【摘要】： 背景和目的 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是全世界嬰幼兒下呼吸道感染首位病毒病原體,人群普遍易感,早產(chǎn)兒、骨髓移植病人、先天性心臟病以及免疫功能不全患者等高危人群常發(fā)生嚴(yán)重感染甚至死亡。RSV感染主要病變累及毛細(xì)支氣管,亦可累及支氣管和肺泡而致RSV肺炎,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、喘憋等,RSV所致肺炎臨床表現(xiàn)較危重,病死率高,故受到極大的關(guān)注。長(zhǎng)期以來(lái),臨床上尚無(wú)抗RSV藥物和安全有效的RSV疫苗問(wèn)世。 “柴葛口服液”是重慶醫(yī)科大學(xué)兒童醫(yī)院名老中醫(yī)依據(jù)“小柴胡湯”合“銀翹散”化裁而成,由柴胡、葛根、連翹等天然藥物組成。臨床上以湯劑應(yīng)用30余年,證明對(duì)病毒、細(xì)菌所致的上感、腮腺炎、高熱等癥有確切療效。針對(duì)小兒服藥特點(diǎn),利用現(xiàn)代制劑工藝,將其改為口感好、質(zhì)量穩(wěn)定、療效確切的口服液用于兒科臨床。本研究通過(guò)建立體外RSV感染模型,研究柴葛口服液在體外細(xì)胞水平上的抗RSV療效;在體外抗病毒有效的基礎(chǔ)上,建立正常小鼠RSV感染模型,研究柴葛口服液對(duì)正常小鼠感染RSV的保護(hù)作用。體外和體內(nèi)均用廣譜抗病毒藥物利巴韋林做對(duì)照藥物,闡明柴葛口服液抗RSV感染的療效及安全性。 方法 體外實(shí)驗(yàn)用MTT法測(cè)定柴葛口服液和利巴韋林對(duì)正常Hep-2細(xì)胞毒性。設(shè)計(jì)柴葛口服液和利巴韋林抗RSV感染正常Hep-2細(xì)胞,預(yù)防RSV感染正常Hep-2細(xì)胞和直接滅活RSV三個(gè)實(shí)驗(yàn),分別用MTT法測(cè)定柴葛口服液和利巴韋林的病毒抑制率。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)用RSV滴鼻感染BALB/C小鼠,各治療組在感染后24h、48h、72h、96h、120h和144h分別給予不同劑量柴葛口服液和利巴韋林灌胃治療,未經(jīng)過(guò)任何處理的小鼠為空白對(duì)照,感染后不給予治療的小鼠為感染對(duì)照。分別在感染后72h和144h取各空白對(duì)照組、感染對(duì)照組和治療組小鼠的肺組織,稱肺組織重量,計(jì)算肺指數(shù);并用半數(shù)組織感染量(TCID50)法檢測(cè)感染對(duì)照組和各治療組的肺組織病毒滴度;取各組小鼠肺組織作病理切片,常規(guī)染色[蘇木素-伊紅(HE)]后光學(xué)顯微鏡下觀察各組肺組織病理改變。 結(jié)果 體外實(shí)驗(yàn)中柴葛口服液的半數(shù)毒性濃度(TC50)是143.73μg/ml,半數(shù)有效濃度(EC50)是1.01μg/ml,治療指數(shù)(TI)是142.97;利巴韋林TC50是248.78μg/ml,EC50是5.86μg/ml,TI是43.12,柴葛口服液TI是利巴韋林的3.37倍。柴葛口服液和利巴韋林對(duì)RSV的抑制作用存在明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系,而且呈現(xiàn)明顯的直線正相關(guān)關(guān)系。柴葛口服液在相對(duì)較小的劑量下對(duì)RSV A2標(biāo)準(zhǔn)株就有明顯的抑制作用,其療效較利巴韋林好。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究滴鼻感染RSV后72h和144h各治療組肺指數(shù)、病毒對(duì)照組肺指數(shù)和陰性對(duì)照組肺指數(shù)比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,柴葛口服液各組與利巴韋林組結(jié)果比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。感染RSV后72h和144h柴葛口服液組肺組織病毒滴度和利巴韋林組肺組織病毒滴度治均較感染對(duì)照組明顯降低,感染后72h柴葛口服液大、中劑量組和利巴韋林組結(jié)果兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,小劑量組與利巴韋林組結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;感染后144h各治療組和感染對(duì)照組兩兩比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,柴葛口服液各組和利巴韋林組結(jié)果比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且在一定范圍內(nèi)隨著柴葛口服液劑量的增大抗病毒效應(yīng)增強(qiáng)。感染后72h小劑量柴葛口服液與利巴韋林療效相當(dāng),感染后144h小劑量柴葛口服液組和利巴韋林組間兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。RSV感染后72h感染組肺組織病理改變明顯,肺組織大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),以淋巴細(xì)胞為主,主要分布在小氣道和血管周圍間質(zhì),也有單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞,肺泡上皮細(xì)胞明顯充血、腫脹,甚至壞死、脫落。肺泡隔不同程度增寬,部分?jǐn)嗔?大量紅細(xì)胞露出,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,血管炎性滲出。柴葛口服液組肺組織病理改變明顯改善,利巴韋林組肺組織病理改變略有改善,陰性對(duì)照組肺組織細(xì)支氣管和肺泡結(jié)構(gòu)清晰,無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。RSV感染后144h感染組肺組織可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),上皮細(xì)胞輕度腫脹,部分肺泡隔擴(kuò)張。柴葛口服液組肺組織肺泡結(jié)構(gòu)清晰,少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),利巴韋林組肺組織略有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),部分肺泡隔擴(kuò)張。 結(jié)論 1.柴葛口服液對(duì)正常Hep-2細(xì)胞的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于利巴韋林的毒性,安全性更高。 2.柴葛口服液和利巴韋林對(duì)RSV A2標(biāo)準(zhǔn)株感染正常Hep-2細(xì)胞有明顯抑制作用,主要表現(xiàn)在抑制RSV在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制作用,柴葛口服液對(duì)RSV A2標(biāo)準(zhǔn)株感染Hep-2細(xì)胞的抑制更明顯。 3.柴葛口服液對(duì)RSV A2標(biāo)準(zhǔn)株吸附和穿透Hep-2細(xì)胞膜有輕微的抑制作用,利巴韋林無(wú)此作用。 4.柴葛口服液和利巴韋林均能降低RSV A亞型標(biāo)準(zhǔn)株A2株感染小鼠肺組織病毒滴度,對(duì)肺組織病理改變也有改善作用。柴葛口服液抗RSV和肺組織病理的改善作用優(yōu)于利巴韋林。 5.柴葛口服液是安全、有效的抗RSV A亞型標(biāo)準(zhǔn)株A2中藥制劑。
【圖文】：

圖 1-2 RSV A 亞型 A2感染 Hep-2 細(xì)胞出現(xiàn)的細(xì)胞病變A.正常 Hep-2 細(xì)胞對(duì)照（×100） B.RSV A 亞型 A2 標(biāo)準(zhǔn)株感染細(xì)胞后細(xì)胞出現(xiàn)融合，圓縮，拉絲等現(xiàn)象（×100）

圖 1-2 RSV A 亞型 A2感染 Hep-2 細(xì)胞出現(xiàn)的細(xì)胞病變A.正常 Hep-2 細(xì)胞對(duì)照（×100） B.RSV A 亞型 A2 標(biāo)準(zhǔn)株感染細(xì)胞后細(xì)胞出現(xiàn)圓縮，拉絲等現(xiàn)象（×100）
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R725.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2629769