發(fā)布時間：2020-04-26 20:25

【摘要】： 第一部分病毒性心肌炎小鼠不同時期IGF-1及相關(guān)蛋白的表達(dá)研究 目的觀察病毒性心肌炎小鼠不同時點血漿、心肌組織中IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3等相關(guān)蛋白的表達(dá),探討其在病毒性心肌炎的發(fā)生發(fā)展中的可能作用。 方法取4周齡雄性Balb/c小鼠60只,隨機(jī)分為空白對照組(20只)和病毒實驗組(40只)。病毒實驗組于實驗當(dāng)日一次腹腔注射0.1ml含1×10~2TCID_(50) CVB_3(Nancy株)病毒液,空白對照組腹腔注射0.1ml不含病毒的Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)液。分別于實驗第3d、7d、15d、30d隨機(jī)處死部分小鼠,用ELISA法測血漿IGF-1的表達(dá),心肌病理切片HE染色,免疫組化法和RT-PCR技術(shù)檢測心肌組織中IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3等相關(guān)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果(1)病毒性心肌炎小鼠血漿IGF-1檢測均值為(565.75±63.2)pg/ml,空白對照組為(365.92±37.31)pg/ml,病毒實驗組較空白對照組高,差異有顯著性(t =13.21,p0.01)。(2)小鼠在感染CVB_3病毒后血漿IGF-1表達(dá)逐漸增高,15d達(dá)最高峰,30d表達(dá)降低但仍維持在一較高水平,在各時點實驗組與對照組IGF-1值比較,差異均有顯著性(F=19.53,p0.01)。(3)心肌組織免疫組化染色示在正常心肌組織有IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3等相關(guān)蛋白的低表達(dá),小鼠感染CVB_3病毒后IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3等相關(guān)蛋白表達(dá)增高,以15d時最明顯,其灰度值比較有統(tǒng)計學(xué)意義(F_(IGF-1)=26.72, p0.01;F_(IGF-1R)=6.73, p 0.05;FIGFBP_3=21.57, p 0.01)。RT-PCR方法檢測心肌組織IGF-1及IGFBP_3 mRNA表達(dá)在病毒實驗組亦高于空白對照組。 結(jié)論IGF-1—IGF-1R—IGFBPs軸可能在病毒性心肌炎發(fā)病機(jī)制中有重要作用。 第二部分黃芪甲甙對急性病毒性心肌炎IGF-1及相關(guān)蛋白表達(dá)的作用研究 目的觀察黃芪甲甙對急性小鼠病毒性心肌炎干預(yù)后,IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3等相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,探索黃芪甲甙的治療機(jī)制。 方法4周齡雄性Balb/c小鼠65只,隨機(jī)分為A、B、C、D、E五組。A組為正�？瞻讓φ战M10只,實驗當(dāng)日僅腹腔接種0.1ml不含病毒的Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)液,每天以配制黃芪甲甙的羥甲基纖維素鈉溶液灌胃1次,連續(xù)2周;B組為正常黃芪對照組10只,實驗當(dāng)日腹腔接種Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)液,每天以9%黃芪甲甙液灌胃1次,連續(xù)2周;C組為黃芪高劑量治療組15只,實驗當(dāng)日腹腔接種0.1ml內(nèi)含1×10~2TCID_(50)CVB_3病毒,每天以9%黃芪甲甙液灌胃1次,連續(xù)2周;D組為黃芪低劑量治療組15只,實驗當(dāng)日腹腔接種0.1ml內(nèi)含1×10~2TCID_(50)CVB_3病毒,每天以1%黃芪甲甙液灌胃1次,連續(xù)2周;E組為病毒對照組15只,實驗當(dāng)日腹腔接種CVB_3病毒,每天以羥甲基纖維素鈉液灌胃1次,連續(xù)2周。觀察各組小鼠死亡率,第15天常規(guī)無菌采血、取心臟,用ELISA法測血漿IGF-1的表達(dá),并作心肌病理切片HE染色,觀察心肌病理學(xué)改變;免疫組化技術(shù)和RT-PCR技術(shù)檢測心肌組織中IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3的表達(dá)。 結(jié)果(1)C組死亡率較D、E組明顯降低,B組無小鼠死亡。(2)C組心肌病變積分比D、E組明顯下降,病變程度明顯輕于D、E組,D組和E組間病變積分及程度無顯著差異。(3)ELISA法檢測血漿IGF-1均值A(chǔ)組為365.92 pg/ml, B組為372.23 pg/ml, C組為472.46 pg/ml, D組為654.51 pg/ml, E組為648.75 pg/ml,與A組比較,C組均值增高,D、E組明顯增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05或0.01),B組無顯著差異,D組與E組間亦無顯著差異。(4)心肌組織免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR檢測在蛋白水平和mRNA水平均提示,正常心肌組織中有IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3低表達(dá),在C組表達(dá)稍增高,在D、E組表達(dá)顯著增高,而B組無明顯變化,D、E組間表達(dá)無明顯差異。 結(jié)論黃芪甲甙干預(yù)可降低小鼠IGF-1、IGF-1R及IGFBP_3等相關(guān)蛋白的表達(dá),推測黃芪甲甙對急性病毒性心肌炎小鼠心肌組織的保護(hù)作用可能是通過調(diào)節(jié)IGF-1及IGF-1R、IGFBP_3等相關(guān)蛋白表達(dá)的途徑來實現(xiàn)。
【圖文】：

帶分別為 280bp、400 bp及 517bp，符合設(shè)計的大小，因此可以確定產(chǎn)物分別為IGF-1、IGFBP3 及beta-actin（圖 1-6、7）。條帶密度掃描及半定量分析顯示（見表 1-2，圖 1-8），VMC小鼠在接種病毒后 3d心肌IGF-1 及IGFBP3mRNA表達(dá)水平升高，15d表達(dá)水平最高， 30d其表達(dá)水平下降，但仍維持在一個較高水平，統(tǒng)計學(xué)分析表明，小鼠接種CVB3病毒后 3-30d心肌IGF-1 及IGFBP3mRNA各時點表達(dá)水平與對照組比較，，差異均有顯著性（p<0.05 或 0.01），提示CVB3病毒感染可導(dǎo)致IGF-1 及IGFBP3mRNA表達(dá)上調(diào)。

圖 1-2 VMC 小鼠心肌 IGF-1 免疫組化染色（DAB×200）A：對照組；B ：3 天組；C：7 天組；D：15 天組； E：30 天組；F：陰性對照
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R725.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2641863