【摘要】： 目的:先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung's Disease,HSCR)是小兒常見的先天性消化道疾病,以消化道神經(jīng)節(jié)細胞缺失為主要特征。目前的研究顯示多種基因與其發(fā)病有關(guān),其中RET原癌基因(RET proto-oncogen)是最主要的基因。RET基因多態(tài)性和單倍型,包含疾病相關(guān)的突變,可能作為基因修飾因子存在,并且可能增加神經(jīng)嵴胚細胞發(fā)育過程中發(fā)生紊亂的危險性�；蚨鄳B(tài)性在正常人群中相對常見,在基因突變較少的高外顯率疾病中可增加普通人群患病的危險性。本實驗研究天津地區(qū)先天性巨結(jié)腸RET基因13號外顯子基因表達情況,探討其與HSCR發(fā)病的關(guān)系。 資料和方法:收集2003年5月至2007年8月在天津市兒童醫(yī)院外科診治的HSCR患兒的靜脈全血標本73例,其中男59例,女14例,長段型13例,短段型60例,年齡24天—8歲,均為散發(fā),無家族性HSCR遺傳病史。所有患者均經(jīng)術(shù)后病理證實為HSCR。收集10例與胃腸道疾病無關(guān)的患兒靜脈全血標本作為對照組。術(shù)前抽取研究樣本靜脈全血2ml用鹽析法提取血樣本基因組DNA,聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴增RET基因13號外顯子,應(yīng)用直接測序方法分析13號外顯子的基因多態(tài)性改變,比較基因多態(tài)性位點等位基因頻率在兩組中的差異。 結(jié)果:RET基因13號外顯子存在T769G單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotidepolymorphisms,SNP)改變,等位基因G較等位基因T的頻數(shù)高,T769G等位基因的頻率在HSCR組中為G89.0%,T11.0%;在對照組中為G50.0%,T50.0%。兩組的等位基因頻率差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=17.449,P＜0.001)。HSCR組中兩種臨床表型的等位基因頻數(shù)之間比較無顯著差異(χ~2=0.837,P＞0.05)。 結(jié)論:RET基因13號外顯子T769G位點基因多態(tài)性改變與HSCR的發(fā)生密切相關(guān),且存在種族差異,等位基因頻率與HSCR的臨床表型不相關(guān)。
【圖文】：

(4.)照相和圖象分析將凝膠移入紫外圖像成像儀中觀察，是否有熒光條帶出現(xiàn)，，進而可以移入凝膠成像儀中進行照相和圖象分析(見圖1)。圖1提取的靜脈血標本DNA電泳圖3)目的基因體外擴增聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)

圖3RET基因13號外顯子PCR產(chǎn)物電泳圖序產(chǎn)物送上海生工生物工程有限公司，進行純化，雙向測序IpRIsM3730，測序試劑為BigDyeterminatorv3，l。分析Chromas軟件分析直接測序結(jié)果，結(jié)合測序圖判斷測序結(jié)況下，除了開始約10至30個堿基，在650bp以內(nèi)可以達到，但儀器及軟件有時也會發(fā)生錯讀或漏讀堿基的情況，此么堿基。所以，一般只有進行正反鏈同時測序，在兩個序，才能確保所得序列100%可靠)，必要時送另一公司(大重復(fù)測序，以避免測序公司系統(tǒng)誤差。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R726.5

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本文編號：2707353