發(fā)布時間：2020-05-28 08:07

【摘要】： 目的:缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic Brain Damage,HIBD)是圍產(chǎn)期嚴重威脅新生兒健康甚至致殘的一種常見疾病,嚴重影響兒童生活質(zhì)量,但迄今為止尚無理想的治療方法。目前普遍認為早期干預(yù)有助于腦損傷康復(fù),其中環(huán)境干預(yù)占有相當重要的地位。環(huán)境刺激可影響腦的形態(tài)和功能,增強神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性,提高學(xué)習(xí)記憶功能,對腦發(fā)育具有重要作用。本實驗通過檢測早期環(huán)境干預(yù)后HIBD大鼠腦組織NFP的含量、海馬區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)及超微結(jié)構(gòu)改變,探討早期早期環(huán)境干預(yù)對于促進缺血缺氧的腦組織恢復(fù)及神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)重建的可能機制,旨在為臨床應(yīng)用豐富環(huán)境治療新生兒HIBD提供基礎(chǔ)理論支持和指導(dǎo)。 方法:7日齡(postnatal day 7,P7)Sprague-Dawley(SD)新生大鼠,采用Rice法建立HIBD模型,隨機分為三組:正常組、非干預(yù)組及干預(yù)組,于建模后24h進行早期撫觸和豐富環(huán)境干預(yù),干預(yù)28d后,應(yīng)用Morris水迷宮測試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,測量體重,HE染色觀察海馬病理形態(tài)學(xué)改變,尼氏染色計數(shù)海馬區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)目,免疫組織化學(xué)法檢測左側(cè)與右側(cè)腦組織海馬神經(jīng)絲蛋白(neurofilament protein,NFP)積分光密度值之比(L:R_(NF)),透射電鏡觀察海馬超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果:1.在Morris水迷宮的定位航行和空間探索實驗中,干預(yù)組成績明顯優(yōu)于非干預(yù)組(P＜0.001),與正常組差異不明顯(P＞0.05)。 2.在體重上,干預(yù)組明顯高于非干預(yù)組(P＜0.05),與正常組差異不明顯(P＞0.05)。 3.HE染色見干預(yù)組患側(cè)海馬輕度異常,如神經(jīng)元排列稍紊亂、少量細胞丟失等;非干預(yù)組左側(cè)海馬明顯異常,細胞層數(shù)減少,神經(jīng)元排列散亂、稀疏,細胞間隙增大,脫失明顯,核仁不清,可見核固縮、核碎裂;正常組患側(cè)海馬無異常。 4.神經(jīng)元尼氏染色計數(shù)顯示,干預(yù)組患側(cè)海馬神經(jīng)元存活數(shù)目多于非干預(yù)組(P＜0.001),與正常組差異不明顯(P＞0.05)。 5.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,干預(yù)組左側(cè)海馬NFP表達強于非干預(yù)組(P＜0.01),與正常組差異不明顯(P＞0.05)。 6.透射電鏡觀察左側(cè)海馬區(qū),非干預(yù)組海馬神經(jīng)細胞固縮改變,線粒體腫脹,神經(jīng)絲數(shù)量減少,排列稀疏,突觸數(shù)量減少,突觸間隙增寬,突觸囊泡減少,突觸后致密物變薄。干預(yù)組海馬神經(jīng)元和突觸無明顯病理改變。 結(jié)論: 1.HIBD新生鼠患側(cè)腦組織NFP表達下降,海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)減少,反映新生鼠腦灰質(zhì)及腦白質(zhì)均對缺氧缺血損害敏感。 2.豐富環(huán)境可減少海馬區(qū)神經(jīng)細胞的丟失及腦NFP的降解,因此對HIBD新生鼠的神經(jīng)元及軸突均具有保護作用,從而有利于維持神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的完整及改善重建。 3.早期環(huán)境干預(yù)能減輕HIBD大鼠腦神經(jīng)絲、突觸等超微結(jié)構(gòu)的損傷,對神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性有利。 4.早期環(huán)境干預(yù)能顯著改善HIBD大鼠的遠期學(xué)習(xí)記憶功能,提示早期環(huán)境干預(yù)對保護遠期學(xué)習(xí)記憶功能有重要意義。
【圖文】：

倍)下非干預(yù)組患側(cè)腦組織可見大片壞死細胞，胞漿紅染，核結(jié)構(gòu)不清，甚至胞膜破裂，細胞解體消失;凋亡細胞呈彌散或小灶性分布，表現(xiàn)為細胞體積縮小，，核固縮，核碎裂:海馬錐體細胞間隙明顯增大，細胞嚴重皺縮深染，核縮小，核仁不清楚，甚至細胞脫失。三組大鼠體重增長也有明顯變化，非干預(yù)組體重增長緩慢，反應(yīng)遲鈍，較正常組及干預(yù)組有明顯差異(P<0.05);而干預(yù)組活潑好動，靈活敏捷，體重增長較正常組無明顯差異(P>0.05)(見表1、圖1)o表1早期干預(yù)28d后三組體重比較例數(shù)體重(g)正常組非干預(yù)組干預(yù)組114.75土4.6394.叨土10.09al”.45土7.04加202020a:P<0.05與正常組對比:b:P>0.05與正常組對比:c::p<0.05與非干預(yù)組對比

積分光密度值之比(LRN;)。大鼠P35時，正常組、非干預(yù)組、干預(yù)組 LRNF值有顯著差異 (p<0.01)。非干預(yù)組LRNF值明顯小于正常組(p<0.01)，干預(yù)組LRNF值高于非干預(yù)組(p<0.01)，但與正常組無明顯差異(P>0.05)(見表2、圖2)。表2雙側(cè)腦組織磷酸化NFP積分光密度比值分組例數(shù)L:RNF正常組非干預(yù)組干預(yù)組l， 015士0.1220.372土0.156a0.839土0.188b‘ a:p<0.01與正常組對比:b:P>0.05與正常組對比 :c:p<0.01與非干預(yù)組對比圖2雙側(cè)腦組織磷酸化NFP積分光密度比值3.豐富環(huán)境干預(yù)后RIBD新生鼠海馬神經(jīng)元計數(shù)的變化正常組海馬有多層錐體細胞，排列整齊緊密;神經(jīng)元胞核染成藍色，尼氏小體密集，染成深藍色。非干預(yù)組神經(jīng)元明顯減少，失去正常結(jié)構(gòu)，細胞排列散亂，神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

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本文編號：2684958