【摘要】： 前言 早產(chǎn)兒發(fā)生新生兒呼吸窘迫綜合征(neonatal respiratory distress syndrome，NRDS)將嚴(yán)重威脅新生兒生命，其主要原因是新生兒肺發(fā)育不成熟，Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞不能合成足夠的肺表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant，PS)。地塞米松(dexamethasone，DEX)被廣泛應(yīng)用于臨床，能夠有效促進(jìn)Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞合成、分泌肺表面活性物質(zhì)，誘導(dǎo)胎肺成熟，但其孕周依賴性以及抑制胎兒生長(zhǎng)和加重母胎感染等副作用已越來(lái)越多地引起關(guān)注。 鹽酸氨溴索(ambroxol，ABX)作為一種快速促排痰藥，除了能促進(jìn)呼吸道粘稠分泌物排出外，近年來(lái)大量研究表明還可促進(jìn)表面活性物質(zhì)的合成和分泌，增加卵磷脂／鞘磷脂比值，也有明顯的促胎肺成熟作用，且與地塞米松相比無(wú)明顯不良反應(yīng)。 本實(shí)驗(yàn)擬聯(lián)合應(yīng)用鹽酸氨溴索與地塞米松作用體外培養(yǎng)的人胎肺Ⅱ型上皮細(xì)胞，并與單一應(yīng)用鹽酸氨溴索或地塞米松組相比較，確定鹽酸氨溴索與地塞米松在體外促胎肺成熟方面是否具有協(xié)同作用。 材料與方法 1、材料來(lái)源 選擇2006年4月至2006年12月期間，于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院產(chǎn)科病房行腔內(nèi)引產(chǎn)的死亡胎兒12例�；颊呒凹覍偻馑劳鎏菏w由醫(yī)院處理。孕28～34周，胎兒性別不限，取胎兒雙側(cè)肺組織為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。 2、主要試劑 Percoll、15％FCS-RPMI1640、地塞米松、鹽酸氨溴索等。 3、實(shí)驗(yàn)方法 收集的胎肺組織經(jīng)解剖分離和0.25％胰蛋白酶—EDTA消化后，采用密度梯度離心法對(duì)Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞進(jìn)行分離和純化，在15％FCS-RPMI1640培養(yǎng)液、37℃的條件下，培養(yǎng)至細(xì)胞長(zhǎng)成單層。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，并在透射電子顯微鏡下鑒定Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞。對(duì)培養(yǎng)成功的Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分別施加ABX、DEX和ABX+DEX，并繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，用Bartlett法和改良Lowry法分別測(cè)定用藥后的Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞中飽和磷脂和總蛋白的含量，以飽和磷脂／總蛋白比值作為數(shù)據(jù)結(jié)果。 所得到的數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±S)表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理與分析，t檢驗(yàn)比較總體均數(shù)的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果 倒置顯微鏡下Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，貼壁時(shí)間為16.24±0.37h。呈現(xiàn)上皮細(xì)胞的典型形態(tài)，多邊形或梭形，細(xì)胞核明顯，胞漿較豐富。在培養(yǎng)35.38±0.41h之后，細(xì)胞相互連接成單層。 2、Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的電鏡鑒定結(jié)果 透射電鏡下Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞表面有短小的微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)含有電子密度較大的分泌顆粒，形狀和大小不一，呈板層狀結(jié)構(gòu)，即典型的板層小體。培養(yǎng)的細(xì)胞中Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞百分比為72.365±0.354％。 3、ABX、DEX及ABX+DEX對(duì)Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞中飽和磷脂／總蛋白含量比值的影響 (1)未用藥組飽和磷脂／總蛋白含量比值為1.99±0.375μmol／mg，ABX、DEX及ABX+DEX三組飽和磷脂／總蛋白比值分別為2.78±0.34gmol／mg、2.95±0.49μmol／mg和3.46±0.46μmol／mg。 (2)ABX、DEX及ABX+DEX三組分別與未用藥組相比，P值分別為0.0079、0.0096及0.014，均有顯著性差異；ABX+DEX組與ABX組相比，P值為0.0069，，有顯著性差異；ABX+DEX組與DEX組相比，P值為0.015，有顯著性差異；單一應(yīng)用ABX組與DEX組相比，P值為0.320，無(wú)顯著性差異。 4、ABX、DEX及ABX+DEX對(duì)不同孕周胎兒肺組織Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞飽和磷脂／總蛋白含量比值的影響 (1)未用藥組中孕28~(+0)～30~(+6)周和孕31~(+0)～33~(+6)周中飽和磷脂／總蛋白含量比值分別為1.78±0.31μmol／mg和2.20±0.32μmol／mg；ABX組中分別為2.74±0.32μmol／mg和2.82±0.39μmol／mg；DEX組中分別為2.69±0.41μmol／mg和3.01±0.48μmol／mg；ABX+DEX組中分別為3.32±0.36μmol／mg和3.6±0.53μmol／mg。 (2)將未用藥組中孕28~(+0)～30~(+6)周和孕31~(+0)～33~(+6)周標(biāo)本中飽和磷脂／總蛋白含量比值均數(shù)進(jìn)行比較，P值為0.045，有顯著性差異；ABX組中的均數(shù)進(jìn)行比較，P值為0.483，無(wú)顯著性差異；DEX組中的均數(shù)進(jìn)行比較，P值為0044，有顯著性差異；ABX+DEX組中的均數(shù)進(jìn)行比較，P值為0.312，無(wú)顯著性差異。 結(jié)論 1、ABX和DEX兩種藥物均能增加未成熟胎肺組織Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞飽和磷脂的含量；聯(lián)合應(yīng)用的效果要優(yōu)于單一應(yīng)用；單一應(yīng)用ABX或DEX對(duì)胎肺組織Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞飽和磷脂的含量的影響無(wú)顯著差異。 2、孕周較大的胎肺組織中Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞飽和磷脂的含量高于孕周較小者。ABX和ABX+DEX均對(duì)促進(jìn)小孕周的胎肺組織Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞飽和磷脂的含量增加的作用更為明顯。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R722.6

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2659694