【摘要】： 目的: 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法,觀察實(shí)驗(yàn)組先天性巨結(jié)腸癥(Hirschsprung’s disease, HD)患兒擴(kuò)張段(有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段)和痙攣段(無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段)腸壁神經(jīng)叢中微管相關(guān)蛋白-2(Microtubule Associated Protein-2,MAP-2)的表達(dá)結(jié)果,同時(shí)設(shè)立對(duì)照組。并對(duì)比觀察神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neurone specific enolase, NSE)、S-100蛋白(Soluble protein 100, S-100)兩種神經(jīng)標(biāo)志物在實(shí)驗(yàn)組巨結(jié)腸腸壁及對(duì)照組表達(dá)的情況,旨在于進(jìn)一步探討先天性巨結(jié)腸癥的發(fā)病機(jī)制與腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)系,以期找出診斷先天性巨結(jié)腸癥簡便有效的方法。 方法: 1.標(biāo)本取自蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院小兒外科2007-2009年經(jīng)臨床確診的HD患兒手術(shù)切除的腸組織30例,包括擴(kuò)張段與痙攣段,作為實(shí)驗(yàn)組。并選取15例年齡與之相近的無HD及其它腸壁神經(jīng)發(fā)育異常疾病患兒的手術(shù)切除結(jié)腸標(biāo)本作為對(duì)照組。 2.對(duì)實(shí)驗(yàn)組HD痙攣段、擴(kuò)張段和對(duì)照組腸壁組織進(jìn)行切片行HE染色和MAP-2、NSE、S-100蛋白的免疫組織化學(xué)染色,并定性、定位及定量分析,定量分析采用圖像分析軟件(Image-Pro-Plus)分別判定各指標(biāo)在HD擴(kuò)張段與痙攣段神經(jīng)叢中陽性染色面積百分比,所得數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果: 1.HE染色結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組HD擴(kuò)張段和對(duì)照組腸壁肌間神經(jīng)叢及粘膜下神經(jīng)叢中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞皆存在,大小不等;HD的痙攣段未見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,且各層中神經(jīng)纖維均有不同程度的排列改變。 2.微管相關(guān)蛋白-2免疫組化染色可見其在HD擴(kuò)張段及對(duì)照組結(jié)腸的肌間及粘膜下神經(jīng)叢的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿內(nèi)呈強(qiáng)陽性表達(dá),對(duì)神經(jīng)纖維呈弱陽性或陰性表達(dá);而HD痙攣段腸壁肌間神經(jīng)叢及粘膜下神經(jīng)叢中微管相關(guān)蛋白-2的免疫組化染色則未見陽性表達(dá)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,神經(jīng)纖維大多呈陰性表達(dá),少數(shù)呈弱陽性表達(dá)。NSE對(duì)HD擴(kuò)張段及對(duì)照組腸壁肌間、粘膜下神經(jīng)叢的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞呈強(qiáng)陽性表達(dá),神經(jīng)纖維呈陽性表達(dá);在HD痙攣段腸壁可見NSE陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維;S-100蛋白在HD擴(kuò)張段及對(duì)照組腸壁肌間、粘膜下神經(jīng)叢中均不表達(dá)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞周圍成分施萬細(xì)胞及周圍細(xì)胞中呈強(qiáng)陽性表達(dá),在HD痙攣段可見神經(jīng)纖維及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)S-100呈強(qiáng)陽性反應(yīng),且陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維均明顯增生,形態(tài)扭曲。 3.定量分析:MAP-2、NSE、S-100在HD擴(kuò)張段及痙攣段神經(jīng)叢中平均陽性染色面積百分率均數(shù)分別為0.26、0.12;0.32、0.22;0.25、0.39,經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件分析各指標(biāo)在HD擴(kuò)張段及痙攣段中的差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論: 1.微管相關(guān)蛋白-2對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞染色特異性高,對(duì)神經(jīng)纖維呈弱陽性或陰性表達(dá),在病理診斷上較NSE、S-100蛋白能更好地顯示神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 2.微管相關(guān)蛋白-2免疫組化染色可很好地顯示正常結(jié)腸及HD擴(kuò)張段腸壁的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,而在HD痙攣段該指標(biāo)免疫組化染色結(jié)果大多表達(dá)陰性。微管相關(guān)蛋白-2可作為診斷HD很好的神經(jīng)標(biāo)志物。 3.微管相關(guān)蛋白-2在HD的痙攣段腸管內(nèi)的肌間神經(jīng)叢及粘膜下神經(jīng)叢大多表達(dá)陰性,少量呈弱陽性表達(dá),對(duì)小塊組織或直腸粘膜活檢診斷HD有幫助,可作為篩選診斷HD的一種敏感有效的方法。
【圖文】：

圖 1：對(duì)照組腸段肌間神經(jīng)叢（HE×400）典型的成熟神經(jīng)節(jié)細(xì)胞易辨認(rèn)。圖 2：對(duì)照組粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。圖 3：HD 擴(kuò)張段肌間神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。圖 4：HD 擴(kuò)張段粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），，可見典型成熟的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。

圖 1：對(duì)照組腸段肌間神經(jīng)叢（HE×400）典型的成熟神經(jīng)節(jié)細(xì)胞易辨認(rèn)。圖 2：對(duì)照組粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。圖 3：HD 擴(kuò)張段肌間神經(jīng)叢（HE×400），可見成熟的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。圖 4：HD 擴(kuò)張段粘膜下神經(jīng)叢（HE×400），可見典型成熟的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R726.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2697006