【摘要】：原發(fā)性腎病綜合征(PNS)是兒童時(shí)期的常見病，其主要的病理類型為微小病變型腎病(MCNS)，約占80％左右。雖然絕大多數(shù)患兒對(duì)腎上腺糖皮質(zhì)激素的治療敏感，但是部分患兒容易出現(xiàn)頻繁復(fù)發(fā)，還有少數(shù)患兒對(duì)激素耐藥；這部分患兒將面臨長(zhǎng)期應(yīng)用激素所帶來的一系列副作用，從而影響患兒的生活和學(xué)習(xí)，并有可能發(fā)生腎功能不全。因此，對(duì)于兒童PNS，特別是MCNS的發(fā)病、復(fù)發(fā)和耐藥機(jī)制的研究，一直是國內(nèi)外兒科腎臟病工作者廣泛關(guān)注的研究重點(diǎn)。 大量蛋白尿是腎病綜合征(NS)的主要特點(diǎn)，主要是由于腎小球?yàn)V過膜對(duì)血漿蛋白的通透性增高所致。腎小球?yàn)V過膜，自內(nèi)而外由三部分組成，即帶窗孔的血管內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球基底膜(GBM)以及足細(xì)胞。近年來，越來越多的關(guān)于“足細(xì)胞足突和裂孔隔膜(SD)”分子組成的研究證實(shí)這些結(jié)構(gòu)在維持選擇通透性方面起更重要的作用。MCNS的特征性病理改變表現(xiàn)為電鏡下足細(xì)胞足突的廣泛融合。 本研究將以尋找MCNS的發(fā)病、復(fù)發(fā)、耐藥相關(guān)因素為出發(fā)點(diǎn)，以足細(xì)胞為線索，以前期微小病變腎病腎臟基因表達(dá)譜的研究為基礎(chǔ)；檢測(cè)了nephrin、podocin、FGF-2和Angpt13在兒童MCNS中的表達(dá)；從裂孔隔膜相關(guān)分子、足細(xì)胞損傷等不同角度，分別探討它們?cè)诘鞍啄虻陌l(fā)生，腎病的復(fù)發(fā)等病理過程中的可能作用。 第一部分nephrin和podocin mRNA在兒童微小病變腎病中的表達(dá) 目的 nephrin是一種細(xì)胞黏附蛋白，其缺乏導(dǎo)致芬蘭型先天性腎病綜合征；podocin是一種整合膜蛋白，其基因突變涉及常染色體隱性遺傳的激素耐藥型腎病綜合征，兩者均表達(dá)于裂孔隔膜。檢測(cè)nephrin和podocin mRNA在兒童微小病變腎病中的表達(dá)，探討它們?cè)诘鞍啄虬l(fā)生機(jī)制中的作用。 方法(1)根據(jù)臨床和腎臟病理檢查將研究對(duì)象分為三組，即微小病變組17例、非微小病變組7例和單純性血尿組9例。前兩組為原發(fā)性腎病綜合征組，按激素效應(yīng)和復(fù)發(fā)情況分為激素敏感組和激素耐藥組，以及頻復(fù)發(fā)組和非頻復(fù)發(fā)組。原發(fā)性腎病綜合征組在電鏡下均顯示足細(xì)胞足突不同程度的融合，按足突融合程度分為足突廣泛融合組18例和足突部分融合組6例。單純性血尿組經(jīng)腎活檢證實(shí) 龍才診扒稼穿夸礴龍鉀摘央分濟(jì)必班牙 為薄基底膜腎病5例，輕微病變4例，電鏡下未顯示足細(xì)胞足突的改變。(2)將 所有研究對(duì)象的腎組織標(biāo)本抽提RNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PcR，檢測(cè)nephrin和 podocin的mRNA表達(dá)水平;測(cè)量了8例微小病變腎病及4例薄基底膜腎病患兒 的足突寬度。(3)將所得數(shù)據(jù)與各項(xiàng)臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，運(yùn)用SPSS10.O軟 件行t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)和相關(guān)分析。 結(jié)果(l)nephrin和podoein mRNA的表達(dá):24例原發(fā)性腎病綜合征患兒的 neP而n和podoein mRNA表達(dá)量明顯低于單純性血尿組(P=0.021，P=0.003)， 其中以17例MCNS患兒的基因表達(dá)量下降為主(介0.031，P=0.oo2)。所有病 例中，nephrin與podocin mRNA之間的表達(dá)水平變化呈正相關(guān)(;=0.550，尸= 0.001)。(2)與蛋白尿的關(guān)系:nePhrin mR，JA的表達(dá)量與24小時(shí)尿蛋白量呈負(fù) 相關(guān)(r二一0.626，P= 0.001);podocinm和叮A的表達(dá)量與24小時(shí)尿蛋白量無明 顯相關(guān)性。③與足突融合的關(guān)系:足突廣泛融合組的nep城n mRNA顯著低于 足突部分融合組(P=O.001)。nephrin mRNA表達(dá)量與足突寬度(FPw)呈負(fù)相 關(guān)(r=一0.824，，p=0.001);podoeinm胭A表達(dá)量與FPw無明顯相關(guān)性。FPw 與24小時(shí)尿蛋白量呈正相關(guān)(;二一0.874，P=0.000)。(4)與激素效應(yīng)和復(fù)發(fā)的 關(guān)系:nephrin和podocin mRNA在激素敏感組和激素耐藥組間，以及在頻復(fù)發(fā) 組和非頻復(fù)發(fā)組間無明顯差異。 小結(jié)MCNS組中neP如n和pedocin mRNA表達(dá)量明顯減少，并與蛋白尿增多、 足突寬度增加呈負(fù)相關(guān)，提示nep而n mRNA減少可能使足突融合、足突增寬， 最終導(dǎo)致大量蛋白尿。Podocin mRNA的表達(dá)隨nephrin mRNA的減少而減少。 未發(fā)現(xiàn)這兩種裂孔隔膜相關(guān)分子不同程度的表達(dá)與原發(fā)性腎病綜合征患兒的激 素耐藥和激素敏感患兒的頻復(fù)發(fā)有關(guān)。 第二部分FGF--2在兒童微小病變腎病中的意義 目的FGF一2是足細(xì)胞損傷存在和持續(xù)的標(biāo)志。觀察FGF一2在微小病變腎病患兒 的腎組織、血和尿中的表達(dá)情況;探討FGI了一2在MCNS中的作用。 方法(1)收集50例微小病變型腎病患兒的臨床資料，按激素效應(yīng)分為激素敏感 組和激素耐藥組，前者按復(fù)發(fā)情況分為頻復(fù)，發(fā)組和非頻復(fù)發(fā)組。(2)用免疫組化 法(免疫酶法，ABC法)檢測(cè)腎組織中的FGF一2沉積，以IMS彩色圖像分析系 統(tǒng)量化免疫組化的結(jié)果。同時(shí)檢測(cè)加例原發(fā)性腎病綜合征患兒不同時(shí)點(diǎn)(腎病 綜合征發(fā)病時(shí)、足量激素治療8周內(nèi)緩解或未緩解時(shí)和復(fù)發(fā)時(shí))的血、尿FGF一2 濃度，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EUSA)檢測(cè)血、尿中的FGF一2含量，觀察血、尿 FGF一2的動(dòng)態(tài)變化。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SPSSro.0軟件，分別進(jìn)行卡方檢驗(yàn)、t 檢驗(yàn)和相關(guān)分析。 結(jié)果(1) FGF一2的分布:在MCNS患兒的腎組織中，代表FGF一2的棕褐色陽性 顆粒主要分布在腎小球足細(xì)胞(沿毛細(xì)血管撐)和腎小管上皮細(xì)胞的胞漿中，且 有不同程度的表達(dá)。(2)腎小球FGF一2的表達(dá):頻復(fù)發(fā)組的腎小球免疫組化陽性 指數(shù)(positive index，pl值，代表FGF一2的表達(dá)量)明顯低于非頻復(fù)發(fā)組的腎小 球PI值(P0.0
【圖文】：

o，5pg隨機(jī)引物和0.5p90應(yīng)5分鐘，置于冰上，加液spl1pl(200旦旦絲旦1.25pl0.5pl(20旦旦絲旦2.25pl℃10分鐘，37℃60分鐘，混勻并分裝，于一20℃保存。式反應(yīng)(real一timeFQ一PcR)外文獻(xiàn)資料并采用計(jì)算機(jī)輔料法進(jìn)行檢測(cè)，其上、下游

三、足細(xì)胞足突的融合與nePrhin和扭記ocinmRNA的表達(dá)(一)nephrin和pdocinmRNA在不同程度的足突融合中的表達(dá)情況資深的腎臟病理學(xué)者在單盲的前提下，根據(jù)電鏡檢查時(shí)足突的形態(tài)(見圖1一6)以及足突融合的范圍，將PNS患兒分為足突廣泛融合組18例和足突部分融合組6例(包括足突少量融合)。在足突廣泛融合組與足突部分融合組間，nephrinmRNA的表達(dá)有差異，前者的表達(dá)顯著低于后者，提示nephrinmRNA表達(dá)越少則足突融合越嚴(yán)重。然而，podocinmRNA的表達(dá)在兩組之間無明顯差別，見表1一6。表1一6.nephrin和podocinmRNA與足突融合間的關(guān)系對(duì)照組(9)足突部分融合(6)足突廣泛融合(18)nep麗npodoein4.55士0.892.95士0.914.65士0.74$2.21士0.943.45士0.621.66士0.88p成0.oolvs對(duì)照組，$尸毛o.oolvs足突廣泛融合圖1一6.(A)薄基底膜腎病，足細(xì)胞足突如“指狀”垂直排列于GBM上
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R726.9

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張雪榮;腎敷靈外敷配合雷公藤多甙治療難治性腎病大鼠腎損害機(jī)理的研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2633217