發(fā)布時間：2020-04-23 12:02

【摘要】： 目的:生長板是位于長骨遠(yuǎn)端骺與干骺端之間的一層高度器官化的透明軟骨。在組織學(xué)上根據(jù)軟骨細(xì)胞的不同的分化階段,可以將生長板分為不同的水平區(qū)帶,即:靜止軟骨細(xì)胞帶、增殖軟骨細(xì)胞帶和肥大軟骨細(xì)胞帶。本研究通過對正常大鼠脛骨標(biāo)本進行石蠟包埋、切片后分別應(yīng)用常規(guī)HE染色法、Masson三色法、AB-PAS染色法、甲苯胺藍(lán)染色法、藏花紅染色法、AZAN染色法、VG染色法、Mallory三色法、番紅染色法、固綠染色法、番紅-固綠染色法進行染色,比較上述多種組織學(xué)染色方法在正常大鼠脛骨生長板組織切片中的染色規(guī)律,探討不同組織化學(xué)染色方法在生長板組織形態(tài)學(xué)研究中的應(yīng)用。 方法:對正常生長發(fā)育期大鼠脛骨標(biāo)本固定、脫鈣后進行石蠟包埋和切片。切片脫蠟至水后分別進行(1)常規(guī)HE染色:入蘇木精染液5分鐘;自來水洗1分鐘;入1%鹽酸酒精分色數(shù)秒;自來水洗1分鐘;入1%的伊紅3分鐘;自來水洗1分鐘;梯度酒精脫水;二甲苯透明;中性樹膠封片。(2)Masson三色法(苯胺藍(lán)復(fù)染)染色:入A液5分鐘;0.2%醋酸稍洗;入5%磷鎢酸5-10分鐘;0.2%醋酸洗2次;入B液5分鐘;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脫水;二甲苯透明;中性樹膠封片。Masson三色法(亮綠復(fù)染)染色:入A液5分鐘;0.2%醋酸稍洗;入5%磷鎢酸5-10分鐘;0.2%醋酸洗2次;入B液5分鐘;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脫水;二甲苯透明;中性樹膠封片。(3)AB(阿爾辛藍(lán))-PAS(過碘酸-Schiff)染色:蒸餾水浸洗1分鐘;入3%醋酸液中3分鐘;入阿爾新蘭液中30分鐘;入3%醋酸液3分鐘;蒸餾水沖洗多次;入過碘酸氧化10分鐘;自來水沖洗;蒸餾水浸洗2次;在Schiff試劑中染色10-20分鐘(據(jù)室溫);流水沖洗2-5分鐘,蒸餾水洗片刻;用Harris蘇木精液淡染核;0.5%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘;蒸餾水洗多次;95%及無水乙醇脫水;二甲苯透明;中性樹膠封固。(4)甲苯胺藍(lán)染色:入甲苯胺藍(lán)溶液30分鐘;水洗1分鐘;入冰醋酸溶液中于顯微鏡下分色數(shù)秒;蒸餾水洗2次,各2分鐘;自然風(fēng)干;二甲苯透明;中性樹膠封片。(5)藏花紅染色:入0.1%的藏花紅溶液染色2-3分鐘;鏡下分化數(shù)秒;梯度酒精脫水;二甲苯透明;中性樹膠封片。(6)“AZAN”三色法染色:入偶氮卡紅液4-8小時,37度染色;切片冷卻后入蒸餾水漂洗;于1 %苯胺的95%酒精液分色至淡紅色;0.5%磷鎢酸水溶液媒染3-5分鐘;入苯胺藍(lán)-橘黃G染液0.5-1小時;濾紙沾干后在95%酒精分色1/2-1分鐘梯度酒精脫水;二甲苯透明;中性樹膠封片。(7)Van Gieson染色法染色:入Weigert氏鐵蘇木素溶液5-10min;自來水充分洗;入Van Gieson氏液染30s-1min;95%酒精分化數(shù)秒;梯度酒精脫水;二甲苯透明;中性樹膠封片。(8)Mallory一步三色法染色:重鉻酸鉀液10分鐘;流水沖洗2分鐘;蒸餾水兩次;酸性復(fù)紅液2分鐘;蒸餾水稍洗;苯胺藍(lán)液20分鐘;95%乙醇快速分化;直接無水乙醇脫水;二甲苯透明;中性樹膠封固。(9)番紅染色:在1%番紅染液中浸染3分鐘;鏡下95%酒精分化數(shù)秒;風(fēng)干;二甲苯透明;中性樹膠封片。(10)固綠染色:于1%固綠染液中浸染3分鐘;鏡下95%酒精迅速分化;風(fēng)干;二甲苯透明;中性樹膠封片。(11)番紅-固綠染色:于1%番紅染液中浸染3分鐘;入1%固綠復(fù)染3分鐘;95%酒精分化數(shù)秒;復(fù)加番紅染色2分鐘;鏡下95%酒精分化數(shù)秒;風(fēng)干;二甲苯透明;中性樹膠封片。在OLIMPUS顯微鏡下觀察經(jīng)上述染色后的切片上的生長板組織,并進行圖像采集,比較上述組織學(xué)染色方法在正常大鼠脛骨生長板組織切片中的染色規(guī)律。 結(jié)果:(1)常規(guī)HE染色:軟骨組織呈藍(lán)染,可見不同區(qū)帶的軟骨細(xì)胞,軟骨陷窩不著色,成熟的骨小梁被染成粉紅色。(2)Masson三色染色(苯胺藍(lán)復(fù)染):軟骨組織呈淡藍(lán)色,可見不著色的骨陷窩以及不同區(qū)帶的軟骨細(xì)胞。骨小梁外形不規(guī)則或呈鹿角狀,隨著骨小梁趨于成熟,部分骨小梁中間的顏色呈紅色,成熟的骨小梁呈深藍(lán)色。骨樣基質(zhì)到成熟骨的染色規(guī)律為淡藍(lán)色到深藍(lán)色。纖維組織呈藍(lán)色條紋狀或邊緣光滑團塊狀,中間無骨母細(xì)胞和骨陷窩。Masson三色染色(亮綠復(fù)染):軟骨組織呈淡綠色,骨陷窩不著色,可見不同區(qū)帶的軟骨細(xì)胞�？梢娡庑纬事菇菭畹墓切×�,隨著骨小梁趨于成熟,部分骨小梁中間的顏色呈紅色,成熟的骨小梁呈深綠色。骨樣基質(zhì)到成熟骨的染色規(guī)律為淡綠色到深綠色。(3)AB-PAS染色:軟骨組織呈深淺不一的藍(lán)色,可見軟骨細(xì)胞呈柱狀排列,從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶藍(lán)色漸淺,骨化中心的骨組織呈紅染。生長板與周圍組織界限清楚。(4)甲苯胺藍(lán)染色:軟骨組織基質(zhì)呈均勻的淡紫藍(lán)色,隱約可見呈柱狀排列的軟骨細(xì)胞,細(xì)胞核被染成紫色。(5)藏花紅染色:軟骨組織呈深淺不一的橘色,從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶染色漸淺,骨小梁被染成粉紅色。軟骨組織與骨組織染色后差異明顯。(6)“AZAN”三色法:軟骨組織呈淡藍(lán)色,可見柱狀排列的軟骨細(xì)胞,生長板各區(qū)帶染色均較淺,骨小梁呈藍(lán)色,骨小梁之間可見橘紅色的紅細(xì)胞。(7)Van Gieson染色法:軟骨組織呈淡紅色,軟骨細(xì)胞核呈灰黑色。骨小梁形狀不規(guī)則,呈紅染,其間可見棕黃色的紅細(xì)胞。軟骨組織與骨組織界限分明。(8)Mallory三色法:軟骨組織及骨小梁為藍(lán)染,深淺不一,骨小梁染色最深。軟骨細(xì)胞核呈紅色,骨小梁間紅細(xì)胞呈橘黃色。(9)番紅染色:軟骨組織及骨小梁呈深淺不一的粉紅色,從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶染色漸淺,骨小梁染色最淺。(10)固綠染色:骨小梁呈淡染的綠色,軟骨細(xì)胞及其基質(zhì)不著色。(11)番紅-固綠染色:軟骨組織呈深淺不一的粉紅色,從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶染色漸淺。骨小梁呈綠色,其間紅細(xì)胞被染成綠色。軟骨組織與骨組織對比鮮明。 結(jié)論:在生長板組織學(xué)研究中,AB-PAS染色法、VG染色法、番紅-固綠染色法能較好的將不同成熟度的軟骨組織和骨組織顯示出來,優(yōu)于其他方法,可用于骨發(fā)育的研究中。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R726.8

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本文編號：2637705