發(fā)布時(shí)間：2020-06-01 01:12

【摘要】：目的：本課題旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),比較各治療組小鼠刻板行為的改善情況,評(píng)價(jià)多巴胺D3受體(dopamine D3 receptor, DAD3R)激動(dòng)劑BP897對(duì)多發(fā)性抽動(dòng)癥(Tourette's syndrome,TS)的治療療效及有效劑量,為治療TS提供相應(yīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)；研究BP897對(duì)TS模型小鼠腦組織DAD3R、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(dopamine transporter, DAT)和多巴胺(dopamine, DA)的影響,探討B(tài)P897治療TS可能的作用機(jī)制。方法：1、實(shí)驗(yàn)分組：將72只雄性ICR小鼠隨機(jī)分為：正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(氟派啶醇0.5mg/kg). BP897Ⅰ組(0.3mg/kg)、BP897Ⅱ組(1.0mg/kg)、BP897Ⅲ組(3.0mg/kg),每組各12只ICR小鼠。2、動(dòng)物模型制作：TS模型采用Diamond等創(chuàng)立的神經(jīng)毒素全身用藥法建立,即將亞氨基二丙腈(iminodipropionitrile,IDPN)溶于生理鹽水中,給藥劑量為200mg/kg.d,給藥體積為0.1ml/100g,給藥途徑為腹腔注射,每天1次,連用7天,正常對(duì)照組予等量生理鹽水腹腔注射。3、刻板行為評(píng)分：從實(shí)驗(yàn)第8天起逐日分別以生理鹽水、氟哌啶醇和(或)BP897灌胃,1次/天,共28天,同時(shí)于造模成功即刻、灌胃7天、灌胃28天采用雙盲法開始對(duì)小鼠進(jìn)行刻板行為評(píng)分,3次/天(集中于夜間,因小鼠習(xí)慣夜間活動(dòng)),每次計(jì)時(shí)5min,取平均值。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：0分：無(wú)刻板行為(與正常小鼠行為無(wú)差別)；1分：旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)；2分：垂直的頭部和頸部的運(yùn)動(dòng)障礙(上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多)；3分：垂直的頭部和頸部的運(yùn)動(dòng)障礙加旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)；4分：頭向側(cè)擺并伴有頭頸部上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多4、檢測(cè)指標(biāo)：小鼠腦組織DAD3R、DAT和DA的含量。5.組織病理切片：1)材料：正常對(duì)照組和模型組ICR小鼠大腦組織。2)方法：以上組織均用10%的甲醛固定,石蠟包埋,6μm切片,HE染色,光鏡檢查。結(jié)果：1、BP897對(duì)小鼠刻板行為的影響：給藥7天和28天,分別對(duì)各組小鼠進(jìn)行刻板行為評(píng)分,結(jié)果顯示：中、高劑量BP897組小鼠較模型組小鼠刻板行為有所改善,但高劑量BP897組小鼠較中劑量組小鼠改善更明顯,其作用效果與陽(yáng)性對(duì)照物氟哌啶醇一致(P0.05),低劑量BP897組與模型組相比差異無(wú)顯著性(P0.05)。2、BP897對(duì)TS模型小鼠腦組織DAD3R含量的影響：BP897連續(xù)給藥28天后,用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠腦組織DAD3R的含量,結(jié)果顯示：大劑量BP897組腦組織DAD3R含量與模型組相比明顯增高(P0.05),而低于氟哌啶醇組(P0.05),氟哌啶醇組與正常對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性(P0.05),模型組腦組織DAD3R含量明顯低于正常對(duì)照組(P0.05),與中、低劑量的BP897組相比差異無(wú)顯著性意義(P0.05)。3、BP897對(duì)TS模型小鼠腦組織DAT含量的影響：BP897連續(xù)給藥28天后,用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠腦組織DAT的含量,結(jié)果顯示：大劑量BP897組腦組織DAT含量與模型組相比明顯增高(P0.05),而低于氟哌啶醇組(P0.05),氟哌啶醇組與正常對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性(P0.05),模型組腦組織DAT含量明顯低于正常對(duì)照組(P0.05),與中、低劑量的BP897組相比差異無(wú)顯著性意義(P0.05)。4、BP897對(duì)TS模型小鼠腦組織DA含量的影響：BP897連續(xù)給藥28天后,用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠腦組織DA的含量,結(jié)果顯示：大劑量BP897組腦組織DA含量與模型組相比明顯增高(P0.05),而低于氟哌啶醇組(P0.05),氟哌啶醇組與正常對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性(P0.05),模型組腦組織DA含量明顯低于正常對(duì)照組(P0.05),與中、低劑量的BP897組相比差異無(wú)顯著性意義(P0.05)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)表明1.0～3.0mg/kg的BP897對(duì)治療小鼠TS有效,而3.0mg/kg的BP897能更好地控制刻板行為,其療效與氟哌啶醇相當(dāng),0.3mg/kg的BP897并不能明顯改善刻板行為。不同劑量的BP897的療效差異可能與其低劑量時(shí)選擇性激動(dòng)DAD3R,中劑量時(shí)在激動(dòng)DAD3R的基礎(chǔ)上拮抗少量DAD2R (dopamine D2 receptor, DAD2R),高劑量時(shí)在激動(dòng)DAD3R的基礎(chǔ)上拮抗大量DAD2R有關(guān)。而BP897改善TS小鼠刻板行為的詳盡機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。
【圖文】：

圖1小鼠腦組織DAD3R含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure1ThestandardeurveofDAD3ReoneentrationsinbrainofTS而ceMiceDATy=17.81x一1.8761nU工認(rèn)U八11，

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