【摘要】： 目的探討不同劑量頭孢克洛(Cefaclor)和雙歧桿菌(Bacillus bifidus,BB)對幼鼠腸道免疫系統(tǒng)發(fā)育和腸道菌群的影響。 方法實(shí)驗(yàn)選用80只SPF(specific pathogen free)級SD(Sprague-Dawlay)大鼠,7日齡,15～20克,隨機(jī)分成7組:A組(7日齡組),B組(150mg/kg/d頭孢克洛干預(yù)2周),C組(50mg/kg/d頭孢克洛干預(yù)2周),D組(500萬單位雙歧桿菌干預(yù)2周),E組(1500萬單位雙歧桿菌干預(yù)2周),F組(500萬單位雙歧桿菌2小時后100mg/kg/d頭孢克洛干預(yù)2周),G組(空白對照組),其中A組8只,余6組各12只,各組體重?zé)o顯著差異(P0.05)。A組在第一天處死,余6組在第21天隨機(jī)抽取8只處死,留取回盲部近端腸管組織及盲腸內(nèi)糞便。SABC免疫組化法(immunohistochemistry,IHC)檢測腸管組織CD4+、CD8+ T細(xì)胞含量;大便涂片革蘭氏染色檢測革蘭氏陽性桿菌(G+b)、革蘭陰性桿菌(G-b)、革蘭陽性球菌(G+c),革蘭陰性球菌(G-c)各菌群數(shù);16S rRNA熒光相對定量PCR法檢測糞便雙歧桿菌(bacillus bifidus,BB)、乳酸桿菌(lactobacillus,LB)、脆弱類桿菌(bacteroides fragilis,BF)、梭菌(clostridium botulinum,CL)4種細(xì)菌的相對含量。 結(jié)果1.CD4+、CD8+T細(xì)胞含量: 1.1 CD4+T細(xì)胞含量B、C、F組CD4+T細(xì)胞相應(yīng)灰度值[分別為(158.94±10.08)、(115.29±17.39)、(107.71±16.62)]顯著高于G組[(92.50±11.30)](P值分別0.01,0.01,0.05)。B、C、F三組兩兩比較,C組和F組均顯著低于B組(P值均0.01);C組與F組兩兩比較無差異(P值均0.05)。D、E組CD4+T細(xì)胞相應(yīng)灰度值[分別為(79.48±5.43)、(77.04±7.72)]較G組降低(P0.05),而D組與E組兩兩比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 1.2 CD8+T細(xì)胞含量B、C組CD8+T細(xì)胞相應(yīng)灰度值[分別為(107.91±8.85)、(103.78±10.30)]高于G組[(80.81±14.80)](P0.05),而D、E組CD8+T細(xì)胞相應(yīng)灰度值[分別為(59.28±5.81)、(58.95±7.81)]較G組降低(P0.05)。F組CD8+T細(xì)胞相應(yīng)灰度值[(101.95±11.67)]與G組比較無差異(P 0.05),但高于D、E組(P值均0.01)。B、C、F三組兩兩比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 2.腸道菌群檢測結(jié)果: 2.1桿菌總數(shù)、球菌總數(shù)及其比值B、C、F組桿菌總數(shù)[分別為(177.00±3.42)、(178.63±3.42)、(178.00±3.46)]顯著低于G、D、E組[分別為(196.75±1.36)、(196.88±1.25)、(196.88±0.99)] (P值均0.01)。B、C、F組球菌總數(shù)[分別為(23.00±3.42)、(21.38±3.42)、(22.13±3.52)]顯著高于G、D、E組[分別為(3.25±0.89)、(3.25±1.04)、(3.13±0.99)] (P值均0.01)。B、C、F組桿球菌比值[分別為(7.86±1.31)、(8.60±1.75)、(8.24±1.42)]顯著低于G、D、E組[分別為(64.42±17.27)、(66.56±22.41)、(68.58±21.19)] (P值均0.01)。B、C、F組桿菌總數(shù)、球菌總數(shù)及桿球菌比值,三組兩兩比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。G、D、E組桿菌總數(shù)、球菌總數(shù)及桿球菌比值,三組兩兩比較差異亦均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 2.2 G+桿菌占總菌群數(shù)比率B、C、F組G+桿菌占總菌群數(shù)比率[分別為(13.38±1.51)%、(24.06±3.89)%、(15.50±1.95)%]顯著低于G、D、E組[分別為(48.31±2.60)%、(46.56±2.03)%、(46.63±2.89)%] (P值均0.01)。其中B、C、F三組兩兩比較,B組和F組均顯著低于C組(P值均0.01);B組與F組比較無差異(P值均0.05)。而G、D、E三組兩兩比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 2.3 G+球菌占總菌群數(shù)比率B、C、F組G+球菌占總菌群數(shù)比率[分別為(10.50±1.60)%、(9.75±1.51)%、(10.06±1.72)%]顯著高于G、D、E組[分別為(1.25±0.27)%、(1.13±0.44)%、(1.19±0.46)%] (P值均0.01)。B、C、F三組兩兩比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。G、D、E三組兩兩比較差異亦均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 3. BB、LB、BF、CL4種細(xì)菌的相對含量: 3.1 BB相對含量B、C、F組BB相對含量[分別為(0.17265±0.03219)、(0.38493±0.01453)、(0.40909±0.07239)]顯著低于G、D、E組[分別為(0.62473±0.08555)、(0.60160±0.05108)、(1.12013±0.38711)] (P0.01或P 0.05)。其中B、C、F三組兩兩比較,C組和F組均顯著高于B組(P值分別0.05、0.01);C組與F組比較無明顯差異(P值均0.05)。而G、D、E三組兩兩比較,E組顯著高于G組和D組(P值均0.01), G組與D組比較無明顯差異(P值均0.05)。 3.2 LB相對含量B組LB相對含量[(0.02117±0.00793)]顯著低于G、C、D、E、F組[分別為(0.09233±0.04382)、(0.08768±0.00886)、(0.11830±0.01404)、(0.11705±0.01358)、(0.09298±0.05705)] (P值均0.01)。而G、C、D、E、F五組之間兩兩比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 3.3 BF相對含量比較G、B、C、D、E、F六組之間兩兩比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 3.4 CL相對含量B組CL相對含量[(0.00329±0.00303)]顯著高于G、C、D、E、F組[分別為(0.00017±0.00015)、(0.00073±0.00065)、(0.00016±0.00022)、(0.00010±0.00004)、(0.00154±0.00029)] (P值均0.01)。F組CL相對含量均高于G、D、E三組(P值均0.05),F組與C組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。余C、G、D、E四組兩兩比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。 結(jié)論 1.不同劑量頭孢克洛均可降低SD大鼠腸道免疫能力,而不同劑量雙歧桿菌對SD大鼠腸道免疫功能具有一定的正向調(diào)節(jié)作用。先予雙歧桿菌后予頭孢克洛,SD大鼠腸道免疫能力下降,雙歧桿菌未能起到免疫保護(hù)作用。 2.不同劑量頭孢克洛均可導(dǎo)致SD大鼠腸道菌群失調(diào),且菌群紊亂程度與頭孢克洛劑量存在相關(guān)性。大劑量雙歧桿菌具有較好的調(diào)節(jié)腸道菌群的能力,小劑量雙歧桿菌對腸道菌群無明顯影響。先予雙歧桿菌后予頭孢克洛,SD大鼠出現(xiàn)腸道菌群紊亂,雙歧桿菌不能有效維持腸道菌群平衡。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R725.7

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本文編號：2621283