【摘要】： 目的 新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)是新生兒時期的常見病，其致死、致殘率很高，發(fā)病機制目前尚不清楚，一般多認(rèn)為宮內(nèi)缺氧、產(chǎn)時窒息所致的缺血性再灌注損傷是其主要的致病因素之一，，且缺氧、缺血后腦組織血運供應(yīng)的改善與神經(jīng)元功能的恢復(fù)密切相關(guān)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)家族是一組近年來新發(fā)現(xiàn)的血管新生因子，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E及胎盤生長因子(PlGF)六大成員，具有促進內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，細(xì)胞間相互粘附，排列成直線以及形成開放的腔樣結(jié)構(gòu)，增加血管的通透性，改造細(xì)胞外基質(zhì)以適應(yīng)血管生成，減輕神經(jīng)元損傷，減輕腦水腫形成的作用。許多研究證明VEGF家族在成人腦缺氧缺血性疾病中發(fā)揮著重要作用，但有關(guān)VEGF在正常新生兒腦組織及HIE時的分布及表達情況的研究甚少。本研究通過新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)動物模型，動態(tài)觀察正常生后7日齡新生大鼠及HIBD后不同時間腦VEGF-A mRNA和蛋白的表達及其分布情況，探討VEGF-A在HIBD發(fā)病中的作用。 材料與方法 選用本院提供的正常生后新生7日齡Wistar大鼠為研究對象，采用Rice法制作HIBD模型。氧濃度為5％，氮氣濃度為95％，持續(xù)時間20分鐘。在缺氧缺血(HI)后不同時間點處死大鼠，取腦進行研究，同時設(shè)置對照組。具體研究內(nèi)容：1．應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測VEGF-A蛋白在正常生后7日齡新生大鼠及HIBD后不同時間點的腦組織中的分布及表達情況：標(biāo)本為腦組織石蠟切片，抗原行微波加熱修復(fù)，進行SABC染色。2．應(yīng)用原位雜交技術(shù)檢測VEGF-A mRNA在正常生后7日齡新生大鼠及HIBD后不同時間點的腦組織中分布及表達情況。3．結(jié)果判定：400倍光鏡下觀察實驗結(jié)果，陽性表達的細(xì)胞胞漿呈棕黃色，胞核為藍色淡染。其中原位雜交的陽性表達主要在胞漿，少數(shù)胞核亦顯色。4．統(tǒng)計學(xué)分析：400倍光鏡下 每組每個時間點各觀察6只大鼠，每只大鼠取相鄰切片兩張，每張切片取5 個高倍視野，經(jīng)日本產(chǎn)的OLYMPUS BX51，rF數(shù)碼相機采樣，輸人MetaMor- ph Imager匆stem version 4.6，將大腦皮質(zhì)免疫組化和原位雜交的陽性細(xì)胞 數(shù)轉(zhuǎn)化面積百分比，并計算其平均值(勸和標(biāo)準(zhǔn)差值(s)，所有數(shù)據(jù)以平均 值土表準(zhǔn)差值(又士s)表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)比較采用 配對樣本t檢驗，P0.05有意義。 結(jié)果 1.在正常生后7日齡新生Wistar大鼠大腦皮質(zhì)、腦髓質(zhì)、海馬、軟腦 膜、室管膜、腦血管內(nèi)皮細(xì)胞、脈絡(luò)叢均有VEGF一A mRNA及蛋白呈低水 平表達，其中尤以腦皮質(zhì)錐體細(xì)胞、海馬DG區(qū)及血管內(nèi)皮細(xì)胞最為明顯。 生后第8d時vEGF一A的表達逐漸升高，gd時表達達高峰，以后逐漸降低， 并持續(xù)至生后第35d。 2.Hl可誘導(dǎo)VEGF一A mRNA及蛋白表達，Hl后Zh VEGF一A mRNA 及蛋白表達開始增加，并分別于Hl后12h、24h達高峰，以后逐漸降低，并持 續(xù)至HI后14d，班后21一28d時雖然VEGF表達仍高于正常對照組，但無 統(tǒng)計學(xué)意義。VEGF一A mRNA及蛋白表達的定位分析顯示:HI后腦VEGF 一A mRNA及蛋白的表達部位與正常新生鼠腦基本相同，但表達強度增強， 持續(xù)時間延長。 結(jié)論 1.正常生后7日齡新生大鼠即有VEGF mRNA和蛋白的表達。 2.Hl可誘導(dǎo)VEGF一A mRNA及蛋白表達。 3.Hl后腦VEGF一A mRNA及蛋白的表達部位與正常新生鼠腦基本相 同，但表達強度增強，持續(xù)時間延長。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R722.1

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6 田

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