【摘要】：目的:探討wnt5a誘導(dǎo)CP15-5a細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的作用。方法:利用HEK293細(xì)胞擴(kuò)增重組腺病毒Ad-wnt5a和Ad-GFP;轉(zhuǎn)染CP15-5a細(xì)胞后,實(shí)驗(yàn)設(shè)置wnt5a組、GFP組和空白對(duì)照組。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Ad-wnt5a和Ad-GFP的轉(zhuǎn)染效率;1周后,通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)經(jīng)Ad-wnt5a誘導(dǎo)CP15-5a細(xì)胞的心肌組織特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)、心肌增強(qiáng)因子2C(MEF2C)的表達(dá);2周后,Western blotting及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)經(jīng)Ad-wnt5a誘導(dǎo)CP15-5a細(xì)胞的心肌連接因子43(CX43)、心肌肌鈣蛋白T(cTn T)的表達(dá);全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)鈉電流(I_(Na))表達(dá)。結(jié)果:Ad-wnt5a和Ad-GFP轉(zhuǎn)染效率分別為42.8%、44.3%。腺病毒轉(zhuǎn)染CP15-5a細(xì)胞1周后,wnt5a組GATA4和MEF2C基因的表達(dá)量(分別為1.717±0.0.220、1.847±0.190)較GFP組和空白對(duì)照組(GATA4:1.003±0.087、0.961±0.063,P0.05,MEF2C:0.456±0.042、0.500±0.095,P0.05)明顯升高,GFP組與空白對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;腺病毒轉(zhuǎn)染2周后,wnt5a組CX43和cTnT基因的表達(dá)量(分別為1.597±0.267、0.727±0.100)較GFP組和空白對(duì)照組(CX43:0.723±0.047、0.783±0.1333,P0.05;cTnT:0.217±0.021和0.253±0.102,P0.01)明顯升高,GFP組與空白對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:wnt5a能誘導(dǎo)CP15-5a細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化。
【圖文】：

細(xì)胞倒置相差顯微鏡(×100)

HEK293細(xì)胞倒置相差顯微鏡和熒光顯微鏡對(duì)比圖(×100)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R725.4

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本文編號(hào)：2655423