【摘要】：目的比較物理訓(xùn)練和自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)對(duì)新生期大鼠反復(fù)長(zhǎng)程驚厥所致神經(jīng)行為損傷的干預(yù)效應(yīng)及分子機(jī)制。 方法出生6d(Postnatal day 6,用P6表示,下同)的健康Sprague-Dawley(SD)大鼠75只,隨機(jī)分為5組,對(duì)照組(control,CON組,n=15)、對(duì)照水療組(control and hydrotherapy,HCON組,n=15)、驚厥組(Recurrent neonatal seizures,RS組,n=15)、驚厥水療組(Recurrent neonatal seizures and hydrotherapy,HRS組,n=15),3-MA組(3-MA組,n=15)。RS組、HRS組及3-MA組在P6吸入三氟乙醚誘導(dǎo)驚厥發(fā)作,持續(xù)30分鐘,連續(xù)6天,CON及HCON組同樣操作但不吸入三氟乙醚,其中3-MA組在每日開始驚厥前15min腹腔注射3-MA。于末次驚厥后第2天(即P12)對(duì)HCON及HRS組采用物理訓(xùn)練(泡泡浴水療)進(jìn)行干預(yù),連續(xù)28天。檢測(cè)五組大鼠生長(zhǎng)發(fā)育(體重、門齒萌出、豎耳、睜眼),P12、P17進(jìn)行游泳行為評(píng)分,P17、P26、P33、P40進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分(前肢懸吊實(shí)驗(yàn)、負(fù)向趨地反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))。P42每組各取6只采用Timm染色法觀測(cè)各組大鼠海馬區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽。余大鼠(n=9/每組)于P43～P49行Morris水迷宮測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。于P50取海馬及大腦皮質(zhì)組織,采用免疫印跡技術(shù)(Western blot)檢測(cè)可塑性相關(guān)基因-1(plasticity related gene 1,PRG-1)、抗凋亡基因Bcl-2及自噬標(biāo)記蛋白LC3、Beclin1的表達(dá)。 結(jié)果1、生長(zhǎng)發(fā)育RS組各日齡體重較CON組明顯降低(P㩳0.01);HRS組(P26、P33、P40)體重較RS組顯著升高(P㩳0.05),3-MA組(P12、P14、P18)體重較RS組顯著升高(P㩳0.05)。各組生理發(fā)育現(xiàn)象(門齒萌出、豎耳、睜眼)出現(xiàn)時(shí)間無(wú)顯著性差異。 2、神經(jīng)行為學(xué)(1)游泳評(píng)分:RS組游泳實(shí)驗(yàn)評(píng)分(P12、P17)明顯低于CON組(P㩳0.05);HRS組游泳實(shí)驗(yàn)評(píng)分(P12、P17)與RS組比較無(wú)明顯差異(P㧐0.05),3-MA組游泳實(shí)驗(yàn)評(píng)分(P12、P17)與RS組相比明顯提高(P㩳0.05)。(2)前肢懸吊實(shí)驗(yàn)顯示:各組大鼠不同日齡前肢懸吊時(shí)間比較無(wú)顯著性差異(P㧐0.05)。(3)負(fù)向趨地反應(yīng)實(shí)驗(yàn)顯示:RS組不同日齡負(fù)向趨地反應(yīng)時(shí)間較CON組明顯延長(zhǎng)(P㩳0.05);HRS組不同日齡負(fù)向趨地反應(yīng)時(shí)間與RS組比較無(wú)顯著性差異(P㧐0.05),而3-MA組不同日齡負(fù)向趨地反應(yīng)時(shí)間較RS組明顯降低(P㩳0.05)。(4)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示:RS組(P17、P26、P33)曠場(chǎng)得分較CON組明顯降低(P㩳0.05);HRS組曠場(chǎng)得分(P26、P33、P40)較RS組明顯升高(P㩳0.05),同時(shí)3-MA組曠場(chǎng)得分(P17、P26)較RS組明顯升高(P㩳0.05)。 3、學(xué)習(xí)記憶能力Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示:(1)逃避潛伏期:五組大鼠逃避潛伏期于測(cè)試第1天至第5天逐漸縮短,RS組第4、5天逃避潛伏期較CON組明顯延長(zhǎng)(P㩳0.05);HRS組第4天逃避潛伏期較RS組明顯縮短(P㩳0.05),同時(shí)3-MA組第4、5天逃避潛伏期亦明顯短于RS組(P㩳0.05)。(2)搜尋策略:RS組第4、5天成績(jī)較CON組、HRS組及3-MA組差,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05)。(3)空間探索測(cè)試:各組間穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)明顯差異(P㧐0.05)。 4、Neo-Timm染色:RS組大鼠海馬齒狀回內(nèi)分子層及CA3區(qū)始層可見明顯異常增生苔蘚纖維;HRS組CA3區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽程度較RS組明顯降低(P㩳0.05),而3-MA組CA3區(qū)及齒狀回苔蘚纖維發(fā)芽程度均較RS組降低(P㩳0.05);CON組及HCON組未見明顯發(fā)芽。 5、免疫印跡:(1)RS組海馬及大腦皮質(zhì)PRG-1表達(dá)水平較CON組明顯升高(P㩳0.05);HRS組PRG-1表達(dá)水平與RS組相比無(wú)顯著性差異(P㧐0.05),但是3-MA組海馬及大腦皮質(zhì)PRG-1的表達(dá)較RS組明顯降低(P㩳0.05)。(2)RS組海馬及大腦皮質(zhì)Bcl-2表達(dá)水平較CON組明顯降低(P㩳0.05);HRS組海馬及大腦皮質(zhì)Bcl-2表達(dá)水平較RS組顯著升高(P㩳0.05),3-MA組海馬Bcl-2表達(dá)水平較RS組顯著升高(P㩳0.05)。(3)各組大鼠海馬及大腦皮質(zhì)LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的值及Beclin1的表達(dá)無(wú)顯著性差異(P㧐0.05)。 結(jié)論1、新生期三氟乙醚誘導(dǎo)大鼠反復(fù)長(zhǎng)程驚厥導(dǎo)致生長(zhǎng)發(fā)育、神經(jīng)行為及學(xué)習(xí)能力損傷,同時(shí)造成海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽以及大腦皮質(zhì)與海馬PRG-1表達(dá)升高、Bcl-2表達(dá)降低。 2、驚厥后早期采用物理訓(xùn)練(泡泡浴水療)進(jìn)行干預(yù),能促進(jìn)大鼠體重增長(zhǎng),改善驚厥所致情感認(rèn)知及學(xué)習(xí)能力損害,但對(duì)神經(jīng)反應(yīng)性損傷干預(yù)效果不明顯。泡泡浴水療能減輕驚厥后海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽程度,顯著上調(diào)海馬與大腦皮質(zhì)Bcl-2的表達(dá),但對(duì)海馬及大腦皮質(zhì)PRG-1的表達(dá)無(wú)明顯干預(yù)作用。 3、驚厥發(fā)作前應(yīng)用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤能明顯改善驚厥所致體重降低、神經(jīng)行為異常及情感認(rèn)知和學(xué)習(xí)能力損害。顯著抑制驚厥后海馬苔蘚纖維異常增生發(fā)芽,明顯下調(diào)海馬及大腦皮質(zhì)PRG-1的表達(dá)、上調(diào)海馬Bcl-2的表達(dá)。 4、本研究表明,物理訓(xùn)練(泡泡浴水療)及自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤對(duì)新生期驚厥性腦損傷均有干預(yù)作用,而3-甲基腺嘌呤的干預(yù)效應(yīng)更加顯著。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R722.1

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2 楊s，

本文編號(hào)：2642172