【摘要】： 目的本研究通過(guò)檢測(cè)小鼠胚胎心臟發(fā)育過(guò)程中GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因轉(zhuǎn)錄水平的動(dòng)態(tài)表達(dá)和這些基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3乙酰化水平的變化,以及組蛋白乙�；竵喰蚿300是否參與調(diào)控上述四種心臟發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá),從表觀遺傳組蛋白乙酰化修飾的角度,初步探討胚胎心臟發(fā)育過(guò)程中多基因時(shí)序表達(dá)的染色質(zhì)重塑調(diào)控模式,為進(jìn)一步研究先天性心臟疾病的發(fā)生機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。 材料與方法選取胎齡10.5天和16.5天昆明小鼠正常胚胎心臟,用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative polymerase chain reaction, Q-PCR)方法觀察GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA的動(dòng)態(tài)表達(dá);采用染色質(zhì)免疫沉淀(Chromatin immunoprecitation, ChIP)技術(shù),分別用ChIP級(jí)抗乙�；慕M蛋白H3抗體和抗p300抗體免疫沉淀與其所結(jié)合的DNA,設(shè)計(jì)針對(duì)心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)的DNA引物,用Q-PCR的方法擴(kuò)增抗體所富集的上述基因啟動(dòng)子DNA,觀察胚胎心臟發(fā)育過(guò)程中組蛋白乙酰化水平及組蛋白乙�；竵喰蚿300是否參與調(diào)控上述四種心臟特異轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。 結(jié)果 1.心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA表達(dá)水平在心臟發(fā)育的不同階段(胎齡10.5天和16.5天)呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化,其中GATA4、MEF2C基因mRNA相對(duì)β-actin的表達(dá)水平,E10.5明顯低于E16.5(P0.01),而Nkx2.5、Tbx5 mRNA相對(duì)表達(dá)水平,E10.5明顯高于E16.5(P0.05)。 2.染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)分析顯示,胎齡10.5天和16.5天小鼠胚胎心臟組織中,這些基因啟動(dòng)子區(qū)存在著組蛋白H3的乙酰化水平的差異,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中Nkx2.5、MEF2C和Tbx5基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白乙�；阶兓厔�(shì)與相應(yīng)基因的mRNA表達(dá)水平變化趨勢(shì)相一致。同時(shí),染色質(zhì)免疫共沉淀檢測(cè)結(jié)果顯示p300與GATA4,Nkx2.5,MEF2C和Tbx5基因啟動(dòng)子通過(guò)某種方式相互結(jié)合�？筽300抗體免疫沉淀的上述基因啟動(dòng)子DNA量在這兩個(gè)小鼠心臟發(fā)育的關(guān)鍵階段有所不同,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論數(shù)據(jù)表明,心臟特異轉(zhuǎn)錄因子的動(dòng)態(tài)表達(dá)可能是通過(guò)調(diào)節(jié)相應(yīng)基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3的乙�；瘉�(lái)激活基因啟動(dòng)子實(shí)現(xiàn)的,p300可能參與了這一過(guò)程。這些結(jié)果提示p300是調(diào)控心臟發(fā)育的一個(gè)重要組成部分,可能為心臟發(fā)育相關(guān)基因在小鼠心臟發(fā)生過(guò)程中動(dòng)態(tài)表達(dá)的機(jī)制之一。
【圖文】：

但心房間有房間孔相通。E16.5 胚胎心臟已具成體心臟外形，心房、心室已被心包所包裹（圖2-1）。圖 2-1 不同發(fā)育時(shí)期小鼠胚胎和心臟的形態(tài)特征Fig2.1 Morphology of embryo and heart in different developmental stagesA. E10.5 胚胎；B. E10.5 胚胎心臟；C. E16.5 胚胎；D. E16.5 胚胎心臟A. Embryo at 10.5 days; B. Embryonic heart at 10.5 days; C. Embryo at 16.5 days; D. Embryonicheart at 16.5 days.

胎心臟組織總 RNA 提取取 RNA 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示清晰的三條帶，， 28S 條帶亮度約為 18S 條帶的 2 倍，5S 條帶隱約可的，未降解（見圖 2-2）。生物分光光度計(jì)測(cè)量所提取 RNA 溶液 OD260/OD2 RNA 純度高，無(wú)蛋白或氯仿等試劑污染。測(cè)得所提～500ng/μl。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R725.4

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 孔娟娟;Islet-1在心臟發(fā)育的乙�；{(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的樞紐作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2697032