【摘要】：血管瘤由大量新生毛細血管和增殖的內(nèi)皮細胞組成，是“血管形成依賴”性疾病。血管形成的核心是內(nèi)皮細胞的增殖和凋亡。如何能通過干預血管形成中的關(guān)鍵基因，以控制內(nèi)皮細胞的增殖和凋亡，是促進或抑制血管形成的關(guān)鍵。survivin是新近發(fā)現(xiàn)的，迄今為止最強的凋亡抑制因子，有研究表明及本課題組前期發(fā)現(xiàn)survivin、VEGF和caspase-3在血管瘤的增生期和消退期表達有差異，并相關(guān)。本研究采用survivin及其基因沉默技術(shù)，體外培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細胞種植裸鼠皮下建立裸鼠人血管瘤動物模型，并用脂質(zhì)體包裹Survivin ASODN干預，探討survivin對血管瘤血管形成的影響，從而闡明survivin及其基因封閉技術(shù)對血管瘤血管形成的作用機制，為尋找促進和抑制血管形成的新靶點提供理論和實驗依據(jù)。第一部分嬰幼兒增生期血管瘤內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)和鑒及生狀況的觀察 目的：嬰幼兒增生期血管瘤內(nèi)皮細胞的體外分離培養(yǎng)、純化及鑒定。方法：采用組織化法對12例新鮮嬰幼兒血管瘤行細胞培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)成功后，在相差顯微鏡刮除非內(nèi)皮細胞。待內(nèi)皮細胞鋪滿瓶底，進行傳代，同時運用反復貼壁法及酶消化法進行數(shù)次純化，取4代內(nèi)皮細胞進行免疫組化法對內(nèi)皮細胞進行鑒定并檢測內(nèi)皮細胞純度。對所培養(yǎng)的細胞進行計數(shù)并繪制細胞生長曲線圖。結(jié)果：12例標本均成功培養(yǎng)出血管瘤內(nèi)皮細胞，培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞形態(tài)為較規(guī)則的圓形、橢圓形或多角形，核居中，部分可見核分裂及雙核，細胞境界清楚，細胞融合后內(nèi)皮細胞特有“鋪路石”特征。并通過免疫組化CD31、CD34和Ⅷ因子相關(guān)抗原鑒定證實為內(nèi)皮細胞。檢測純度為CD34(+)數(shù)為67.88%±4.25%，所培養(yǎng)的細胞具有“管腔形成”現(xiàn)象。結(jié)論：該實驗可以滿足本研究相關(guān)需要。 目的：研究Survivin ASODN對人增生期血管瘤裸鼠種植瘤生長的影響。方法：將體外培養(yǎng)的細胞濃度調(diào)整為1.0×108個/ml，，取0.2mL注入裸鼠皮下，建立人增生期血管瘤裸鼠種植瘤動物模型。瘤體直徑大于13澥彼婊治

本文編號：2678891