發(fā)布時間：2020-05-23 18:27

【摘要】：第一部分肝細胞轉(zhuǎn)運蛋白和法尼醇受體在嬰兒膽汁淤積性肝炎肝組織中的表達及其意義 目的研究MDR3、BSEP、MRP2和FXR蛋白在嬰兒膽汁淤積性肝炎肝組織中的表達及其臨床意義。 方法2000年1月至2009年10月收治的嬰兒膽汁淤積性肝炎患兒22例為病例組,收集臨床資料,進行肝組織活檢;肝移植供體10例,為正常對照組。采用免疫組化法檢測MDR3、BSEP、MRP2和FXR蛋白在正常對照組及病例組肝組織中的表達。應(yīng)用Leica Qwin軟件進行定量分析。并對各蛋白的表達水平與肝功能指標(biāo)的關(guān)系進行統(tǒng)計。 結(jié)果正常對照組和病例組肝組織MDR3、BSEP和MRP2蛋白表達位于肝細胞膜,FXR蛋白表達位于肝細胞核。與正常對照組比較,病例組肝組織MDR3蛋白表達增強,MRP2和FXR蛋白表達降低,BSEP蛋白表達無改變。正常對照組和病例組肝組織MDR3蛋白A值分別為0.11±0.03和0.13±0.02,病例組MDR3蛋白A值顯著增高( t = - 2.239 , P 0.05);BSEP蛋白A值分別為0.07±0.01和0.08±0.02,兩組比較無差異(t = -1.625, P 0.05);MRP2蛋白A值分別為0.17±0.04和0.11±0.05,病例組MRP2蛋白A值顯著降低(t= 3.418, P 0.05);FXR蛋白A值分別為0.15±0.06和0.09±0.02,病例組FXR蛋白A值顯著降低(t= 7.676, P0. 001)。MRP2蛋白A值與血清ALT水平呈負相關(guān)(r=-0.488,P0.05),與血清TB、DB、γ-GT水平無相關(guān)(P 0.05);MDR3和FXR蛋白A值與血清TB、DB、γ-GT、ALT水平均無相關(guān)性(P 0.05)。 結(jié)論與正常肝組織相比,嬰兒膽汁淤積性肝炎患兒肝組織中MRP2和FXR蛋白表達下降,MDR3蛋白表達增強,BSEP無變化。MDR3表達增強有利于增強磷脂的轉(zhuǎn)運,與過高的膽鹽結(jié)合,減輕肝損害,有可能是機體的適應(yīng)反應(yīng)。MRP2蛋白表達下降可因減少膽汁流而加重膽汁淤積。MRP2蛋白表達水平越低,血清ALT越高,肝損害越嚴重。MRP2蛋白表達的下調(diào)可能與FXR蛋白表達抑制相關(guān)。肝細胞轉(zhuǎn)運蛋白表達的變化可能在嬰兒膽汁淤積性肝炎的膽汁淤積的發(fā)病起到了一定的作用。 第二部分UDCA對嬰兒膽汁淤積性肝炎ABCB4和FXR mRNA表達的影響 目的分析UDCA治療前后嬰兒膽汁淤積性肝炎ABCB4和FXRmRNA的差異性表達,探討ABCB4和FXRmRNA表達變化對嬰兒膽汁淤積性肝炎的影響以及與UDCA的關(guān)系。 方法選擇2008年7月至2010年7月確診為嬰兒膽汁淤積性肝炎患兒58例,隨機分為2組,UDCA治療組28例,常規(guī)治療組30例;正常對照組30例。提取外周血總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。應(yīng)用SYBR Green I實時熒光定量RT-PCR的方法檢測ABCB4、FXRmRNA在嬰兒膽汁淤積性肝炎患兒和正常健康兒的表達。采用2-△△CT法進行相對定量分析。 結(jié)果嬰兒膽汁淤積性肝炎患兒應(yīng)用UDCA治療后TB、DB、ALT和γ-GT顯著降低(P0.05)。與常規(guī)治療組比較,UDCA治療組TB、DB下降值顯著增高(P0.05),ALT和γ-GT的下降值無差別(P0.05)。與正常對照組比較,嬰兒膽汁淤積性肝炎患兒ABCB4mRNA的表達水平增高了4.53倍,FXR mRNA的表達無差異(P0.05)。與UDCA治療前比較,UDCA治療后嬰兒膽汁淤積性肝炎患兒ABCB4 mRNA表達水平增加了2.04倍,FXR mRNA的表達水平無顯著差異(P0.05)。ABCB4 mRNA的表達量與血清TB、DB、ALT和γ-GT水平無相關(guān)性(P0.05)。 結(jié)論UDCA有較好的利膽作用,可以改善嬰兒膽汁淤積性肝炎的癥狀及實驗室指標(biāo)。UDCA可以上調(diào)ABCB4 mRNA的表達。與正常健康嬰兒比較,嬰兒膽汁淤積性肝炎ABCB4mRNA的相對表達量增高,為機體適應(yīng)性代償反應(yīng);FXRmRNA的相對表達量不變,未能證實FXR對ABCB4基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。 第三部分嬰兒膽汁淤積性肝炎ABCB4基因突變的分析 目的研究嬰兒膽汁淤積性肝炎是否存在ABCB4基因突變,探討分析ABCB4基因突變與嬰兒膽汁淤積性肝炎的易感性和臨床特征的關(guān)系。 方法病例組嬰兒膽汁淤積性肝炎100例,正常對照組149例,提取外周血基因組DNA,對病例組的ABCB4基因全部28個外顯子以及側(cè)翼內(nèi)含子進行聚合酶鏈反應(yīng)和直接測序,正常對照組針對病例組檢出有突變的外顯子進行檢測,分析各突變位點的基因型和等位基因頻率在病例組和對照組中的分布及基因型與肝功能各指標(biāo)的關(guān)系。 結(jié)果共發(fā)現(xiàn)ABCB4基因5個外顯子突變,均為SNP位點,其中rs2109505不符合Hardy-weinberg平衡,rs2302387、rs1202283、rs8187791、rs2230028符合Hardy-weinberg平衡。本研究健康人群rs2302387位點以G/G基因型最常見;rs1202283位點以G/A基因型最常見;rs8187791位點以C/C基因型為主,T等位基因罕見;rs2230028位點以A/A基因型最常見,無G/G基因型。本研究健康人群rs8187791位點的基因型及等位基因頻率的分布與各地區(qū)人群無明顯差別,rs2302387、rs1202283和rs2230028位點的基因型及等位基因頻率的分布與我國北京漢族及日本人群相近,部分與歐洲人群有差異,與非洲人群呈顯著性差異(P0.05)。rs2302387、rs1202283、rs8187791和rs2230028的基因型及等位基因頻率在病例組和正常對照組的分布無顯著性差異(P0.05)。病例組rs2302387、rs1202283、rs8187791和rs2230028位點各基因型的肝功能指標(biāo)比較無顯著差異(P0.05)。各單倍型在病例組和對照組的分布頻率無差異(P0.05)。 結(jié)論ABCB4基因突變與嬰兒膽汁淤積性肝炎易感性無關(guān)。首次報道ABCB4基因rs2302387、rs1202283、rs8187791、rs2230028位點在廣西南寧地區(qū)人群中的分布情況。其中rs8187791位點基因型及等位基因頻率的分布無明顯地域差別。rs2302387、rs1202283、rs2230028三個位點多態(tài)性頻率分布與北京及日本亞洲人群分布較一致,與歐洲及非洲人群分布有差異。
【圖文】：

圖1-1.嬰兒膽汁淤積性肝炎及正常對照組肝組織MDR3蛋白表達情況（免疫組織化學(xué)染色，40x）A正常對照組，，B 嬰兒膽汁淤積性肝炎組Fig.1-1 Protein express of MDR3 in the normal liver (A) and cholestatic hepatitis liver (B)(Immunohistochemical staining, X 40)The normal liver showed canalicular membrane straining for MDR3 in hepatocytes, strong canalicularmembrane staining for MDR3 was observed in the cholestatic hepatitis liver.AB

圖1-1.嬰兒膽汁淤積性肝炎及正常對照組肝組織MDR3蛋白表達情況（免疫組織化學(xué)染色，40x）A正常對照組，B 嬰兒膽汁淤積性肝炎組Fig.1-1 Protein express of MDR3 in the normal liver (A) and cholestatic hepatitis liver (B)(Immunohistochemical staining, X 40)The normal liver showed canalicular membrane straining for MDR3 in hepatocytes, strong canalicularmembrane staining for MDR3 was observed in the cholestatic hepatitis liver.AB
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R725.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 謝東豪;酚妥拉明聯(lián)合強力寧治療慢性膽汁淤積性肝炎臨床療效分析[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);1993年05期

2 房武寧;低分子右旋糖酐并肝素治療膽汁淤積性肝炎的療效觀察[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;1994年01期

3 姬長現(xiàn);中西醫(yī)結(jié)合治療膽汁淤積性肝炎22例[J];山東中醫(yī)雜志;1995年11期

4 卡德爾別克,楊小青;吡硫醇致膽汁淤積性肝炎1例[J];中國藥學(xué)雜志;1998年02期

5 石曉虹;郎振為;馬沛卿;蘭孟東;沈冰;張亮;;纖維化膽汁淤積性肝炎二例[J];中華內(nèi)科雜志;2007年04期

6 王寶香;梅紅;彭罕鳴;;腺苷蛋氨酸治療嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎50例[J];肝臟;2011年02期

7 馬素真;;肝內(nèi)膽汁淤積的實驗室診斷與鑒別診斷[J];臨床肝膽病雜志;1990年01期

8 吳景蓮;吳春美;邊翠英;;晚發(fā)性維生素K缺乏癥致膽汁淤積性肝炎綜合征6例[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

9 解從君;馬文波;王海舫;柳立平;王淑云;;膽汁淤積性肝炎肝硬化患者治療前后血漿內(nèi)毒素的變化[J];中國老年學(xué)雜志;2009年01期

10 彭茂云;;18-α甘草酸二銨、丹參液、激素治療膽汁淤積性肝炎的療效觀察[J];臨床合理用藥雜志;2009年02期

相關(guān)會議論文 前1條

1 蔡光明;;藏藥材XHCU治療瘀膽型肝炎藥效基礎(chǔ)的試驗研究[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 唐清;肝細胞轉(zhuǎn)運蛋白的表達及ABCB4基因突變在嬰兒膽汁淤積性肝炎發(fā)病機制中的探討[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 毛志芹;人類巨細胞病毒UL144、UL139、UL149基因多態(tài)性與其致病性關(guān)系的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陳新萍;ABCB4基因介導(dǎo)胎盤膽汁酸排泌機制的初步研究[D];南昌大學(xué);2009年

本文編號：2677768