【摘要】：手術(shù)應(yīng)激可導(dǎo)致免疫功能的損害，表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞數(shù)量的減少、粒細(xì)胞功能受抑制等。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡過程的無序激活與手術(shù)創(chuàng)傷引起的細(xì)胞免疫抑制有一定的聯(lián)系，而線粒體在細(xì)胞的凋亡中發(fā)揮著重要的作用。通過對(duì)經(jīng)歷手術(shù)和麻醉應(yīng)激的患兒外周血淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞線粒體功能的檢測(cè)，探討線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在手術(shù)應(yīng)激中的意義。 一、手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血淋巴細(xì)胞凋亡及線粒體功能變化 目的：探討手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血淋巴細(xì)胞的凋亡及線粒體功能變化。 方法：選擇擇期手術(shù)患兒16例，分別于術(shù)前24小時(shí)、術(shù)后24小時(shí)、術(shù)后72小時(shí)采集外周靜脈血3.5--5ml。用梯度離心法分離出淋巴細(xì)胞，置于RPMI-1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)15小時(shí)。加入藻紅蛋白標(biāo)記的抗CD4~+、CD8~+作標(biāo)記，分等量?jī)煞莘謩e加入20ug／ml的7-AAD、40nmol／L的DioC6(3)在4℃避光20分鐘染色。再加入20ug／ml放線菌素D，1％的多聚甲醛，4℃下保存20分鐘固定。然后通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的變化。 結(jié)果：發(fā)現(xiàn)術(shù)后24小時(shí)CD4~+、CD8~+淋巴細(xì)胞凋亡率明顯增加(術(shù)前分別為1.97±0.45、2.47±0.27，術(shù)后為3.50±0.42、4.26±0.53，P＜0.05)。術(shù)后72小時(shí)又恢復(fù)至術(shù)前水平(1.67±0.22、2.70±0.38，P＞0.05)。同 手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞調(diào)亡及線粒體功能變化及臨床怠義 中文提要 時(shí)熒光指數(shù)明顯增加(術(shù)前分別為503.31士59.43、381.67士61.15，術(shù)后 為700.4一士59.12、645.86士69.58，P0.05)，術(shù)后72小時(shí)恢復(fù)至術(shù)前水 平(52 1 .62士68.05，43 1 .07士79.26，P)0.05)。 二、手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血中性粒細(xì)胞凋亡及線粒體功能變化 目的:探討手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血中性粒細(xì)胞的凋亡及線粒體功能變 化。 方法:選擇擇期手術(shù)患兒16例，分別于術(shù)前24小時(shí)，術(shù)后24小時(shí)， 術(shù)后72小時(shí)采集外周血3.5一5ml加入肝素。用梯度離心法分離出中性粒 細(xì)胞，置于RPMI一1 640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)巧小時(shí)。分等量?jī)煞莘謩e加入 Zougzml的7一AAn、4onmol幾的Dioe6(3)在4oC避光20分鐘染色。再加 入20ug/ml放線菌素D，，1%的多聚甲醛，4oC保存20分鐘固定。通過流 式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的變化。 結(jié)果:發(fā)現(xiàn)術(shù)后24小時(shí)中性粒細(xì)胞凋亡率明顯減少(術(shù)前13.27士 .90，術(shù)后 (5 .47士0.71 7.55士1.26，P0.05)，而且術(shù)后72小時(shí)仍處于減少狀態(tài) P0.05)。同時(shí)熒光指數(shù)也下降(術(shù)前46.08士7.80、術(shù)后 30.72士4.23，p0.05)。術(shù)后72小時(shí)仍處于減少狀態(tài)(29.63士5.98，p0.05)。 三、結(jié)論:l)手術(shù)應(yīng)激使兒童外周血CD4+、CDS+淋巴細(xì)胞凋亡增 加，同時(shí)熒光指數(shù)升高。表明有較多細(xì)胞線粒體膜電位下降。這種變化 是短暫的，術(shù)后72小時(shí)恢復(fù)至術(shù)前水平，可能是機(jī)體免疫功能降低的原 因。2)手術(shù)應(yīng)激使兒童外周血PMN凋亡減少，同時(shí)熒光指數(shù)降低。表 明有較少細(xì)胞線粒體膜電位降低。PMN凋亡的延遲可能是術(shù)后炎癥反應(yīng) 綜合癥的原因之一。3)外周血淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞凋亡和線粒體功能 l! 手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞凋亡及線粒體功能變化及臨床意義 中文提要 的變化可能是手術(shù)應(yīng)激所致全身免疫反應(yīng)的一部分。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R726.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 呂金星,汪健,謝煒,邱玉華,孫慶林,顧志成,朱錦祥,張錫慶,張學(xué)光;白細(xì)胞介素-6和中性粒細(xì)胞凋亡在嬰幼兒手術(shù)應(yīng)激中的作用[J];中華小兒外科雜志;2001年04期

2 汪健,陳易人,朱錦祥,王興東;嬰幼兒手術(shù)損傷與外周血淋巴細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J];中華小兒外科雜志;2003年04期

本文編號(hào)：2614303