【摘要】：血管瘤由大量新生毛細血管和增殖的內皮細胞組成，是“血管形成依賴”性疾病。血管形成的核心是內皮細胞的增殖和凋亡。如何能通過干預血管形成中的關鍵基因，以控制內皮細胞的增殖和凋亡，是促進或抑制血管形成的關鍵。survivin是新近發(fā)現的，迄今為止最強的凋亡抑制因子，有研究表明及本課題組前期發(fā)現survivin、VEGF和caspase-3在血管瘤的增生期和消退期表達有差異，并相關。本研究采用survivin及其基因沉默技術，體外培養(yǎng)血管瘤內皮細胞種植裸鼠皮下建立裸鼠人血管瘤動物模型，并用脂質體包裹Survivin ASODN干預，探討survivin對血管瘤血管形成的影響，從而闡明survivin及其基因封閉技術對血管瘤血管形成的作用機制，為尋找促進和抑制血管形成的新靶點提供理論和實驗依據。第一部分嬰幼兒增生期血管瘤內皮細胞的培養(yǎng)和鑒及生狀況的觀察 目的：嬰幼兒增生期血管瘤內皮細胞的體外分離培養(yǎng)、純化及鑒定。方法：采用組織化法對12例新鮮嬰幼兒血管瘤行細胞培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)成功后，在相差顯微鏡刮除非內皮細胞。待內皮細胞鋪滿瓶底，進行傳代，同時運用反復貼壁法及酶消化法進行數次純化，取4代內皮細胞進行免疫組化法對內皮細胞進行鑒定并檢測內皮細胞純度。對所培養(yǎng)的細胞進行計數并繪制細胞生長曲線圖。結果：12例標本均成功培養(yǎng)出血管瘤內皮細胞，培養(yǎng)的內皮細胞形態(tài)為較規(guī)則的圓形、橢圓形或多角形，核居中，部分可見核分裂及雙核，細胞境界清楚，細胞融合后內皮細胞特有“鋪路石”特征。并通過免疫組化CD31、CD34和Ⅷ因子相關抗原鑒定證實為內皮細胞。檢測純度為CD34(+)數為67.88%±4.25%，所培養(yǎng)的細胞具有“管腔形成”現象。結論：該實驗可以滿足本研究相關需要。 目的：研究Survivin ASODN對人增生期血管瘤裸鼠種植瘤生長的影響。方法：將體外培養(yǎng)的細胞濃度調整為1.0×108個/ml，，取0.2mL注入裸鼠皮下，建立人增生期血管瘤裸鼠種植瘤動物模型。瘤體直徑大于13澥彼婊治

本文編號：2678891