【摘要】：目的建立新生SD大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎(neonatal necrotizing enterrocolitis, NEC)模型,研究補充益生菌雙歧桿菌對NEC新生大鼠腸組織中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白介素10(Interleukin-10, IL-10)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible isoform nitric oxide synthase, iNOS)的影響,探討雙歧桿菌對新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎的保護作用。 方法128只出生2天的SD(Sprague-Dewley)大鼠,雌雄不限,被隨機分成4組,每組32只。A組建立NEC模型:生理鹽水0.2ml/只灌胃每天一次,持續(xù)一周,一周后,予腹腔注射LPS(5mg/kg,用生理鹽水配成5mg/ml)建立NEC模型。B組建立NEC模型并添加雙歧桿菌:每只每日0.04g(含2億個活菌)雙歧桿菌灌胃(用PH=7.4的生理鹽水配制0.2ml/只),持續(xù)一周,同A組腹腔注射內(nèi)毒素(lipopolysaccharide, LPS)建立NEC模型。C組為空白對照組:僅用生理鹽水0.2ml/只灌胃,每天一次,持續(xù)一周。D組為雙歧桿菌對照組:僅添加雙歧桿菌,方法同B組。A組和B組腹腔注射LPS后,于2、6、12、24小時,每個時間點隨機抽取8只采用頸椎脫臼法快速處死,C組和D組于相同時間點隨機抽取8只處死,解剖回盲部近端腸管觀察其病理標(biāo)本,應(yīng)用iNOS免疫組織化學(xué)染色,進行定性、定位及定量統(tǒng)計分析;并留取十二指腸下端至直腸上端腸道組織,采用ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附實驗)檢測腸組織勻漿中TNF-α、IL-10含量。 結(jié)果 1.各組新生SD大鼠大體形態(tài)學(xué)及腸組織病理學(xué)改變 A組注射LPS造模后,迅速出現(xiàn)懶動拒乳、腹脹腹瀉;6~12小時癥狀加重,表現(xiàn)為活動度更差,精神萎靡,呼吸增快,嚴(yán)重者出現(xiàn)抽搐,甚至死亡。動物處死后,解剖所見胃潴留明顯,部分腸管可見暗紅色壞死點,甚至表現(xiàn)為晦暗無光澤,腸壁水腫僵硬,脆性增加,以6小時明顯;B組造模及雙歧桿菌灌胃處理后,也相繼出現(xiàn)腹脹、活動度減少,但程度相對較輕,恢復(fù)較快,解剖后腸管大體情況相對較輕。 A組造模后,光鏡下6小時左右可見粘膜下層或固有層嚴(yán)重分離,腸絨毛腺體崩解分離、脫落缺失;12小時部分腸絨毛上皮細(xì)胞開始修復(fù),但輪廓不清;24小時后粘膜下層和肌層水腫有所消退,腸絨毛結(jié)構(gòu)明顯。B組病理組織學(xué)改變較A組輕微。B組2小時、6小時、12小時、24小時腸組織病理損傷評分分別是(1.127±0.344)、(2.067±0.579)、(1.279±0.460)、(1.125±0.453),均顯著低于A組(P0.05)。 2.各組新生SD大鼠腸組織TNF-α、IL-10及iNOS變化 B組2小時、6小時、12小時腸組織TNF-α分別是(244.464±11.264)、(250.674±11.139)、(246.233±11.750)ng/ml,均顯著低于A組(P0.05);B組各時間點腸組織IL-10分別是(186.325±10.448)、(189.758±9.346)、(186.476±9.930)、(199.793±9.987)ng/ml,均顯著高于A組(P0.05);B組各時間點腸組織iNOS灰度值別是(94.476±11.042)、(116.556±11.898)、(99.339±15.680)、(92.094±10.682),均顯著低于A組(P0.05)。統(tǒng)計表明:腸組織病理損傷評分與TNF-α和iNOS水平成正相關(guān)性(r值分別是0.646和0.774),腸組織病理損傷評分與IL-10水平成負(fù)相關(guān)性(r值為-0.598)。 結(jié)論 1.給予雙歧桿菌灌胃后的新生大鼠NEC實驗組,腸組織TNF-α和iNOS水平有顯著下降,表明雙歧桿菌或許通過抑制炎癥級聯(lián)反應(yīng)中TNF-α和iNOS來保護腸道。 2.給予雙歧桿菌灌胃后的新生大鼠NEC實驗組,腸組織IL-10水平顯著升高,表明雙歧桿菌或許通過增加腸道免疫性IL-10的表達(dá)來保護腸道。 3.腸組織病理損傷評分與TNF-α和iNOS水平成正相關(guān)性(r值分別是0.646和0.774);腸組織病理損傷評分與IL-10水平成負(fù)相關(guān)性(r值為-0.598),TNF-α、iNOS和IL-10可能共同參與了NEC的炎癥病理過程。 4.雙歧桿菌對新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎腸損傷有明顯保護作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

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本文編號：2697033