【摘要】： 目的 1．建立新生大鼠腦室周圍白質(zhì)軟化(periventricular leukomalacia，PVL)模型，，觀察新生大鼠PVL時(shí)腦組織病理學(xué)改變。 2．研究正常新生大鼠和PVL大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦組織ephrin-B3mRNA的表達(dá)變化，以及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化。 3．探討ephrin-B3與神經(jīng)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 4．探討ephrin-B3在PVL損傷及CNS神經(jīng)再生抑制機(jī)制中的意義。 方法 160只2日齡新生SD大鼠，隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組(PVL組)86只，對照組(假手術(shù)組)74只，缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)后實(shí)驗(yàn)組死亡14只，對照組死亡2只，故進(jìn)入實(shí)驗(yàn)的兩組均為72只。采用Back等的方法建立PVL模型，分別于缺氧后0h、8h、24h、48h、72h、7d處死，HE染色觀察新生大鼠PVL時(shí)腦組織病理學(xué)改變；DAPI染色檢測缺氧缺血后不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡；熒光定量RT-PCR檢測缺氧缺血后不同時(shí)間點(diǎn)腦組織ephrin-B3mRNA表達(dá)變化。SPSS11．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1．腦組織HE染色光鏡觀察：對照組細(xì)胞排列有序、胞核大、左右側(cè)腦室對稱。PVL組缺氧缺血后24h即見胼胝體細(xì)胞稀疏、排列紊亂；48小時(shí)紋狀體內(nèi)細(xì)胞稀疏、出現(xiàn)核固縮；7d可見側(cè)腦室旁白質(zhì)呈篩網(wǎng)狀壞死。 2．ephrin-B3mRNA的表達(dá)變化：對照組大鼠腦白質(zhì)中ephrin-B3mRNA表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)；實(shí)驗(yàn)組大鼠腦白質(zhì)中ephrin-B3mRNA表達(dá)在缺氧缺血后8h開始升高，72小時(shí)達(dá)到峰值，7天開始下降，組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，與對照組比較，在8h、24h、48h、72h、7d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。 3．細(xì)胞凋亡檢測：對照組大鼠腦室周圍白質(zhì)紋狀體、胼胝體區(qū)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有少量凋亡細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組大鼠紋狀體和胼胝體區(qū)細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)在缺氧缺血后8小時(shí)開始升高，48小時(shí)達(dá)到高峰，72小時(shí)開始降低，與對照組相比，在8h、24h、48h、72h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，7天時(shí)與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。 結(jié)論 1．腦組織HE染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組大鼠缺氧缺血后出現(xiàn)細(xì)胞稀疏、排列紊亂、核固縮、側(cè)腦室旁白質(zhì)篩網(wǎng)狀壞死，符合PVL病理改變，且出現(xiàn)生長發(fā)育不良、神經(jīng)行為異常，證實(shí)PVL模型制作成功。 2．新生大鼠PVL時(shí)，腦白質(zhì)ephrin-B3mRNA表達(dá)顯著增加，而對照組ephrin-B3mRNA表達(dá)幾乎沒有變化，提示ephrin-B3參與了PVL缺氧缺血性腦損傷，可能與CNS神經(jīng)元再生抑制機(jī)制有關(guān)。 3．新生大鼠PVL時(shí)，腦組織細(xì)胞凋亡指數(shù)較對照組明顯增加，證實(shí)細(xì)胞凋亡仍為未成熟鼠腦缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)損傷的主要病理形式，其參與了PVL的損傷過程。 4．新生大鼠PVL時(shí)，腦組織細(xì)胞凋亡指數(shù)和ephrin-B3mRNA表達(dá)均呈先升高后降低的趨勢，提示兩者存在一定的相關(guān)性，但二者高峰時(shí)間并不重合，推測除了ephrin-B3還存在其它因素參與神經(jīng)細(xì)胞凋亡損傷。
【圖文】：

2.1新生2日齡SD大鼠，術(shù)前稱重及編號，乙醚麻醉，固定于手術(shù)臺(tái)上，圖1。2.2常規(guī)消毒鋪巾，頸部正中偏右作長約smm切口，圖2。2.3分離并用5一0絲線雙結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，圖3。2.4縫合切口，以抗生素液(青霉素)沖洗局部皮膚，圖4o2.5返回常氧母鼠籠中休息1小時(shí)，然后置于含6%氧氣和94%氮?dú)饣旌蠚獾娜毖跖撝?小時(shí)(流量ZUmin)，放回常氧母鼠籠中飼養(yǎng)。

四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)碩十專業(yè)學(xué)位論文病理改變(HE染色)E染色光學(xué)顯微鏡下發(fā)現(xiàn):對照組臍服體(圖6，8，10，12)(圖14，16，18，20)細(xì)胞排列有序、胞核較大、形態(tài)規(guī)則缺氧缺血24h后可見臍服體及紋狀體細(xì)胞稀疏、排列紊亂(圖48h可見臍服體及側(cè)腦室旁紋狀體內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞稀疏、間隙增寬亂、結(jié)構(gòu)不清、核固縮變圓(圖9，17);72h臍肌體和腦室出現(xiàn)廣泛的疏松(圖11，19)，7d可見臍服體及缺氧缺血側(cè)側(cè)質(zhì)呈篩網(wǎng)狀壞死(圖13，21)。綜上所見:實(shí)驗(yàn)組隨缺氧缺血，其病理改變加重。
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R722.1

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本文編號：2691165