發(fā)布時間：2020-04-10 21:44

【摘要】：目的:手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一種由腸道病毒(Enterovirus,EV)感染引起的傳染性疾病,5歲以下嬰幼兒為易感人群,近年來該疾病對中國大陸兒童健康造成了嚴(yán)重威脅。本研究旨在探究云南地區(qū)手足口病在住院患者中的病原譜構(gòu)成、臨床特點及其流行特點。方法:收集2010和2012-2016年云南省某醫(yī)院臨床診斷為手足口病的住院患兒的糞便樣品和臨床資料。首先對樣品進(jìn)行病毒核酸提取,然后利用半巢式逆轉(zhuǎn)錄PCR(Semi-nested reverse transcription,snRT-PCR)特異性擴(kuò)增 EV 部分 VP1 序列并測序,以確定EV血清型;用SPSS20.0對檢測結(jié)果和收集的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計與分析;對鑒定出的優(yōu)勢血清型,將其與國內(nèi)外分離株進(jìn)行核苷酸序列和氨基酸序列同源性分析,并用MEGA7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分析其進(jìn)化關(guān)系。此外,用人橫紋肌肉瘤細(xì)胞(Rhabdomyosarcoma cell,RD)、人肺腺癌細(xì)胞(Human lung cancer cell,A549)、人胚肺成纖維二倍體細(xì)胞(Human embryonic lung diploid fibroblasts cell,KMB17)等三種細(xì)胞進(jìn)行病毒分離并測序,通過MEGA7.0和Simplot 3.5.1分子進(jìn)化分析和重組分析,研究病毒的分子特征。結(jié)果:1.2010年共收集1280例手足口病住院患者樣本,包括男性患者799例,女性患者481例,其中1115例實驗室檢測結(jié)果為陽性,共鑒定出17種EV血清型,這些病毒均能引起重癥。結(jié)果顯示CA16(615/1115,55.1%)、EV71(392/1115,35.2%)、CA10(45/1115,4.0%)、CA4(23/1115,2.1%)是引起手足口病的主要病原體;CA16、EV71、CA10、CA4 分別屬于 C4a、B1b、G 和 C 亞型。2.2012-2016年共收集341例重癥病例樣本,包括191例男性和150例女性患者,其中283例實驗室檢測為陽性,共檢測出17種EV血清型,主要病原體分別為EV71(142/341,41.6%),CA16(64/341,18.8%)和 CA6(31/341,9%),這三種主要血清型與中國大陸地區(qū)目前流行的基因型一致。3.用細(xì)胞培養(yǎng)的方法成功分離出兩株echovirus 18(E18)病毒株,并獲得全基因組序列,分析顯示這兩株E18病毒株均為重組株。結(jié)論:云南地區(qū)手足口病在住院患者中的臨床特點和流行特點與中國大陸其他南方地區(qū)基本相似;EV71和CA16仍是引起手足口病的主要病原體,但其他腸道病毒如CA6、CA10、CA4等血清型也需要進(jìn)一步加強(qiáng)監(jiān)測。
【圖文】：

圖１腸道病毒結(jié)構(gòu)圖：（Ａ）腸道病毒顆粒；（Ｂ）腸道病毒基因組［２５］逡逑Ｆｉｇ邋１邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＥＶｓ：（Ａ）Ｖｉｒａｌ邋ｐａｒｔｉｃｌｅ邋ｏｆ邋ＥＶｓ；邋（Ｂ）邋Ｇｅｎｏｍｅ邋ｏｆ邋ＥＶｓ逡逑作用下切割為ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４，這４個結(jié)構(gòu)蛋白自發(fā)組裝成原體，然后以五逡逑聚體的形式結(jié)合在一起，而十五個五聚體共同構(gòu)成了腸道病毒的衣殼，ＶＰ１、ＶＰ２和逡逑ＶＰ３位于衣殼表面暴露在環(huán)境中，因此很容易被宿主免疫系統(tǒng)識別；ＶＰ４則位于衣逡逑殼內(nèi)部。由于衣殼蛋白ＶＰ１含有腸道病毒的主要抗原中和位點和抗原決定簇，可以逡逑用作評估疫苗效力的生物標(biāo)志，，并且ＶＰ１序列具有基因多態(tài)性和型特異性，與腸道逡逑病毒的血清型具有高度的一致性，是腸道病毒基因分型和遺傳進(jìn)化分析的重要位逡逑點，目前常用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ邋ｃｈａｉｎ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）擴(kuò)增腸道病毒ＶＰ１逡逑序列并測序，將測序結(jié)果經(jīng)ＢＬＡＳＴ與ＧｅｎｅＢａｎｋ己有序列進(jìn)行比對來確定其血清型，逡逑一般認(rèn)為同源性大于７５％即為相同血清型［２６］。逡逑３．國內(nèi)外研究進(jìn)展逡逑

與ＥＶ７１神經(jīng)發(fā)生的宿主因子，是一種潛在的用于限制神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥的藥物靶點逡逑［６３］逡逑0逡逑研究表明，有多種受體可以介導(dǎo)ＥＶ７１進(jìn)入宿主細(xì)胞，包括人清道夫受體（ｈｕｍａｎ逡逑ｓｃａｖｅｎｇｅｒ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ邋ｃｌａｓｓ邋Ｂ，ｍｅｍｂｅｒ邋２，邋ＳＣＡＲＢ２）、Ｐ邋選擇素糖蛋白配體邋ｌ（Ｐ＿Ｓｅｌｅｃｔｉｎ逡逑ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ邋ｌｉｇａｎｄ邋１，ＰＳＧＬ－１）、樹突細(xì)胞特異性捕獲非整合素的細(xì)胞間黏附逡逑分子（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ邋Ｃｅｌ邋１－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ邋ａｄｈｅｓｉｏｎ邋ｍｏｌｅｃｕｌｅ－３－Ｇｒａｂｂｉｎｇ逡逑Ｎｏｎ－ｉｎｔｅｇｒｉｎ，ＤＣ－ＳＩＧＮ）以及膜聯(lián)蛋白邋Ａ２（Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ａ２，Ａｎｘ２）等。ＳＣＡＲＢ２邋可參與逡逑內(nèi)吞作用、膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并且通常在內(nèi)膜和質(zhì)膜之間穿梭。當(dāng)ＳＣＡＲＢ２存在于細(xì)胞表面逡逑時，它是一種ＩＩＩ型雙跨膜蛋白，具有大的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和短的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。細(xì)胞逡逑表面上的人ＳＣＡＲＢ２與ＥＶ７１結(jié)合，然后ＥＶ７１被網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的途徑內(nèi)化［６４］。人類逡逑ＳＣＡＲＢ２在多種類型細(xì)胞中表達(dá)，包括ＣＮＳ中的神經(jīng)元，其可能參與ＥＶ７］對大腦的逡逑直接感染［６５］。細(xì)胞表面的人ＳＣＡＲＢ２與ＥＶ７１病毒結(jié)合，ＳＣＡＲＢ２－ＥＶ７１復(fù)合物被內(nèi)化，逡逑當(dāng)病毒－受體復(fù)合物到達(dá)內(nèi)含體或溶酶體時，ＳＣＡＲＢ２在酸性ｐＨ條件下會引發(fā)構(gòu)象變逡逑化，導(dǎo)致病毒包被，低ｐＨ值是ＥＶ７１脫衣的關(guān)鍵。在病毒衣殼中發(fā)生一系列結(jié)構(gòu)變逡逑化后，ＥＶ７１邋ＲＮＡ被釋放到細(xì)胞質(zhì)中［９］。病毒ＲＮＡ可以直接翻譯成一個大的多肽，然逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R725.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王榮華;李瓊芬;林燕;戚艷波;鄔志薇;郝林會;黃甜;;2008—2013年云南省手足口病流行特征和空間分布特點分析[J];疾病監(jiān)測;2014年11期

2 胡躍華;肖革新;郭瑩;于石成;馬家奇;;2008-2011年中國大陸手足口病流行特征分析[J];中華疾病控制雜志;2014年08期

3 牟建春;吳國勝;李芳;;2008年～2009年云南省紅河州手足口病網(wǎng)絡(luò)直報疫情分析[J];衛(wèi)生軟科學(xué);2011年04期

本文編號：2622743