【摘要】： 第一部分膽道閉鎖肝組織MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β_1的表達(dá)與肝纖維化關(guān)系的研究 目的：肝臟進(jìn)行性纖維化是影響膽道閉鎖手術(shù)療效的重要因素。本研究觀察膽道閉鎖肝組織中MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β_1的表達(dá)，探討其與肝纖維化的關(guān)系，為膽道閉鎖肝纖維化的治療提供新的方法。 方法：利用免疫組化法(S-P法)檢測(cè)33例小兒膽道閉鎖肝組織中MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β_1的表達(dá)。根據(jù)Ohkuma's分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，其中肝纖維化Ⅰ級(jí)9例，Ⅱ級(jí)10例，Ⅲ例8例，Ⅳ級(jí)6例。另取12例新生兒正常肝臟組織作為對(duì)照組。并通過圖像分析技術(shù)進(jìn)行定量研究。 結(jié)果：膽道閉鎖肝組織中TGF-β_1、MMP-1、MMP-2、TIMP-1蛋白均有不同程度表達(dá)，以肝細(xì)胞胞漿、胞膜表達(dá)最為明顯。①TGF-β_1、MMP-2、TIMP-1蛋白在肝組織中的陽性表達(dá)隨肝纖維化程度的加重而增強(qiáng)，有正的直線相關(guān)性(r=0.6179，P＜0.05；r=0.5063，，P＜0.05；r=0.5804，P＜0.05)。②MMP-1蛋白在肝組織中的表達(dá)，隨肝纖維化程度的加重?zé)o明顯變化，無直線相關(guān)性(r=0.2723，P＞0.05)。③TGF-β_1蛋白表達(dá)與MMP-2、TIMP-1間有直線相關(guān)性(r=0.9200，P＜0.01；r=0.7953，P＜0.01)；而TGF-β_1與MMP-1之間無相關(guān)性(r=-0.0594，P=0.7428)。圖像定量分析結(jié)果：TGF-β_1、MMP-2、TIMP-1在膽道閉鎖肝組織的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01)，而MMP-1在兩組間的表達(dá)無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：①TGF-β_1、MMP-2、TIMP-1與膽道閉鎖肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，隨肝纖維化加重而表達(dá)增強(qiáng)。②TIMP-1對(duì)膽道閉鎖肝纖維化的作用是間接性的，可能通過抑制MMP-1而發(fā)揮促纖維化作用。③TGF-β_1與MMP-2、TIMP-1有協(xié)同表達(dá)和調(diào)控作用，共同促進(jìn)肝纖維化發(fā)展。④通過抑制膽道閉鎖肝細(xì)胞TGF-β_1、MMP-2、TIMP-1蛋白表達(dá)，或促進(jìn)MMP-1的表達(dá)，可以成為治療BA肝纖維化的新方法。 第二部分膽道閉鎖肝組織MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β_1的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 目的：膽道閉鎖患兒的預(yù)后受多種因素的影響如：年齡、病變的類型、肝纖維程度以及術(shù)后并發(fā)癥等。肝臟進(jìn)行性纖維化是影響膽道閉鎖預(yù)后重要因素。本研究觀察不同預(yù)后膽道閉鎖肝組織中MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β_1的表達(dá)與膽道閉鎖預(yù)后的關(guān)系。 方法：收集膽道閉鎖患兒臨床資料和肝臟組織標(biāo)本19例；回顧總結(jié)19例膽道閉鎖患兒術(shù)前血清生化指標(biāo)包括總膽紅素、直接膽紅素、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶等，將19例肝臟組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)切片、HE染色。依據(jù)Ohkuma's分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將肝組織纖維化程度分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)。免疫組化(SP法)法檢測(cè)肝臟組織MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β_1的表達(dá)，圖像分析技術(shù)進(jìn)行定量分析。 結(jié)果：根據(jù)臨床治療效果將患兒分為預(yù)后良好組(7例)和預(yù)后不良組(12例)。對(duì)兩組病人的觀察指標(biāo)進(jìn)行分析比較。預(yù)后良好組與預(yù)后不良組接受手術(shù)時(shí)的平均日齡(分別為58.57±9.32；122.25±54.67)差別有顯著性意義(P＜0.01)。預(yù)后良好組肝纖維化程度較預(yù)后不良組輕(P＜0.05)；而術(shù)前總膽紅素、直接膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白水平差別無顯著性意義(P＞0.05)。預(yù)后不良組TGF-β_1、MMP-2、TIMP-1的表達(dá)明顯高于預(yù)后良好組(P＜0.01)，而MMP-1的表達(dá)在兩組間無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：①膽道閉鎖病人預(yù)后與手術(shù)時(shí)年齡、肝纖維化程度密切相關(guān)；術(shù)前總膽紅素、直接膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白水平不能提示病人的預(yù)后。②膽道閉鎖肝組織TGF-β_1、MMP-2、TIMP-1與病人預(yù)后有關(guān)，其高表達(dá)預(yù)示患兒肝臟纖維化進(jìn)展快，預(yù)后較差，應(yīng)積極作為肝移植準(zhǔn)備。 第三部分基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-1、MMP-2及其組織抑制因子 TIMP-1、TIMP-2在先天性膽總管囊腫壁的表達(dá)研究 目的：觀察先天性膽總管囊腫壁MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表達(dá)，探討其與先天性膽總管囊腫發(fā)生的關(guān)系。 方法：收集53例先天性膽總管囊腫患兒臨床資料以及囊腫壁和膽囊組織標(biāo)本，其中男21例，女32例，年齡4月～17歲，平均年齡6.5歲，另取正常膽囊組織28例作為對(duì)照組。常規(guī)HE染色，觀察囊腫壁組織形態(tài)學(xué)變化。免疫組化方法(SP法)檢測(cè)MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白表達(dá)，圖像分析技術(shù)進(jìn)行定量分析。 結(jié)果：HE染色光鏡觀察見45例(占85％)膽總管囊腫壁呈纖維增生改變，囊壁增厚，47例(89％)有微血管充血、炎性細(xì)胞浸潤，50例(94％)見囊壁粘膜不同程度脫落、萎縮、連續(xù)性中斷，伴有肌纖維斷裂；病變程度較膽總管囊腫膽囊及對(duì)照組膽囊嚴(yán)重。MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白表達(dá)于膽總管囊腫壁粘膜上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞及炎性細(xì)胞胞漿、胞膜；膽總管囊腫膽囊粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)也見不同程度表達(dá)。定量分析顯示膽總管囊腫壁MMP-1、MMP-2蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯高于膽總管囊腫膽囊及對(duì)照組膽囊(P＜0.01)；膽總管囊腫壁及其膽囊組織內(nèi)TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)強(qiáng)度均較對(duì)照組升高(P＜0.01)，而在膽總管囊腫及其膽囊組織間差異無顯著性意義(P＞0.05)。 結(jié)論：①由于胰膽管合流異常、胰液返流使膽總管壁粘膜、基質(zhì)破壞、纖維組織增生，其病理變化程度較膽總管囊腫膽囊嚴(yán)重；膽總管囊腫壁存在細(xì)胞外基質(zhì)的嚴(yán)重紊亂和破壞。②膽總管囊腫MMP-1、MMP-2的表達(dá)高于其膽囊組織；而TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)無顯著性差異，表明膽總管囊腫壁存在MMPs／TIMPs的比例失調(diào)，MMP-1及MMP-2的高表達(dá)可能與先天性膽總管囊腫的形成有關(guān)。
【圖文】：

膽道閉鎖肝纖維化11級(jí)(HEx100):伸向鄰近門管

膽道閉鎖肝纖維化川級(jí)(HExl00):伸向鄰近門管區(qū)的重度橋接纖維化
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R726.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2691426