【摘要】： 背景和目的 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是全世界嬰幼兒下呼吸道感染首位病毒病原體,人群普遍易感,早產兒、骨髓移植病人、先天性心臟病以及免疫功能不全患者等高危人群常發(fā)生嚴重感染甚至死亡。RSV感染主要病變累及毛細支氣管,亦可累及支氣管和肺泡而致RSV肺炎,臨床表現為發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、喘憋等,RSV所致肺炎臨床表現較危重,病死率高,故受到極大的關注。長期以來,臨床上尚無抗RSV藥物和安全有效的RSV疫苗問世。 “柴葛口服液”是重慶醫(yī)科大學兒童醫(yī)院名老中醫(yī)依據“小柴胡湯”合“銀翹散”化裁而成,由柴胡、葛根、連翹等天然藥物組成。臨床上以湯劑應用30余年,證明對病毒、細菌所致的上感、腮腺炎、高熱等癥有確切療效。針對小兒服藥特點,利用現代制劑工藝,將其改為口感好、質量穩(wěn)定、療效確切的口服液用于兒科臨床。本研究通過建立體外RSV感染模型,研究柴葛口服液在體外細胞水平上的抗RSV療效;在體外抗病毒有效的基礎上,建立正常小鼠RSV感染模型,研究柴葛口服液對正常小鼠感染RSV的保護作用。體外和體內均用廣譜抗病毒藥物利巴韋林做對照藥物,闡明柴葛口服液抗RSV感染的療效及安全性。 方法 體外實驗用MTT法測定柴葛口服液和利巴韋林對正常Hep-2細胞毒性。設計柴葛口服液和利巴韋林抗RSV感染正常Hep-2細胞,預防RSV感染正常Hep-2細胞和直接滅活RSV三個實驗,分別用MTT法測定柴葛口服液和利巴韋林的病毒抑制率。 體內實驗用RSV滴鼻感染BALB/C小鼠,各治療組在感染后24h、48h、72h、96h、120h和144h分別給予不同劑量柴葛口服液和利巴韋林灌胃治療,未經過任何處理的小鼠為空白對照,感染后不給予治療的小鼠為感染對照。分別在感染后72h和144h取各空白對照組、感染對照組和治療組小鼠的肺組織,稱肺組織重量,計算肺指數;并用半數組織感染量(TCID50)法檢測感染對照組和各治療組的肺組織病毒滴度;取各組小鼠肺組織作病理切片,常規(guī)染色[蘇木素-伊紅(HE)]后光學顯微鏡下觀察各組肺組織病理改變。 結果 體外實驗中柴葛口服液的半數毒性濃度(TC50)是143.73μg/ml,半數有效濃度(EC50)是1.01μg/ml,治療指數(TI)是142.97;利巴韋林TC50是248.78μg/ml,EC50是5.86μg/ml,TI是43.12,柴葛口服液TI是利巴韋林的3.37倍。柴葛口服液和利巴韋林對RSV的抑制作用存在明顯的劑量效應關系,而且呈現明顯的直線正相關關系。柴葛口服液在相對較小的劑量下對RSV A2標準株就有明顯的抑制作用,其療效較利巴韋林好。 體內實驗研究滴鼻感染RSV后72h和144h各治療組肺指數、病毒對照組肺指數和陰性對照組肺指數比較結果有統(tǒng)計學差異,柴葛口服液各組與利巴韋林組結果比較有統(tǒng)計學差異。感染RSV后72h和144h柴葛口服液組肺組織病毒滴度和利巴韋林組肺組織病毒滴度治均較感染對照組明顯降低,感染后72h柴葛口服液大、中劑量組和利巴韋林組結果兩兩比較有統(tǒng)計學差異,小劑量組與利巴韋林組結果無統(tǒng)計學差異;感染后144h各治療組和感染對照組兩兩比較結果有統(tǒng)計學差異,柴葛口服液各組和利巴韋林組結果比較有統(tǒng)計學差異,且在一定范圍內隨著柴葛口服液劑量的增大抗病毒效應增強。感染后72h小劑量柴葛口服液與利巴韋林療效相當,感染后144h小劑量柴葛口服液組和利巴韋林組間兩兩比較有統(tǒng)計學差異。RSV感染后72h感染組肺組織病理改變明顯,肺組織大量炎癥細胞浸潤,以淋巴細胞為主,主要分布在小氣道和血管周圍間質,也有單核細胞和中性粒細胞,肺泡上皮細胞明顯充血、腫脹,甚至壞死、脫落。肺泡隔不同程度增寬,部分斷裂,大量紅細胞露出,肺泡結構破壞,血管炎性滲出。柴葛口服液組肺組織病理改變明顯改善,利巴韋林組肺組織病理改變略有改善,陰性對照組肺組織細支氣管和肺泡結構清晰,無炎癥細胞浸潤。RSV感染后144h感染組肺組織可見炎癥細胞浸潤,上皮細胞輕度腫脹,部分肺泡隔擴張。柴葛口服液組肺組織肺泡結構清晰,少許炎癥細胞浸潤,利巴韋林組肺組織略有炎癥細胞浸潤,部分肺泡隔擴張。 結論 1.柴葛口服液對正常Hep-2細胞的毒性遠遠小于利巴韋林的毒性,安全性更高。 2.柴葛口服液和利巴韋林對RSV A2標準株感染正常Hep-2細胞有明顯抑制作用,主要表現在抑制RSV在細胞內的復制作用,柴葛口服液對RSV A2標準株感染Hep-2細胞的抑制更明顯。 3.柴葛口服液對RSV A2標準株吸附和穿透Hep-2細胞膜有輕微的抑制作用,利巴韋林無此作用。 4.柴葛口服液和利巴韋林均能降低RSV A亞型標準株A2株感染小鼠肺組織病毒滴度,對肺組織病理改變也有改善作用。柴葛口服液抗RSV和肺組織病理的改善作用優(yōu)于利巴韋林。 5.柴葛口服液是安全、有效的抗RSV A亞型標準株A2中藥制劑。
【圖文】：

圖 1-2 RSV A 亞型 A2感染 Hep-2 細胞出現的細胞病變A.正常 Hep-2 細胞對照（×100） B.RSV A 亞型 A2 標準株感染細胞后細胞出現融合，圓縮，拉絲等現象（×100）

圖 1-2 RSV A 亞型 A2感染 Hep-2 細胞出現的細胞病變A.正常 Hep-2 細胞對照（×100） B.RSV A 亞型 A2 標準株感染細胞后細胞出現圓縮，拉絲等現象（×100）
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R725.6

【參考文獻】

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1 于樂成,顧長海,王升啟,毛青,陳忠斌,王宇明;HCV脫氧核酶在表達熒光素酶HepG2細胞中的活性[J];第三軍醫(yī)大學學報;2003年10期

2 王剛,谷容,劉彬,吳季儉,陳運銘;柴葛口服液制劑工藝研究[J];兒科藥學雜志;2003年06期

3 陳建江,陳彩鳳,楊華英;α1b-干擾素霧化吸入治療呼吸道合胞病毒性肺炎50例[J];廣東藥學院學報;2004年05期

4 龍全江;八十年代以來柴胡及其方劑藥理研究進展[J];甘肅中醫(yī)學院學報;1992年02期

5 勵時杰;小柴胡沖劑佐治小兒上呼吸道感染的療效分析[J];河北醫(yī)藥;2003年01期

6 劉萍;蔣明波;;柴胡注射液在細胞培養(yǎng)中抑制呼吸道合胞病毒作用[J];河北醫(yī)藥;2006年04期

7 王剛,谷容,梁荊芬,劉彬,吳季儉;柴葛口服液的抗菌作用[J];華西藥學雜志;2003年03期

8 劉密鳳,李洪源,劉電力,常曼麗,佟奎明,周昆;抗病毒Ⅰ號中藥有效部位體外抗呼吸道合胞病毒作用[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;2001年05期

9 孟秀芳，吳季儉，張獻菊;柴葛退熱靈治療小兒高熱140例報告[J];河北中醫(yī)學院學報;1996年02期

10 張?zhí)烀�，，胡珍姣，歐黎虹，方紅;三種中草藥抗病毒各的實驗研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;1994年11期

本文編號：2629769