【摘要】：背景:先天性無(wú)痛無(wú)汗癥(congenital insensitivity to pain with anhydrosis,CIPA)又稱(chēng)為遺傳性感覺(jué)和自主神經(jīng)病變IV型,是一種以無(wú)汗和對(duì)疼痛刺激不敏感為基本特征的罕見(jiàn)的常染色體隱性遺傳病。患兒出生即有發(fā)育缺陷,常見(jiàn)不明原因高熱,死亡率高。人群中該病發(fā)病率極低,臨床誤診率高。近年來(lái)隨著臨床診斷和分子檢測(cè)手段的發(fā)展,國(guó)內(nèi)外不斷有CIPA病例和遺傳學(xué)研究被報(bào)道,但目前我國(guó)尚無(wú)CIPA大樣本的遺傳學(xué)研究。目的:采用成熟的基因檢測(cè)平臺(tái),對(duì)中國(guó)人群CIPA家系進(jìn)行致病基因突變的研究,探索中國(guó)人群CIPA患者的致病基因突變譜,為該病的分子水平診斷和遺傳咨詢(xún)提供依據(jù)。方法:本研究采用Sanger測(cè)序和高通量測(cè)序相結(jié)合的方法進(jìn)行CIPA家系的致病突變研究。采集CIPA患者臨床信息及患者與家系成員外周血樣本,采用酚-氯仿法提取外周血基因組DNA,對(duì)家系中先證者NTRK1基因外顯子及其鄰近區(qū)域進(jìn)行Sanger測(cè)序,篩查點(diǎn)突變和indel突變。采用長(zhǎng)片段PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)NTRK1基因的大片段缺失。對(duì)于上述方法未找到致病突變的家系,選擇全基因組測(cè)序的方法進(jìn)一步對(duì)NTRK1內(nèi)含子深部進(jìn)行突變篩查,并針對(duì)候選致病突變?cè)诩蚁党蓡T中進(jìn)行突變驗(yàn)證。對(duì)于篩查到的內(nèi)含子非經(jīng)典剪接突變,采用Minigene及患者外周血mRNA分析的方法驗(yàn)證突變致病性。結(jié)果:通過(guò)對(duì)34個(gè)CIPA家系的遺傳學(xué)研究,我們鑒定出27種NTRK1致病突變,包括新突變15種,已報(bào)道突變12種。最常見(jiàn)突變?yōu)閏.851-33TA和c.287 + 2dupT,突變等位基因頻率為35%(24/68)。此外,發(fā)現(xiàn)一個(gè)反復(fù)出現(xiàn)的Alu元件介導(dǎo)的染色體內(nèi)非等位基因同源重組導(dǎo)致大片段缺失(c.428-374_718+485del);通過(guò)全基因組測(cè)序,在四個(gè)無(wú)關(guān)CIPA家系中首次鑒定出一個(gè)內(nèi)含子深部突變(c.[851-794CG;851-798CT]),該突變導(dǎo)致 mRNA 的剪接異常。結(jié)論:在中國(guó)人群中開(kāi)展較大CIPA樣本的致病基因突變研究,鑒定出多個(gè)新型突變,并在NTRK1基因中,首次鑒定出內(nèi)含子深部突變和Alu元件介導(dǎo)的大片段缺失,獲得具有代表性的、較完整的NTRK1基因突變譜,有助于CIPA患者的精準(zhǔn)診療。
【圖文】：

－－Ｆ逡逑圖２－１本研究中收集的先天性無(wú)痛無(wú)汗癥家系系譜圖。Ａ代表家系１？４，邋９￣１４，邋１６，邋２０？２１，２３￣２４，逡逑２６，２８，邋３０？３２和３４的系譜Wｓ邋Ｂ表示家系５的系譜圈；Ｃ表示家系８，邋１５，１７￣１９，，邋２５，邋２７，邋２９逡逑和３３的系譜圖；Ｄ和Ｅ分別代表家系６和７的系譜圖；Ｆ表示家系２２的系譜圖。逡逑

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文據(jù)Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ克隆需要設(shè)計(jì)目的片段ＰＣＲ引物，采用常規(guī)方法設(shè)計(jì)出一對(duì)２５邋ｂ的上下游引物，再根據(jù)酶切位點(diǎn)粘性末端類(lèi)型在引物５’端加上１５邋ｂｐ邋ＰｃＡＳ２性化末端的堿基序列（圖２－３），包含Ｍｗｌ和５ａｍ／／１酶切位點(diǎn)。應(yīng)用ＰＣＲ證者ＭＴＪｉＯ基因外顯子５－７附近區(qū)域基因組ＤＮＡ，具體引物信息見(jiàn)表２－５。逡逑「ａｐｐｅｎｄ邋ｗｉｔｈ邋ｙｏｕｆｓｐｅｄｆｉｃ邋ｓｅｑｕｅｆｖｅｅ逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R725.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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2 李偉強(qiáng);郭躍明;汪啟籌;馬洪;郭劍;;先天性無(wú)痛無(wú)汗癥并發(fā)習(xí)慣性髖關(guān)節(jié)脫位1例[J];中國(guó)骨傷;2010年05期

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本文編號(hào)：2669766