【摘要】： 目的 圍生期窒息引起的缺氧缺血性腦損傷(HIBD)，常危及新生兒生命，是導(dǎo)致兒童神經(jīng)系統(tǒng)傷殘的常見(jiàn)原因之一。近年研究發(fā)現(xiàn)，促紅細(xì)胞生成素(EPO)在新生兒HIBD發(fā)病機(jī)制中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制備新生大鼠HIBD模型，腹腔注射外源性重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)，觀察不同劑量EPO對(duì)新生HIBD大鼠腦組織Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)的影響，探討EPO神經(jīng)保護(hù)作用的分子機(jī)制，以期為臨床治療新生兒HIBD提供有效的方法和途徑。 方法 1．制備HIBD模型：將新生7日齡Wistar大鼠行頸部正中切口，分離結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后給予低氧(8％O_2，92％N_2)處理2小時(shí)，制成HIBD模型。觀察缺氧時(shí)動(dòng)物行為變化，并于光鏡下觀察腦組織病理改變。 2．行為能力檢查：分別于手術(shù)前及缺氧后1小時(shí)對(duì)每只大鼠進(jìn)行翻身能力、夾尾左旋測(cè)試。 3．Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)測(cè)定：42只新生7日齡Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、HIBD組、生理鹽水對(duì)照組、EPO干預(yù)組，其中EPO干預(yù)組又分為大、中小、劑量三組，每組7只動(dòng)物，于缺氧結(jié)束后立即一次性腹腔注射給藥，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法，觀察給藥24小時(shí)后Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果 1．行為能力檢查術(shù)前每只大鼠均做翻身能力、夾尾左旋測(cè)定，42只全部正常。缺氧后1小時(shí)假手術(shù)組測(cè)定結(jié)果同前。經(jīng)歷缺氧缺血的35只大鼠，，19只不能翻身，28只出現(xiàn)夾尾左旋，13只表現(xiàn)不能翻身和夾尾左旋同時(shí)存在。 2．HE染色及光鏡檢查結(jié)果 假手術(shù)組：腦組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞層次清楚，神經(jīng)元形態(tài)正常，無(wú)腦水腫。 HIBD組；腦組織水腫明顯，神經(jīng)元排列紊亂，胞體皺縮，胞質(zhì)深染，核濃 縮，結(jié)構(gòu)不清，伴有膠質(zhì)細(xì)胞增生。 3．Bcl-2蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果Bcl-2蛋白在假手術(shù)組中存在低水平表達(dá)，HIBD后表達(dá)明顯增高，EPO干預(yù)組較生理鹽水對(duì)照組及HIBD組更高。生理鹽水對(duì)照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組兩兩相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。其余各組間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 4．Bax蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果Bax蛋白在假手術(shù)組中表達(dá)微弱，HIBD后表達(dá)明顯增高，EPO干預(yù)組較生理鹽水對(duì)照組及HIBD組表達(dá)降低。生理鹽水對(duì)照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組兩兩相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。其余各組間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 5．Bcl-2與Bax比值的變化Bcl-2／Bax在腦組織缺氧缺血性損傷后降低，EPO干預(yù)后又升高。生理鹽水對(duì)照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組兩兩相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。其余各組間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論 1．通過(guò)對(duì)缺氧缺血后動(dòng)物行為能力觀察及腦組織病理學(xué)檢查，證實(shí)新生鼠HIBD模型制作成功。 2．EPO通過(guò)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax表達(dá)，改變Bcl-2／Bax，抑制腦細(xì)胞凋亡起到神經(jīng)保護(hù)作用，為EPO臨床治療新生兒HIBD提供了更深層次的理論依據(jù)。
【圖文】：

表1EPO對(duì)新生H工BD大鼠Bcl一2蛋白表達(dá)的影響(x士s)組別例數(shù)Bcl佗假手術(shù)組719.229士1.116HIBD組45.671士4.241△鹽水組43.971士4.505△大劑量組55.743土3.994△#*中劑量組53.957士4.839△#*小劑量組51.643士3.372△#*注:F=84.265P<0.01組相比P<0.05△與假手術(shù)組相比P<0.05;#與HIBD組相比P<0.05;*與鹽水

余各組間比較均有顯著性差異(P<0.05)。(見(jiàn)表3，圖3)表3EPO對(duì)新生HIBD大鼠Bel一2/Bax的影響(x士s)組別例數(shù)Bcl一2/Bax假手術(shù)組72.257士0.227HIBD組0.966士0.133△鹽水組0.984士0.128△大劑量組2.088士0.338△#*中劑量組2.169士0.296△“*小劑量組2.007士0.428△#*注:F=犯.394P<0.ol;△與假手術(shù)組相比P<0.05;#與HIBD組相比P<0.05;*與鹽水組相比P<0.05
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)新生兒學(xué)組;新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2005年02期

2 吳婉芳;新生兒缺氧缺血性腦病[J];中國(guó)醫(yī)刊;2002年05期

3 趙時(shí)敏;新生兒缺氧缺血性腦病的防治及研究方向[J];中華兒科雜志;1997年02期

本文編號(hào)：2688373