【摘要】：研究背景新生兒膿毒癥,特別是早產(chǎn)兒膿毒癥是新生兒死亡的主要原因,也是全球公共衛(wèi)生面臨的主要挑戰(zhàn)之一。免疫調(diào)節(jié)在膿毒癥發(fā)病過(guò)程中的作用越來(lái)越受到重視。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)了一群具有調(diào)節(jié)作用的B淋巴細(xì)胞亞群——調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞(Breg細(xì)胞),其在自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、器官移植、感染以及腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用,但在新生兒膿毒癥中的作用并不清楚。因此,深入研究新生兒膿毒癥中Breg細(xì)胞的特征和調(diào)節(jié)機(jī)制,有望對(duì)降低新生兒膿毒癥的發(fā)病率和死亡率提供更為有效的策略。材料與方法采集膿毒癥患兒(40例)發(fā)病時(shí)、發(fā)病后7天、14天和21天及對(duì)照組(40例)新生兒外周靜脈血,分別用流式細(xì)胞術(shù)和ELISA對(duì)免疫細(xì)胞及其亞群以及血漿相關(guān)細(xì)胞因子檢測(cè);同時(shí)應(yīng)用新生兒PELOD-2評(píng)分對(duì)膿毒癥臨床嚴(yán)重程度評(píng)估并分析其與免疫細(xì)胞及其亞群的相關(guān)性。應(yīng)用RNA-Seq對(duì)外周血mRNA測(cè)序,并經(jīng)GO和KEGG富集通路分析,初步對(duì)CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞增殖分化機(jī)制進(jìn)行探索。最后,通過(guò)分離臍帶血單個(gè)核細(xì)胞,在體外進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)對(duì)CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞增殖分化所涉及的機(jī)制進(jìn)一步探討。結(jié)果1.外周血B細(xì)胞特別是其亞群CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi) Breg細(xì)胞,在膿毒癥發(fā)病后7天顯著升高并與臨床嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān);同時(shí)還發(fā)現(xiàn)發(fā)病后7天血漿及CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞胞內(nèi)IL-10的水平也明顯升高。2.在轉(zhuǎn)錄水平,發(fā)現(xiàn)在不同發(fā)病時(shí)間點(diǎn)膿毒癥與對(duì)照組患兒均存在顯著差異,同時(shí)膿毒癥患兒不同時(shí)間點(diǎn)之間也存在顯著差異,但是對(duì)照組不同時(shí)間點(diǎn)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)GO及KEGG富集通路分析,發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫應(yīng)答和mTOR代謝通路密切相關(guān)。3.與對(duì)照組相比,膿毒癥患兒外周血BAFF的水平在發(fā)病時(shí)和發(fā)病后7天顯著升高;在轉(zhuǎn)錄水平外周血BAFF-R有升高趨勢(shì)。有意義的是,臍帶血單個(gè)核細(xì)胞和純化的B細(xì)胞經(jīng)LPS聯(lián)和CpG刺激后,BAFF和其受體BAFF-R均顯著升高。4.臍帶血單個(gè)核細(xì)胞中純化的B細(xì)胞經(jīng)LPS聯(lián)和CpG刺激后,能顯著誘導(dǎo)其向CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞轉(zhuǎn)化;經(jīng)BAFF聯(lián)合LPS和CpG刺激后,能顯著提高后二者誘導(dǎo)B細(xì)胞向CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率。5.經(jīng)BAFF聯(lián)合LPS和CpG刺激后,提高B細(xì)胞向CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率與其激活PI3K-mTOR通路,提高p70S6K和p4E-BP1的水平有關(guān)。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥患兒外周血CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞在發(fā)病后7天顯著升高,其升高同時(shí)伴隨胞內(nèi)產(chǎn)生IL-10的能力明顯增強(qiáng)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn),發(fā)病后7天膿毒癥患兒血漿IL-10的水平也顯著升高。有意義的是,本研究還發(fā)現(xiàn)升高的CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞與病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。轉(zhuǎn)錄及蛋白水平發(fā)現(xiàn),外周血BAFF水平的升高,通過(guò)激活PI3K-mTOR信號(hào)通路p70S6K和4E-BP1蛋白與CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi) Breg細(xì)胞的增殖分化有關(guān)。因此,本研究不但揭示了膿毒癥患兒發(fā)病過(guò)程中CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞的變化規(guī)律及其增殖分化機(jī)制,還為新生兒膿毒癥病情監(jiān)測(cè)及免疫治療提供了新思路。
【圖文】：

邐第一章調(diào)節(jié)性Ｂ細(xì)胞在新生兒膿毒癥發(fā)病中的變化特征邐逡逑１．５邋ｍｌ的ＥＰ管依次編號(hào)（Ｓ０－Ｓ６），并加入樣本稀釋液２５０邋４。從Ｓ７的標(biāo)準(zhǔn)品管逡逑中吸�。玻担板澹蓿睒�(biāo)準(zhǔn)品到Ｓ６中；輕輕吹打并混勻后，再?gòu)模樱吨形。玻担埃蓿钡藉义希樱抵小Ｈ缓笠源祟?lèi)推，完成標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋。Ｓ０僅加入樣本稀釋液作為空白逡逑對(duì)照組。即可分別獲得ＩＬ－１０邋（表１－３）不同稀釋倍數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品。在臨用前１５分逡逑鐘內(nèi)配制。逡逑

Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋Ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＩＬ－１０逡逑．６數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析逡逑米用Ｐｒｉｓｍ邋（ＧｒａｐｈＰａｄ邋Ｓｏｆｔｗａｒｅ邋Ｉｎｃ．）和ＳＰＳＳ邋２０．０對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)逡逑資料用例數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，采用Ｘ２檢驗(yàn)（或Ｆｉｓｈｅｒ精確概率法）分析；正態(tài)逡逑布的數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)采用ｔ檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資逡逑采用從（戶(hù)２５￣尸７５）描述，組間比較采用Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ邋Ｕ檢驗(yàn)。多組間比較采逡逑單因素方差分析或Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ檢驗(yàn)。與膿毒癥病情嚴(yán)重程度相關(guān)性分析采逡逑Ｓｐｅ＿ａｎ等級(jí)檢驗(yàn)。以Ｐ＜０．０５表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ｐ＜０．０１為差異有顯逡逑性意義。逡逑結(jié)果逡逑１臨床樣本資料的基本特征逡逑本研宄納入研宄對(duì)象的臨床資料見(jiàn)表１－４。膿毒癥組和對(duì)照組各４０例，其逡逑膿毒癥有３６例患兒存活為存活組，４例患兒死亡為死亡組。膿毒癥患兒死亡逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

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本文編號(hào)：2629679