【摘要】： 目的: 應用免疫組織化學染色方法,觀察實驗組先天性巨結腸癥(Hirschsprung’s disease, HD)患兒擴張段(有神經(jīng)節(jié)細胞段)和痙攣段(無神經(jīng)節(jié)細胞段)腸壁神經(jīng)叢中微管相關蛋白-2(Microtubule Associated Protein-2,MAP-2)的表達結果,同時設立對照組。并對比觀察神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neurone specific enolase, NSE)、S-100蛋白(Soluble protein 100, S-100)兩種神經(jīng)標志物在實驗組巨結腸腸壁及對照組表達的情況,旨在于進一步探討先天性巨結腸癥的發(fā)病機制與腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的關系,以期找出診斷先天性巨結腸癥簡便有效的方法。 方法: 1.標本取自蘇州大學附屬兒童醫(yī)院小兒外科2007-2009年經(jīng)臨床確診的HD患兒手術切除的腸組織30例,包括擴張段與痙攣段,作為實驗組。并選取15例年齡與之相近的無HD及其它腸壁神經(jīng)發(fā)育異常疾病患兒的手術切除結腸標本作為對照組。 2.對實驗組HD痙攣段、擴張段和對照組腸壁組織進行切片行HE染色和MAP-2、NSE、S-100蛋白的免疫組織化學染色,并定性、定位及定量分析,定量分析采用圖像分析軟件(Image-Pro-Plus)分別判定各指標在HD擴張段與痙攣段神經(jīng)叢中陽性染色面積百分比,所得數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析。 結果: 1.HE染色結果示實驗組HD擴張段和對照組腸壁肌間神經(jīng)叢及粘膜下神經(jīng)叢中神經(jīng)節(jié)細胞皆存在,大小不等;HD的痙攣段未見神經(jīng)節(jié)細胞,且各層中神經(jīng)纖維均有不同程度的排列改變。 2.微管相關蛋白-2免疫組化染色可見其在HD擴張段及對照組結腸的肌間及粘膜下神經(jīng)叢的神經(jīng)節(jié)細胞胞漿內呈強陽性表達,對神經(jīng)纖維呈弱陽性或陰性表達;而HD痙攣段腸壁肌間神經(jīng)叢及粘膜下神經(jīng)叢中微管相關蛋白-2的免疫組化染色則未見陽性表達的神經(jīng)節(jié)細胞,神經(jīng)纖維大多呈陰性表達,少數(shù)呈弱陽性表達。NSE對HD擴張段及對照組腸壁肌間、粘膜下神經(jīng)叢的神經(jīng)節(jié)細胞呈強陽性表達,神經(jīng)纖維呈陽性表達;在HD痙攣段腸壁可見NSE陽性表達的神經(jīng)纖維;S-100蛋白在HD擴張段及對照組腸壁肌間、粘膜下神經(jīng)叢中均不表達于神經(jīng)節(jié)細胞,在神經(jīng)節(jié)細胞周圍成分施萬細胞及周圍細胞中呈強陽性表達,在HD痙攣段可見神經(jīng)纖維及神經(jīng)膠質細胞對S-100呈強陽性反應,且陽性表達的神經(jīng)纖維均明顯增生,形態(tài)扭曲。 3.定量分析:MAP-2、NSE、S-100在HD擴張段及痙攣段神經(jīng)叢中平均陽性染色面積百分率均數(shù)分別為0.26、0.12;0.32、0.22;0.25、0.39,經(jīng)統(tǒng)計軟件分析各指標在HD擴張段及痙攣段中的差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 結論: 1.微管相關蛋白-2對神經(jīng)節(jié)細胞染色特異性高,對神經(jīng)纖維呈弱陽性或陰性表達,在病理診斷上較NSE、S-100蛋白能更好地顯示神經(jīng)節(jié)細胞。 2.微管相關蛋白-2免疫組化染色可很好地顯示正常結腸及HD擴張段腸壁的神經(jīng)節(jié)細胞,而在HD痙攣段該指標免疫組化染色結果大多表達陰性。微管相關蛋白-2可作為診斷HD很好的神經(jīng)標志物。 3.微管相關蛋白-2在HD的痙攣段腸管內的肌間神經(jīng)叢及粘膜下神經(jīng)叢大多表達陰性,少量呈弱陽性表達,對小塊組織或直腸粘膜活檢診斷HD有幫助,可作為篩選診斷HD的一種敏感有效的方法。
【圖文】：

圖 1：對照組腸段肌間神經(jīng)叢（HE×400）典型的成熟神經(jīng)節(jié)細胞易辨認。圖 2：對照組粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細胞。圖 3：HD 擴張段肌間神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細胞。圖 4：HD 擴張段粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），，可見典型成熟的神經(jīng)節(jié)細胞。

圖 1：對照組腸段肌間神經(jīng)叢（HE×400）典型的成熟神經(jīng)節(jié)細胞易辨認。圖 2：對照組粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細胞。圖 3：HD 擴張段肌間神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細胞。圖 4：HD 擴張段粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），可見典型成熟的神經(jīng)節(jié)細胞。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R726.5

【參考文獻】

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本文編號：2697006