【摘要】：第一部分體外模型探究AI-2類似物對混合生物膜形成的影響目的:本課題組根據前期分子流行病學基礎,選取銅綠假單胞菌野生型PAO1和新生兒口咽部常見細菌輕型鏈球菌(Streptococcus mitis,S.mitis)構建混合生物膜(Biofilm,BF)體外模型,前期已發(fā)現PAO1的BF形成受自誘導因子-2(Autoinducer-2,AI-2)調控。本研究為明確AI-2類似物是否能夠干預PAO1S.mitis混合BF形成,旨在為進一步探究AI-2干預混合BF具體作用機制打下基礎。方法:本項目在前期研究的基礎上,選取銅綠假單胞菌的野生株PAO1和S.mitis構建混合BF體外模型,使用AI-2類似物D-核糖(D-ribose)對混合BF進行干預。在BF生長過程中加入D-ribose,通過掃描電鏡、激光共聚焦成像、結晶紫染色、q-PCR及菌落計數等技術定性、定量對比分析,以期明確AI-2類似物是否能夠干預S.mitisPAO1混合BF的形成。結果:S.mitis能夠產生AI-2,不能形成BF;PAO1不產生AI-2,可形成BF;S.mitis能夠顯著促進PAO1的BF形成、上調PAO1的QS基因,加入AI-2類似物D-ribose后,能夠顯著抑制S.mitisPAO1混合BF形成,其BF內活菌數、致密度、結構復雜程度、厚度均顯著降低。結論:1.S.mitis促進PAO1的BF形成是通過分泌到胞外的物質起到的促進作用;2.加入AI-2類似物D-ribose后可抑制S.mitisPAO1混合BF形成。這提示S.mitis產生的AI-2在S.mitisPAO1混合BF形成過程中有重要作用,AI-2可作為干預S.mitisPAO1混合BF形成的重要靶點。第二部分體內模型探究AI-2類似物對氣管導管混合生物膜感染的影響目的:S.mitis產生的AI-2在S.mitisPAO1混合BF形成過程中有重要作用,可以促進PAO1體外BF的作用。使用AI-2類似物D-ribose干預,可以抑制其混合BF形成。故本部分實驗進一步在體內研究:在氣管插管BF感染體內模型中,S.mitis是否可以增強PAO1致病力?使用AI-2類似物D-ribose干預是否可以減輕混合BF感染?這是本部分實驗擬闡明的問題。方法:將實驗分為5組,分別為P組(PAO1單菌種BF導管),PS組(PAO1S.mits混合菌種BF導管),PSD組(PAO1S.mits混合BF導管,氣管插管后用D-ribose干預),S組(S.mits導管),C組(無菌導管組)。分別觀察大鼠一般情況、生存曲線、計數肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數、肺部組織HE染色切片、平板計數肺組織內活菌數,ELISA法檢測BALF中IL-4、IL-6、IL-10。結果:在SD大鼠氣管插管模型中,PS組較P組的大鼠活力更低,死亡率更高、肺部病理改變更明顯、肺部細菌量更大;使用D-ribose霧化干預后,可以降低PAO1S.mitis混合BF感染的嚴重程度。C組和S組各項感染指標及病變程度均低于另外三組。結論:S.mitis可能是通過在體內與PAO1形成更致密的BF,導致“免疫逃逸”,使得機體清除細菌能力降低,體內感染程度更重、死亡率更高;加入AI-2類似物D-ribose后可減輕感染程度。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R722.135

【參考文獻】

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1 傅雅琨;余加林;蘆起;艾青;宋思捷;賀雨;張云輝;;銅綠假單胞菌與輕型鏈球菌混合生物膜體外模型的建立[J];中國抗生素雜志;2015年04期

2 宋超;余加林;艾青;劉東;陸韋;蘆起;彭寧寧;;機械通氣新生兒氣管導管表面生物膜細菌多樣性研究[J];中華兒科雜志;2013年08期

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本文編號：2710102