發(fā)布時(shí)間：2020-04-28 03:04

【摘要】：背景:少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(oligodendrocyte precursor cell,OPCs)是少突膠質(zhì)細(xì)胞的前體細(xì)胞,其分化成熟為少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte,OLs),在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮成髓鞘作用。腦白質(zhì)作為神經(jīng)纖維的集合部位,其損害和病變將導(dǎo)致認(rèn)知、學(xué)習(xí)、精神和運(yùn)動(dòng)等多種神經(jīng)功能的障礙。出生前后腦發(fā)育正處于OPCs分化成熟階段,此時(shí)的腦缺氧缺血、感染和先天缺陷等因素極易造成OPCs分化障礙和丟失,造成廣泛脫髓鞘和髓鞘損害,形成早產(chǎn)兒和新生兒腦白質(zhì)損傷(white matter injury,WMI)和腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)育不良等腦白質(zhì)病變相關(guān)疾病。此時(shí)內(nèi)源性O(shè)PCs呈相對(duì)不足狀態(tài),通過外源性O(shè)PCs的移植,或可促進(jìn)腦白質(zhì)病變區(qū)域的髓鞘修復(fù)。第一章電鏡評(píng)估OPCs移植對(duì)早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的髓鞘修復(fù)作用研究目的:探討OPCs移植對(duì)早產(chǎn)兒WMI模型大鼠的髓鞘修復(fù)作用。方法:32只SD仔鼠隨機(jī)等分為8組(n=4),分別為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、5d腦室移植組、5d白質(zhì)移植組、9d腦室移植組、9d白質(zhì)移植組、14d腦室移植組和14d白質(zhì)移植組。移植組和模型對(duì)照組在仔鼠3日齡時(shí)結(jié)扎右頸總動(dòng)脈+缺氧80min以建立早產(chǎn)兒WMI模型。5d、9d和14d移植組分別在造模后5、9和14天通過腦立體定位儀將3×105 OPCs注入腦室(腦室移植組)或白質(zhì)(白質(zhì)移植組)。大鼠60日齡和90日齡時(shí)取出移植位點(diǎn)附近胼胝體組織,電鏡下觀察并評(píng)估髓鞘病理,每組隨機(jī)選取50個(gè)髓鞘計(jì)算g-ratio值以評(píng)估髓鞘厚度。結(jié)果:電鏡下,60日齡和90日齡大鼠中假手術(shù)組髓鞘結(jié)構(gòu)均正常,而模型對(duì)照組呈松散、分離和崩解的病變髓鞘形態(tài);除60日齡9d白質(zhì)移植組外,各移植組的病變髓鞘形態(tài)均相對(duì)少見,且嚴(yán)重程度不如模型對(duì)照組,90日齡14d移植組尤其輕微。g-ratio值結(jié)果顯示,90日齡大鼠中5d白質(zhì)移植組、5d腦室移植組和9d白質(zhì)移植組分別與模型對(duì)照組比較平均值均顯著減小(P0.05),表明髓鞘厚度增加,而與假手術(shù)組無(wú)顯著差異(P0.05),其他組兩兩比較均無(wú)顯著差異(P0.05)。電鏡下髓鞘損害評(píng)分結(jié)果顯示,與模型對(duì)照組比較,60日齡大鼠中除9d白質(zhì)移植組外,其余移植組損害程度更輕(P0.05),90日齡大鼠中除9d腦室移植組外,其余移植組損害程度更輕(P0.05),所有組與sham組比較損害程度均顯著增加(P0.05)。結(jié)論:OPCs移植對(duì)早產(chǎn)兒WMI模型大鼠具有一定的髓鞘修復(fù)作用,結(jié)果需要進(jìn)一步證實(shí)和深入探索。第二章新生兒期OPCs移植聯(lián)合康唑?qū)ο忍煨阅X白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良模型小鼠的髓鞘修復(fù)作用研究目的:探討OPCs移植聯(lián)合咪康唑?qū)δX白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良模型小鼠的髓鞘修復(fù)作用。方法采用髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)基因敲除的shiverer鼠作為腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良模型,shi-/-(MBP基因完全缺失)為陰性對(duì)照組(n=5)和治療組(n=5),shi+/+(MBP基因正常)小鼠為陽(yáng)性對(duì)照組(n=5)。治療組于生后1天將OPCs移植入腦白質(zhì)中,同時(shí)在生后1-5天腹腔注射咪康唑哇,對(duì)照組分別以PBS和生理鹽水代替OPCs和咪康唑。小鼠8周齡時(shí)對(duì)各組行免疫熒光、Western blot和電鏡評(píng)估髓鞘形成狀況。結(jié)果:Western blot結(jié)果顯示治療組MBP平均表達(dá)值較陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),較陰性對(duì)照組顯著增強(qiáng)而比陽(yáng)性對(duì)照組顯著減弱;電鏡下,治療組髓鞘數(shù)量較陰性對(duì)照組增多,部分近似正常,但相較陽(yáng)性對(duì)照組髓鞘仍呈相對(duì)松散、分離的形態(tài)。結(jié)論:新生兒期OPCs移植聯(lián)合咪康唑顯示出一定的促進(jìn)髓鞘修復(fù)和促進(jìn)髓鞘新生的能力,但結(jié)果但仍需要進(jìn)一步闡明。第三章兒童腦癱細(xì)胞治療臨床效果的系統(tǒng)評(píng)價(jià)和meta分析目的:評(píng)價(jià)細(xì)胞治療兒童腦癱的臨床效果和安全性。方法:檢索Embase、PubMed、Cochrane圖書館、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(CBM)、知網(wǎng)、萬(wàn)方和維普數(shù)據(jù)庫(kù),收集2017年4月22日之前所有細(xì)胞治療兒童腦癱的臨床文獻(xiàn),制定文獻(xiàn)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)以篩選文獻(xiàn),Jadad量表評(píng)價(jià)文獻(xiàn)質(zhì)量,提取文獻(xiàn)數(shù)據(jù)并采用R 3.4.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)局指標(biāo)為粗大運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分(gross motor function measure,GMFM)和嚴(yán)重不良反應(yīng)(severe adverse effects,SAEs)。結(jié)果:最終納入文獻(xiàn)5篇,病例334例,meta分析結(jié)果顯示試驗(yàn)組相比對(duì)照組的GMFM顯著提高(SMD =0.68,P0.0001),臍血細(xì)胞亞組評(píng)分提高幅度更大(P=0.02)。試驗(yàn)組與對(duì)照組的SAEs發(fā)生率無(wú)顯著區(qū)別(P0.05)。結(jié)論:細(xì)胞治療兒童腦癱的短期效果良好,但仍需要更多高質(zhì)量研究的驗(yàn)證。
【圖文】：

邐．逡逑物徽德嫩逡逑圖１－２邋６０日齡和９０日齡大鼠ｇ－ｒａｔｉｏ值分布注：＊：表示戶＜０．０５逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｇ－ｒａｔｉｏ邋ｓｃｏｒｅ邋ｉｎ邋６０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ａｎｄ邋９０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ｒａｔｓ逡逑ｃ邋髓鞘損害評(píng)分逡逑５－逡逑４－逡逑３＿邋１１逡逑Ｉ邋＂Ｔｌ邋Ｍ邋＂Ｉ邋（逡逑ｉ－｛邐ｉ逡逑圖１－３邋６０日齡和９０日齡大鼠髓鞘損害評(píng)分分布注：淺色表示與對(duì)應(yīng)日齡的模型逡逑對(duì)照組比較，尸＜０．０５逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｙｅｌｉｎ邋ｉｎｊｕｒｙ邋ｓｃｏｒｅ邋ｉｎ邋６０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ａｎｄ邋９０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ｒａｔｓ逡逑１２逡逑

逑陰性對(duì)照ａ邋治療ｍ邐ｆｔｉｆｔ對(duì)ｉｓｍ逡逑圖２－１邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測(cè)髓鞘堿性蛋白（ＭＢＰ）表達(dá)Ａ：陰性對(duì)照組；Ｂ：治療組；逡逑Ｃ：陽(yáng)性對(duì)照組逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ邋ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ邋ｏｆ邋ｍｙｅｌｉｎ邋ｂａｓｉｃ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋（ＭＢＰ）邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋Ａ：邋ｎｅｇａｔｉｖｅ逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ；邋Ｂ：邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐ；邋Ｃ：邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ逡逑３．２電鏡結(jié)果逡逑電鏡觀察小鼠胼胝體區(qū)域的髓鞘結(jié)構(gòu)，結(jié)果見圖２－３。電鏡下，治療組髓鞘數(shù)量逡逑較陰性對(duì)照組增多，，形態(tài)均勻一致，但多數(shù)髓鞘偏薄，僅只有１？２層，相較陽(yáng)性對(duì)照逡逑組髓鞘呈相對(duì)松散、分離的形態(tài)，部分髓鞘近似正常，具有多層形態(tài)且層面緊密。陰逡逑性對(duì)照組含有髓鞘形態(tài)，且殘存髓鞘形態(tài)薄而紊亂。陽(yáng)性對(duì)照組髓鞘明顯X椂�，所永C義纖棖識(shí)季哂芯紉恢碌男翁�，窍佮浆F(xiàn)瘟譜楹鴕跣遠(yuǎn)哉兆槊饗院瘢哂卸嗖閾翁�，边辶x轄縝邐�，层面排列紧密，除码s蟹擲臚�，多数尤丝槩、丢M訓(xùn)紉斐Ｐ翁ｅ義希海В庫(kù)�、八ｖ埩x賢跡玻搽碼仗邇蛩棖實(shí)緹到峁梗ǎ叮板澹埃埃埃╁

本文編號(hào)：2642991