【摘要】： 目的:探討高氧致新生大鼠肺損傷過程中脾臟及胸腺中T淋巴細(xì)胞的動態(tài)變化。 方法:72只出生12小時內(nèi)的清潔級Sprague-Dawley(S-D)大鼠(簡稱新生大鼠)作為研究對象。隨機(jī)分為2組:Ⅰ、空氣對照組,Ⅱ、高氧暴露組,每組36只。Ⅰ組置于正常空氣中喂養(yǎng),Ⅱ組置于80-85%氧濃度下喂養(yǎng)。分別于第1、4、7、14、21天時,以常規(guī)組織學(xué)方法觀察肺臟形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;運用常規(guī)計數(shù)法檢測脾臟中淋巴細(xì)胞數(shù)量變化;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟中CD4+、CD8+T細(xì)胞的百分比的變化;以混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MTT法)檢測脾淋巴細(xì)胞對植物血凝素和自身肺組織的增殖反應(yīng);用常規(guī)組織學(xué)和免疫組化法觀察胸腺形態(tài)結(jié)構(gòu)變化及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)和CD4+、CD8+細(xì)胞分布。 結(jié)果:1.肺臟組織學(xué)變化:與空氣對照組相比,高氧組4d時肺組織充血、水腫;7d時肺組織出血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤明顯;14d時炎癥反應(yīng)減輕,肺間質(zhì)增寬,纖維增生;21d肺泡數(shù)量減少,肺間質(zhì)纖維細(xì)胞增生,肺泡節(jié)段性高充氣與膨脹不全交替,形成特征性囊泡樣改變。 2.脾組織中淋巴細(xì)胞數(shù)量與活性變化:實驗4d時,高氧組脾臟中淋巴細(xì)胞數(shù)量開始增多,CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞百分比較對照組明顯增多(p0.01),至實驗7d時,CD4+淋巴細(xì)胞百分比明顯高于對照組(p0.01),此后CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞百分比逐漸下降,到實驗21d時CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞百分比接近對照組,而絕對數(shù)明顯低于對照組(p值均0.01);此外,淋巴細(xì)胞活性檢驗發(fā)現(xiàn),實驗4d至7d時,脾淋巴細(xì)胞對自身肺組織和對PHA刺激的增殖反應(yīng)活性較對照組均明顯增高(p值均0.01);實驗14d至21d時,脾淋巴細(xì)胞對自身肺組織刺激的增殖反應(yīng)活性逐漸下降,但均明顯高于對照組(p值均0.01),而對PHA刺激后的增殖反應(yīng)活性均明顯低于對照組(p值均0.01)。 3.胸腺組織學(xué)變化:與對照組相比,實驗4d至7d時,高氧組胸腺指數(shù)逐漸升高,PCNA表達(dá)逐漸增強(qiáng),兩組間差異均有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p值均0.01);但實驗14d至21d時,高氧組胸腺指數(shù)、PCNA指數(shù)逐漸下降,其中PCNA指數(shù)在21d時已明顯低于對照組(p0.01),形態(tài)學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)高氧組胸腺蜷曲退化,脂肪細(xì)胞及纖維細(xì)胞增生,免疫組化顯示CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞數(shù)量減少且呈區(qū)域性分布。 結(jié)論:1.80-85%高氧持續(xù)暴露21d可造成新生大鼠高氧性肺損傷,病理表現(xiàn)主要為肺泡節(jié)段性高充氣和與膨脹不全交替的囊泡樣改變等,與新生兒慢性肺損傷的病理改變相符。 2.高氧性肺損傷早期脾臟中CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞百分比明顯增高、活性逐漸增強(qiáng),后期脾臟CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少,淋巴細(xì)胞活性顯著減低。 3.高氧性肺損傷可導(dǎo)致新生大鼠的胸腺發(fā)生階段性病理改變,即病理性成熟加速迅速轉(zhuǎn)變?yōu)椴±硇晕s,表現(xiàn)為CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少并呈異常的點狀局限性和區(qū)域性分布。 4.高氧性肺損傷過程中有自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的參與。其自身反應(yīng)性損傷的發(fā)生發(fā)展與胸腺的免疫組織學(xué)改變之間存在的對應(yīng)關(guān)系可能與高氧損傷誘導(dǎo)的胸腺病理性加速成熟有關(guān)。 5.高氧性肺損傷所致的免疫功能低下可能與胸腺異常發(fā)育及淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量和功能紊亂有關(guān)。
【圖文】：

高氧暴露對大鼠脾淋巴細(xì)胞絕對數(shù)具有明顯影響，兩組間計學(xué)意義（F=8.52，P<0.05）。組間比較發(fā)現(xiàn)高氧組 1d 至 4d 時脾臟 CD4+絕對值略高于對照組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（F=2.92，P=0.12；F=3.73，P 7d 時，高氧組脾臟淋巴細(xì)胞絕對值明顯高于對照組，差異有顯著統(tǒng)計=10.91，P<0.01）。實驗 14d 至 21d 時高氧組脾臟 CD4+T 淋巴細(xì)胞總數(shù)稍，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（F=3.84，P=0.07；F=1.08，P=0.32）。不同時較發(fā)現(xiàn)，對照組大鼠脾臟淋巴細(xì)胞絕對數(shù)在 14d 時升高達(dá)峰值，與 1d 時無統(tǒng)計學(xué)意義（F=0.75，P=0.4）。21d 時，對照組脾臟淋巴細(xì)胞絕對數(shù)稍低但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=1.2，P=0.29)。而高氧組脾淋巴細(xì)胞絕對數(shù)早期增高達(dá)到峰值，與 1d 時相比，差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(F=18.85，P<0.01組淋巴細(xì)胞絕對數(shù)開始迅速下降，至 21d 時脾臟淋巴細(xì)胞絕對數(shù)明顯低于值，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=6.51，P<0.05)。如圖 19 所示。

7d 57.28±1.98 61.17±1.5012.58±1.11 13.07±0.5114d 54.65±2.48 53.43±1.47 12.42±0.78 11.77±0.6721d 53.42±2.10 51.85±1.74 12.20±0.98 10.78±0.42D注：與同類別對照組相比，AP<0.01, F=13.39,BP<0.01, F=14.73,CP<0.05, F=8.46DP<0.01, F=10.44分析兩組大鼠脾臟CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞百分比變化發(fā)現(xiàn)，高氧暴露對CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞比率的影響隨時間的延長而呈現(xiàn)先促進(jìn)而后抑制的不同的表現(xiàn)。實驗結(jié)果顯示：在CD4+淋巴細(xì)胞百分比方面，實驗4d時高氧組CD4+淋巴細(xì)胞百分比迅速升高，，至7d時達(dá)到高峰，且明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=13.39，P<0.01）；實驗14d時，高氧組CD4+淋巴細(xì)胞百分比開始逐漸降低，至21d時降低至最低點，并稍低于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（F=1.36，P=0.27）。在CD8+淋巴細(xì)胞百分比方面，實驗4d時，高氧組脾臟中CD8+百分比已有明顯升高，且明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=8.46，P<0.05）；實驗7d時，高氧組CD8+百分比開始下降，至21d時，高氧組CD8+百分比進(jìn)一步下降，且明顯低于對照組，統(tǒng)計學(xué)分析差異有顯著性意義（F=10.44，P<0.01）。如圖20所示。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R722.1

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