【摘要】：棘球蚴病又稱包蟲病,是由棘球?qū)俳{蟲的幼蟲-棘球蚴寄生于人及其它動物的肝臟、肺臟等組織器官而引起的一種重要的人畜共患寄生蟲病。青海省是全國罕見的棘球蚴病的高發(fā)區(qū),流行區(qū)域主要分布于玉樹藏族自治州和果洛藏族自治州各縣。兩型棘球蚴病(CE/AE)混合流行,且流行程度高、疫情嚴(yán)重。為了摸清青海南部地區(qū)兒童棘球蚴病的流行狀況和流行特征、青海田鼠Em感染情況及其病原學(xué)特征、探索敏感性和特異性的早期診斷技術(shù),本研究對青海南部地區(qū)兒童棘球蚴病的感染狀況進(jìn)行了調(diào)查分析研究;對青海省果洛藏族自治州久治縣的青海田鼠進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,并進(jìn)行了Em青海田鼠株的分離、鑒定;利用分離、鑒定的青海田鼠株Em,表達(dá)和純化了EmAgB3和EmAgB3-GGGS-Em18兩個蛋白,并利用純化的這兩個蛋白分別進(jìn)行了ELISA和膠體金免疫試紙條檢測方法的探索;利用分離鑒定的Em青海田鼠株構(gòu)建了Em沙鼠感染模型,并對構(gòu)建的Em沙鼠感染模型進(jìn)行了肝臟、脾臟和血漿代謝組學(xué)研究。主要研究結(jié)論如下:(1)通過采用影像學(xué)和血清學(xué)診斷方法,對青海南部地區(qū)兒童棘球蚴病感染狀況進(jìn)行了調(diào)查分析研究,明確了該區(qū)域兒童棘球蚴病的流行分布情況和特征。這對患棘球蚴病兒童采取早期診斷和制定最佳治療方案,保障患病兒童盡早地正常生長發(fā)育具有重要的意義。同時,對于健康的兒童,也可以盡早地進(jìn)行預(yù)防、保健及調(diào)理。(2)通過對青海省果洛藏族自治州久治縣的青海田鼠進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,從捕獲的50只青海田鼠中分離、鑒定得到了11株Em,Em感染率為22%。通過對其進(jìn)行分子生物學(xué)分析,確定了Em青海田鼠分離株為亞洲型,且存在不同核苷酸位點的變異。該研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步確立了青海田鼠作為Em中間宿主在流行病學(xué)上的重要地位,這為在該地區(qū)通過控制青海田鼠的數(shù)量來降低人感染AE的風(fēng)險提供了一個重要的思路。(3)通過提取Em青海田鼠分離株的基因組DNA,綜合利用分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù),克隆、表達(dá)和純化了EmAgB3蛋白和EmAgB3-GGGS-Em18蛋白,獲得了高純度和高濃度的重組蛋白(EmAgB3蛋白的濃度為1.05 mg/mL,EmAgB3-GGGS-Em18蛋白濃度為0.5 mg/mL)。另外,通過利用3C酶酶切的方式,成功將重組EmAgB3蛋白的GST標(biāo)簽進(jìn)行了切除。進(jìn)行了純化和蛋白復(fù)性,使其最大程度地恢復(fù)了天然EmAgB3蛋白的空間結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性,為進(jìn)一步對其進(jìn)行更深入的結(jié)構(gòu)、功能和應(yīng)用研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。(4)通過對重組EmAgB3蛋白和重組EmAgB3-GGGS-Em18蛋白進(jìn)行ELISA和膠體金試紙條技術(shù)的包裝,分別建立了ELISA和膠體金免疫試紙條的診斷方法。經(jīng)特異性、敏感性和符合性試驗,均具有非常良好的臨床診斷應(yīng)用價值。(5)通過將分離鑒定的Em青海田鼠分離株進(jìn)行腹腔接種沙鼠的方式,成功構(gòu)建了Em沙鼠感染模型,感染率高達(dá)100%。這為將來進(jìn)行更深入的針對Em青海田鼠分離株的生物學(xué)研究奠定了種子基礎(chǔ)。(6)采集了Em沙鼠模型和正常沙鼠對照的肝臟、脾臟和血漿樣本,利用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜分析技術(shù),分別對采集的樣本進(jìn)行了非靶標(biāo)代謝組學(xué)研究,篩選獲得了數(shù)量眾多的差異代謝物。肝臟代謝組學(xué)分析顯示:在肝臟中檢測到10493個代謝物,從中篩選出1509個差異代謝物。其中309個代謝物較正常肝臟代謝物上調(diào),1200個代謝物下調(diào);脾臟代謝組學(xué)分析顯示:在脾臟中檢測到8679個代謝物,從中篩選出1111個差異代謝物。其中586個代謝物較正常脾臟代謝物上調(diào),525個代謝物下調(diào);血漿代謝組學(xué)分析顯示:在血漿中檢測到4085個代謝物,從中篩選出316個差異代謝物。其中200個代謝物較正常血漿代謝物上調(diào),116個代謝物下調(diào)。這些代謝組學(xué)的數(shù)據(jù),為將來開展針對特異性代謝物的研究、篩選藥物作用靶點和代謝通路提供了參考。
【圖文】：

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019 屆博士論文在歐洲，在本世紀(jì)前 15 年內(nèi)，Em 在終末宿主和中間宿主中的流行率顯著高。狐貍感染的地理分布比先前的報道要廣泛得多，城市狐貍可能參與了本病的播[39, 43, 58-61]。以前認(rèn)為不受 AE影響的歐洲國家也發(fā)現(xiàn)了人感染 AE 的病例，尤其波羅的海地區(qū)的感染情況則更令人擔(dān)憂。此外，在法國、瑞士、德國和奧地利這曾經(jīng)發(fā)生過 AE的地區(qū)， AE發(fā)病率較以前增加了一倍[39, 62-64]。

第二章 青南地區(qū)兒童棘球蚴病感染狀況的調(diào)查分析研究材料和方法1 調(diào)查區(qū)域本次調(diào)查主要選擇在棘球蚴病流行較為嚴(yán)重的青海南部地區(qū)進(jìn)行，，包括玉樹自治州和果洛藏族自治州（TAPs）這兩個州的 12 個縣。該地區(qū)與西藏的東、四川的西北部接壤（見圖 2-1）。該地區(qū)海拔在 3600 至 4500 米之間，總面積 265106 平方公里（玉樹：188794 平方公里，果洛：76312 平方公里）�？�?cè)丝?58.27 萬人，主要民族為藏族，占總?cè)丝诘?91.86~97%。藏傳佛教是該地區(qū)人們要信仰。文化、社會經(jīng)濟結(jié)構(gòu)、土地利用模式和人口密度是典型的藏區(qū)特征的。居民（主要是牧民）通常生活條件惡劣，主要收入來源是畜牧業(yè)。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R725.3


本文編號：2621607