【摘要】： 目的 肺炎支原體是下呼吸道感染及社區(qū)獲得性肺炎的常見原因,在兒童引起了大約6-20%的后天免疫性肺炎及下呼吸道感染。根據(jù)種群及已知的診斷實(shí)驗(yàn)研究在后天免疫性肺炎及下呼吸道感染中肺炎支原體的發(fā)病率占1-30%,支原體培養(yǎng)非常困難,因此,傳統(tǒng)上臨床診斷主要依靠血清學(xué)方法,在急性期血清學(xué)方法敏感性欠佳,有恢復(fù)期的標(biāo)本常使診斷更精確但需要起病后很多天,根據(jù)以往的血清學(xué)方法及已實(shí)驗(yàn)的人群其敏感性和特異性在55-100%,最近,分子技術(shù)發(fā)展起來了,它對(duì)于肺炎支原體的病原診斷非常重要,因?yàn)樵谂R床上肺炎支原體同其他的細(xì)菌感染無明顯差別,對(duì)β內(nèi)酰胺類抗生素?zé)o效,在下呼吸道感染中常經(jīng)驗(yàn)性治療,為了及時(shí)有效的治療需要一個(gè)快速的診斷方法。同其他的方法相比,PCR法提供潛在的增高的敏感性和快速性,因此,對(duì)于肺炎支原體的診斷,很多實(shí)驗(yàn)室開展了核苷酸序列的擴(kuò)增技術(shù)。 FQ-PCR技術(shù)是近些年發(fā)展起來的新的核酸檢測(cè)技術(shù),該技術(shù)把PCR的高靈敏性、DNA雜交探針的高特異性和光譜技術(shù)的高精確定量融為一體。它出結(jié)果快,一般在2個(gè)小時(shí)內(nèi),可以及時(shí)地提供給臨床,可以對(duì)病原定量,并且沒有普通PCR的后續(xù)處理步驟,與傳統(tǒng)PCR相比,明顯地降低了污染的發(fā)生,本研究旨在探討熒光定量PCR對(duì)小兒肺炎支原體感染的早期診斷價(jià)值和臨床意義,尤其是對(duì)于嬰幼兒及免疫能力差產(chǎn)生抗體不足者。 對(duì)象與方法 一、研究對(duì)象的選取 (一)實(shí)驗(yàn)組 2006年10月～2007年3月我院兒科呼吸門診122例下呼吸系統(tǒng)感染者,其中男64例,女58例;年齡2個(gè)月～14歲�！�3歲:53例,3歲-6歲:41例,≥6歲:28例。性別比例無顯著性差異。均以發(fā)熱咳嗽為主要癥狀,其中肺炎57例,支氣管炎65例。所有檢測(cè)對(duì)象檢測(cè)前3天均未用紅霉素等大環(huán)內(nèi)酯類生素。 (二)對(duì)照組 20例,同期于我院門診取無呼吸道感染的正常兒童咽拭子。年齡2個(gè)月-14歲,≤3歲8例,3-6歲7例,≥6歲5例,男11例,女9例。與實(shí)驗(yàn)組無性別及年齡差異 二、方法 (一)主要儀器及試劑 SLAN熒光定量分析儀,超凈工作臺(tái),離心機(jī),振蕩器,肺炎支原體熒光定量PCR試劑盒,計(jì)算機(jī),零下20度冰箱。 (二)標(biāo)本采集 用無菌生理鹽水浸過的棉拭子直接擦拭咽后壁,然后浸于1毫升無菌生理鹽水中震蕩,密封冰盒運(yùn)送,零下20度保存,用以PCR檢測(cè);就診當(dāng)天或第2天及相隔一周到兩周后采集靜脈血,用以明膠微量顆粒凝集法抗體測(cè)定。 (三)MP感染診斷標(biāo)準(zhǔn) 雙份血清抗體有4倍以上升高或單次血清抗體滴度≥1:160作為肺炎支原體感染診斷標(biāo)準(zhǔn)。 (四)檢測(cè) 1、從冰箱中取出標(biāo)本,解凍后提取DNA。 2、從冷藏室取出試劑盒,復(fù)溫至室溫。 3、啟動(dòng)SLAN熒光定量PCR分析儀,將樣品及陽性質(zhì)控品陰性對(duì)照分別放入,分析軟件自動(dòng)得出實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線及計(jì)算結(jié)果。 (五)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 組間陽性率比較用X~2檢驗(yàn),使用SPSS10.0軟件,P＜0.05表示有顯著性差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一、咽拭子FQ-PCR與顆粒凝集法檢出率比較 在122例患兒中FQ-PCR共檢出34例,顆粒凝集法共檢出30例,FQ-PCR的敏感性是86.67%,特異性是91.30%,陽性預(yù)測(cè)值是76.47%,陰性預(yù)測(cè)值是97.67%,兩者符合率是90.16%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,X~2檢驗(yàn),兩種方法無顯著性差異。(P＞0.05) 二、咽拭子FQ-PCR與首次滴度＜1:160的陽性率比較 在110例中首次滴度＜1:160者中,雙份血清有4倍增高者有18例,其中FQ-PCR檢出16例,FQ-PCR與二次血清抗體滴度升高的符合率為90.90%,因此,FQ-PCR可作為肺炎支原體感染的早期診斷手段,尤其是在疾病初期。 三、各年齡組檢出情況比較 兩種方法均在6歲以上學(xué)齡兒童組檢出率最高,但FQ-PCR在嬰幼兒組亦有較高的檢出率。 四、對(duì)照組檢出情況 在20例正常對(duì)照組中有1例FQ-PCR陽性。 結(jié)論 1、FQ-PCR與顆粒凝集法對(duì)于檢測(cè)小兒肺炎支原體感染有較好的符合率,具有較高的敏感性和特異性。 2、FQ-PCR與雙份血清抗體檢查有較高的符合率,因此具有早期診斷價(jià)值。 3、FQ-PCR對(duì)于嬰幼兒比顆粒凝集法有更高的診斷價(jià)值,并且操作簡單,便于臨床推廣普及。
【圖文】：

在閩值之上出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，Ct值<38，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性，由儀器自動(dòng)算出DNA含量(基因拷貝數(shù)/ml)。Ct值)40，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性，38)Ct值毛40為灰區(qū)，建議復(fù)查。如圖3示(3條陽性質(zhì)控品和5條陽性樣品的擴(kuò)增曲線)圖3，F(xiàn)Q一PCR陽性結(jié)果(3條陽性質(zhì)控品和5條陽性樣品的擴(kuò)增曲線)三、咽拭子「O一pCR與顆粒凝集法陽性率比較在122例患兒中顆粒凝集法共檢出30例，F(xiàn)Q一PCR共檢出34例，F(xiàn)Q一PCR的敏感性是86.67%，特異性是 91.30%，陽性預(yù)測(cè)值是76.47%，，陰性預(yù)測(cè)值是97.67%，兩者符合率是90.16%
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R725.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2611558