【摘要】：目的：喘息是嬰幼兒呼吸系統(tǒng)疾病常見(jiàn)的臨床癥狀之一。若反復(fù)發(fā)作的喘息在嬰幼兒期得不到很好控制，進(jìn)入青少年期支氣管哮喘的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)會(huì)大大提高，因此減少嬰幼兒期喘息的反復(fù)發(fā)作對(duì)其臨床有著重要意義。近些年來(lái)，隨著工業(yè)化的發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，感染性疾病發(fā)生率有所減低，而過(guò)敏性疾病、支氣管哮喘和自身免疫性疾病的發(fā)生率逐年提高，對(duì)其原因的解釋強(qiáng)調(diào)環(huán)境因素的重要性。“衛(wèi)生假說(shuō)”的提出支持這一解釋，隨后提出的“腸道菌群假說(shuō)”，則認(rèn)為腸道共生菌在誘導(dǎo)嬰兒免疫系統(tǒng)發(fā)育、成熟和促進(jìn)免疫平衡方面發(fā)揮重要作用，并可降低兒童今后過(guò)敏性疾病、支氣管哮喘和變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生率。經(jīng)典的Th1/Th2平衡學(xué)說(shuō)作為哮喘的免疫學(xué)機(jī)制中的核心已為大多數(shù)學(xué)者所接受�；诖死碚摶A(chǔ)，人們力圖通過(guò)改變Th2型調(diào)節(jié)因子，平衡免疫以達(dá)到治療哮喘的目的，但臨床療效未達(dá)到人們所預(yù)期的效應(yīng)，表明哮喘的發(fā)病機(jī)制不僅存在Th1/Th2失衡學(xué)說(shuō)，還存在有其他的作用機(jī)制。最近研究提出的以分泌IL-9為主的新型T細(xì)胞亞群，即“Th9細(xì)胞”，在支氣管哮喘、寄生蟲感染性疾病及自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)檢測(cè)喘息急性發(fā)作期兒童糞便中雙歧桿菌和大腸桿菌數(shù)量，外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD3~+CD4~+T細(xì)胞以及血漿中細(xì)胞因子IL-9、TGF-β1的檢測(cè)，分析其在喘息急性發(fā)作時(shí)的作用和作用關(guān)系，從微生態(tài)學(xué)和免疫學(xué)角度探討腸道微生態(tài)學(xué)變化和Th9細(xì)胞在兒童喘息發(fā)病機(jī)制中的作用意義，為早期調(diào)整腸道微生態(tài)平衡、阻止促發(fā)喘息發(fā)作某一免疫環(huán)節(jié)，預(yù)防今后支氣管哮喘的發(fā)生提供理論依據(jù)。 方法：選自我院住院患兒符合下呼吸道感染診斷，并伴有喘息者47例（A組）、符合下呼吸道感染診斷，不伴有喘息者40例（B組）和健康兒童30例（C組）。入選各組兒童一般情況如性別、年齡、體重、喂養(yǎng)方式、生活地域等無(wú)差異。實(shí)驗(yàn)方法：1.采用細(xì)菌16S rDNA熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Flurogenic Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)方法測(cè)定各組小兒糞便中雙歧桿菌、大腸桿菌數(shù)量，計(jì)算B/E值；2.采用流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）測(cè)定各組小兒外周血單個(gè)核細(xì)胞中（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）CD3~+CD4~+T淋巴細(xì)胞百分比；3.采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)方法測(cè)定各組小兒血漿中IL-9和TGF-β_1水平；采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。所有資料進(jìn)行方差齊性及正態(tài)性檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)比較、直線回歸相關(guān)分析，P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1腸道菌群結(jié)構(gòu)變化 1.1A組患兒腸道雙歧桿菌數(shù)量低于C組（P0.05）；大腸桿菌與C組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；B/E值低于C組（P0.05）。 1.2B組患兒腸道雙歧桿菌數(shù)量低于C組（P0.05）；大腸桿菌與C組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；B/E值低于C組（P0.05）。 1.3A組患兒腸道雙歧桿菌數(shù)量低于B組（P0.05）；大腸桿菌與B組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；B/E值低于B組（P0.05）。 2外周血PBMC中CD3~+CD4~+T細(xì)胞變化 2.1A組患兒外周血PBMC中CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)高于C組（P0.05）。 2.2B組患兒外周血PBMC中CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)與C組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2.3A組患兒外周血PBMC中CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)高于B組，（P0.05）。 3血漿中IL-9、TGF-β_1水平變化 3.1A組患兒血漿IL-9水平高于C組（P0.05）；TGF-β_1水平低于C組（P0.05）。 3.2B組患兒血漿IL-9水平與C組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；TGF-β_1水平高于C組（P0.05）。 3.3A組患兒血漿IL-9水平高于B組（P0.05）；TGF-β_1水平低于B組（P0.05）。 3.4喘息急性發(fā)作期患兒血漿中TGF-β_1與IL-9相關(guān)分析：A組患兒血漿TGF-β_1與IL-9存在直線負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.467，P0.05)。 4喘息急性發(fā)作期患兒外周血PBMC中CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)與血漿IL-9水平相關(guān)分析：A組患兒CD3~+CD4~+T細(xì)胞與IL-9存在直線正相關(guān)關(guān)系(r=0.601，P0.05)。 5喘息急性發(fā)作期患兒B/E值與IL-9的相關(guān)分析：A組患兒B/E值與血漿IL-9呈直線負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.319，，P0.05)。 結(jié)論： 1喘息急性發(fā)作期患兒腸道菌群紊亂，表現(xiàn)為雙歧桿菌數(shù)量和B/E值降低，說(shuō)明喘息急性發(fā)作時(shí)可導(dǎo)致腸道微生態(tài)失衡。 2喘息急性發(fā)作期患兒外周血PBMC中CD3~+CD4~+T細(xì)胞和血漿IL-9之間呈正相關(guān)關(guān)系，且兩者均升高，證明血漿中的細(xì)胞因子IL-9主要來(lái)自CD3~+CD4~+T細(xì)胞，所謂“Th9細(xì)胞”，并參與了嬰幼兒喘息急性發(fā)作的過(guò)程，造成氣道高反應(yīng)性和氣道分泌物增加，加重臨床癥狀。 3喘息急性發(fā)作期患兒TGF-β1水平降低，與血漿IL-9水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明在喘息發(fā)作時(shí)免疫耐受被打破，增加了“Th9細(xì)胞”活性。 4喘息急性發(fā)作期患兒出現(xiàn)腸道B/E比值下降、血漿TGF-β1水平降低和IL-9水平升高，且B/E值與IL-9水平之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。分析機(jī)制：喘息急性發(fā)作時(shí)腸道微生態(tài)失衡，免疫耐受被打破，導(dǎo)致“Th9細(xì)胞”活性增加，加重喘息的臨床癥狀，彼此間互為因果，相互影響，形成惡性循環(huán)。 5本研究結(jié)論從微生態(tài)學(xué)和免疫學(xué)角度，綜合闡明了腸道菌群和CD3~+CD4~+T細(xì)胞亞群失衡在喘息急性發(fā)作時(shí)的作用和作用關(guān)系，為早期實(shí)施微生態(tài)學(xué)干預(yù)、糾正免疫失衡，阻止病程的發(fā)生發(fā)展，并降低今后兒童支氣管哮喘發(fā)生率提供重要理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R725.6

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2 易蔚;喬

本文編號(hào)：2645250