(yīng)用單因素方差分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果(1)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組在大腦皮層和海馬區(qū)域均可見到表達(dá)TrKB及TrKBmRNA的陽性神經(jīng)細(xì)胞。(2)TrKB的表達(dá)情況如下:①大腦皮層:大腦皮層實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組表達(dá)均有升高趨勢(shì),T_18h組較T_14h組,T_28h組較T_24h組表達(dá)均增高(P＜0.05),T_28h組較其他各組表達(dá)明顯升高(P＜0.01)。②海馬區(qū)域:實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組表達(dá)均有升高趨勢(shì)但海馬各區(qū)升高趨勢(shì)各有所不同。(3)TrKB mRNA的表達(dá)情況如下:①大腦皮層:實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組表達(dá)均增高,T_18h組較T_14h組,T_28h組較T_24h組表達(dá)均增高(P＜0.05),T_28h組較其他各組表達(dá)均增高(P＜0.01)。②海馬區(qū)域:實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組表達(dá)均有升高趨勢(shì),且陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度升高明顯(P＜0.05),但海馬各區(qū)升高趨勢(shì)各有所不同。結(jié)論(1)TrKB、TrKB mRNA在正常新生豚鼠大腦皮層及海馬各區(qū)均有表達(dá),提示TrKB在神經(jīng)元的正常生存、分化、生長(zhǎng)、增殖和其他正常的生理功能方面有重要作用。(2)TrKB及TrKB mRNA在皮層的表達(dá)是隨著時(shí)間和損傷程度的加重而表達(dá)增高的,存在一定的時(shí)間劑量依賴關(guān)系;TrKB及TrKB mRNA在海馬各區(qū)表達(dá)是升高的,但各區(qū)升高趨勢(shì)不盡相同,時(shí)間劑量依賴關(guān)系不明顯。(3)不同區(qū)域TrKB及TrKB mRNA對(duì)膽紅素導(dǎo)致的神經(jīng)損傷反應(yīng)也不盡相同。TrKB及TrKB mRNA在膽紅素腦病的表達(dá)存在時(shí)空變化,不同時(shí)間段、不同損傷程度表達(dá)的方式和程度不一樣,皮層和海馬對(duì)膽紅素?fù)p傷做出的反應(yīng)速度和強(qiáng)弱也不盡相同,皮層對(duì)膽紅素?fù)p傷的反應(yīng)可能早于海馬。(4)TrKB及TrKB mRNA在膽紅素腦病時(shí)表達(dá)上調(diào),提示其在膽紅素腦病神經(jīng)修復(fù)中有一定的作用;提示膽紅素腦病時(shí)大腦對(duì)TrKB的配體BDNF需求增加,適時(shí)地補(bǔ)充BDNF,可以使TrKB與其配體BDNF最大限度的結(jié)合發(fā)揮其對(duì)腦神經(jīng)元的保護(hù)作用。
【圖文】：