【摘要】：第一部分5例先天性無(wú)丙種球蛋白血癥的臨床特征與家系BTK基因分析 目的:探討廣西5例先天性無(wú)丙種球蛋白血癥患兒臨床特點(diǎn)及其家系與Bruton′s酪氨酸激酶(BTK)基因的關(guān)系和BTK基因突變類(lèi)型。 方法:對(duì)2005年~2010年在本院臨床擬診為XLA的5名患兒,采用傳統(tǒng)法分離外周血淋巴細(xì)胞后提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,以及提取患兒gDNA,突變的信息結(jié)果經(jīng)PCR產(chǎn)物測(cè)序獲得;同時(shí)收集其相關(guān)的臨床資料,將其臨床表型與基因型進(jìn)行對(duì)比分析。 結(jié)果:臨床特征結(jié)果:5例患兒皆為男性,臨床表現(xiàn)中均存在反復(fù)感染,以呼吸道感染為主, 4例無(wú)咽扁桃體,3例伴關(guān)節(jié)炎并發(fā)癥,疾病可致患兒生長(zhǎng)發(fā)育落后及營(yíng)養(yǎng)不良;5例患兒免疫球蛋白、CD19+百分比均明顯降低�；驒z測(cè)結(jié)果:1例患兒BTK基因外顯子及拼接位點(diǎn)未見(jiàn)異常,余4例BTK基因皆存在突變位點(diǎn),其中2例基因分析為新突變位點(diǎn),突變類(lèi)型為新位點(diǎn)無(wú)義突變(1402 CT、1344 delC)2例、已報(bào)道hnRNA剪接位點(diǎn)突變(IVS17 -2AG)1例以及框移突變(1713-1716del TTTG)1例,4例突變皆位于酪氨酸激酶(tyrosine kinase,TK)區(qū)。 結(jié)論:⑴本研究發(fā)現(xiàn)2例XLA未報(bào)道的新突變位點(diǎn),皆為無(wú)義突變;4例XLA患兒的BTK基因突變位點(diǎn)皆位于TK區(qū)。⑵XLA患者臨床癥狀嚴(yán)重程度、關(guān)節(jié)炎并發(fā)癥與BTK基因突變的編碼區(qū)位點(diǎn)、類(lèi)型之間存在一定關(guān)系,但本組例數(shù)偏少,尚需進(jìn)一步研究。 第二部分2例慢性肉芽腫病的臨床特征與CYBB基因分析 目的:探討廣西2例慢性肉芽腫病(CGD)患兒臨床特點(diǎn)及其家系與CYBB基因的關(guān)系和CYBB基因突變類(lèi)型。 方法:收集2005年~2010年在本院臨床擬診為CGD 2例患兒的臨床資料,并進(jìn)行分析;同時(shí)采集其外周靜脈血提取患兒及相關(guān)母系親屬gDNA,運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增CYBB-DNA 13個(gè)外顯子,突變的信息結(jié)果經(jīng)PCR產(chǎn)物測(cè)序獲得。 結(jié)果:臨床特征結(jié)果:2例為男性,外周血免疫細(xì)胞分型T、B細(xì)胞計(jì)數(shù)均正常,血清免疫球蛋白水平增高,流式細(xì)胞術(shù)呼吸爆發(fā)實(shí)驗(yàn)NAPDH氧化酶活性皆降低。基因檢測(cè)結(jié)果:1例CYBB基因存在突變位點(diǎn),為未報(bào)道新突變位點(diǎn),突變類(lèi)型為錯(cuò)義突變(1296 GT)位于NADPH區(qū);1例CYBB基因未見(jiàn)異常。 結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)一例新錯(cuò)義突變,突變位點(diǎn)于NADPH結(jié)合區(qū),Exon10,G412V。
【圖文】：

收集于 2005 年~2010 年在本院住院治療，臨床擬診 XLA 的患兒 5 名，采集患兒及一級(jí)親屬外周血約 2ml 至無(wú)菌 ACD 抗凝管用于提取 DNA，，4ml至無(wú)菌肝素鈉抗凝管抽提 RNA，兩者皆用于進(jìn)行 XLA 的 BTK 基因分析。2.2 分離 PBMCs（Ficoll 法）⑴在 4ml 抗凝血中，加入 4ml 1×PBS，充分混勻。⑵吸取淋巴細(xì)胞分離液（Ficoll 液）4ml 置于另一 15ml 離心管中。⑶垂直放置離心管，用吸管吸取混勻的血液。吸管置于離心管內(nèi)，吸管口在 Ficoll 液的液面以上，同時(shí)沿管壁做圓周轉(zhuǎn)動(dòng)。將吸管內(nèi)的血液輕輕的、均勻的平鋪于 Ficoll 液的液面上（如 Figure 1-1A）；或者至一毛細(xì)滴管于已盛以上混合血液的離心管底，緩緩加入 Ficoll 液于血液下（如 Figure 1-1B）；保持兩者界面清晰（如 Figure 1-1 C）。

圖 1-7. 5 個(gè)先天性無(wú)丙種球蛋白血癥突變位點(diǎn)圖Figure 1-7. Detailed map of mutation in 5 congenital agammaglobulinemia1.4.2 克隆結(jié)果：例 5 母親外顯子 16 位點(diǎn)曾 3 次檢測(cè)為雜峰，考慮該女性為雜合攜帶者因其中一條鏈缺失較多（4 個(gè)）堿基，導(dǎo)致測(cè)序時(shí)存在兩型 DNA 條帶同時(shí)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R725.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 王美紅;張建華;;慢性肉芽腫病及其基因突變[J];國(guó)際兒科學(xué)雜志;2006年06期

2 王曉川;X-連鎖無(wú)丙種球蛋白血癥合并幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎[J];上海醫(yī)學(xué);2003年07期

3 陳同辛;王璽;;原發(fā)性免疫缺陷病診斷標(biāo)準(zhǔn)[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2006年09期

4 王曉川;;原發(fā)性抗體缺陷病的診斷和治療[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2006年21期

本文編號(hào)：2635803