【摘要】：目的： 1.研究重組人促紅細胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后的神經(jīng)保護作用,并探討運用1hEPO治療HIBD的可行性及可能的治療機制； 2.研究及比較rhEPO在不同給藥次數(shù)、給藥劑量下神經(jīng)保護作用及副作用的差別,尋找更加安全、療效更加確切的治療方案。 方法： 150只7日齡新生SD大鼠(Sprague-Dawley rat)隨機分為：①,假手術(shù)對照組(N組)；②,EPO治療一組(EPO1組)；③,EPO治療二組(EP02組)；④,缺氧缺血一組(HIBD1組)；⑤,缺氧缺血二組(HIBD2組)共5組,各組樣本數(shù)均為30例。②③④⑤組大鼠結(jié)扎并離斷左側(cè)頸總動脈后,置缺氧倉2小時建立HIBD模型,假手術(shù)對照組(N組)大鼠僅分離頸總動脈,不予結(jié)扎和缺氧。EPO1組大鼠建模后立即按5000IU/kg的劑量腹腔注射rhEPO稀釋液1次；EP02組大鼠建模后按1000IU/kg的劑量每天注射rhEPO稀釋液1次,連續(xù)5天。HIBD1、HIBD2組大鼠分別參照EPO1、EPO2組給藥劑量、時間,注射等量生理鹽水。 于造模后48小時、4天、8天、18天取各組大鼠大腦,利用病理解剖學、免疫組織化學等相關(guān)方法觀察、測量大鼠腦組織病理改變及神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)的表達。通過Image-Pro Plus 6.0軟件在顯微鏡下統(tǒng)計大鼠腦組織切片上的NSE陽性細胞數(shù)。于造模后7天、14天、21天和28天用誘發(fā)電位儀描繪各組大鼠腦干聽覺誘發(fā)電位(brainstem auditory evoked potentials, BAEP)波形。各組大鼠于造模后48小時、8天和18天時取外周血,進行血紅細胞計數(shù)。 結(jié)果： 1.造模完成后,大部分建模大鼠出現(xiàn)不同程度的抽搐、呼吸異常、平衡失調(diào)等。造模2天后HIBD1、HIBD2組大鼠左側(cè)大腦出現(xiàn)水腫、出血點,造模8天后左側(cè)大腦萎縮,腦組織切片上可見皮層有條索狀空洞及組織結(jié)構(gòu)紊亂；造模18天后左側(cè)大腦萎縮更加明顯。各取樣時間點EPO1、EPO2組大鼠大腦也有類似改變,但相對較輕微得多,其大體結(jié)構(gòu)及組織形態(tài)更加接近正常大鼠。 2. HIBD1、HIBD2組大鼠9、15、25日齡大腦總質(zhì)量、左腦質(zhì)量均明顯小于N組(P0.05); EPO1、EPO2組15、25日齡大腦總質(zhì)量、左腦質(zhì)量均分別明顯大于HIBD1、HIBD2組(P0.05)。EPO1、EPO2組在各日齡的腦質(zhì)量損傷%均分別明顯小于HIBD1、HIBD2組(P0.05);EPO1組與EP02組大鼠之間各日齡大腦總質(zhì)量、左腦質(zhì)量、腦質(zhì)量損傷%均無明顯差別。 3.用免疫組織化學法顯示NSE的表達,造模48h后HIBD1、HIBD2組可見NSE在細胞間隙表達,EPO1、EPO2組NSE表達在神經(jīng)細胞內(nèi)；造模96h后HIBD1、HIBD2組可見大量NSE在神經(jīng)細胞間隙表達,EPO1、EPO2組僅少量在神經(jīng)細胞間隙表達；造模8天之后,HIBD1、HIBD2組NSE少見表達。HIBD1、HIBD2組大鼠各日齡NSE陽性細胞數(shù)目少于N組(P0.05);EPO1、EPO2組大鼠各日齡NSE陽性細胞數(shù)目與N組無明顯差別。 4.14日齡時HIBD1、HIBD2組的Ⅰ波和Ⅲ波的波峰潛伏期(peak latency, PL)長于N組(P0.05)；21、28、35日齡時HIBD1、HIBD2組的I波至V波的PL均長于N組(P0.05)；各時間點EPO1、EPO2組各PL與N組大多無明顯差別(除21日齡的Ⅲ波,28、35日齡的V波外)；28日齡時EP02組Ⅲ波、Ⅳ波的PL長于EPO1組(P0.05)；35日齡時EP02組V波的PL長于EPO1組(P0.05)。21、28、35日齡時HIBD1、HIBD2組大鼠的各波峰間潛伏期(inter-peak latency,IPL)大部分長于N組(P0.05)；各日齡EPO1組各IPL均與N組無明顯差異；28、35日齡EP02組各IPL均長于N組(P0.05)；28、35日齡時EP02組的Ⅲ-Ⅴ波、Ⅰ-Ⅴ波IPL長于EPO1組(P0.05)。 5.25日齡時EP02組大鼠紅細胞計數(shù)高于同日齡其它各組(P0.01或P0.05)；其他取樣時間各組大鼠紅細胞計數(shù)無明顯差別。 結(jié)論： 1.在HIBD發(fā)生的早期及時應(yīng)用EPO能夠起到神經(jīng)保護的作用,其作用機制可能是穩(wěn)定神經(jīng)細胞膜,減少神經(jīng)細胞的壞死和凋亡； 2. HIBD發(fā)生早期及時足量應(yīng)用EPO能夠改善腦功能,有利于腦的發(fā)育； 3.單次大劑量應(yīng)用EPO治療HIBD對腦功能的改善作用優(yōu)于連續(xù)低劑量應(yīng)用； 4.合理劑量應(yīng)用EPO治療HIBD未見明顯副作用。
【圖文】：

后期睜眼情況睜眼口齡正常且眼部無明一側(cè)或雙側(cè)睜眼時間)19口齡，睜顯異常眼后損傷側(cè)眼裂小于正常側(cè)，損傷側(cè)出現(xiàn)眼異常(圖2一2)A:箭頭所指為眼異常(出現(xiàn)大片乳白色壞死灶);B:正常鼠圖2一ZHIBD大鼠睜眼后的眼異常

并在固定瓶底放置棉花，防止組織在固定過程中貼底和貼壁，使固定液滲透均勻。大鼠腦組織經(jīng)固定液浸泡固定30一48小時后，做石蠟包埋，蠟塊修整后作冠狀切片，切片厚度4林m，再行相關(guān)檢測。切片部位如圖2一3，，大致相當于成年大鼠對耳線6.2mm一4.2mm之間。參照大鼠腦立體定位圖譜[73]，該區(qū)域主要包括第一聽皮質(zhì)、第
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R722.1

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本文編號：2612611