IFN-γ干預(yù)輪狀病毒腸道外感染的乳鼠與NF-κB表達(dá)相關(guān)性的研究

發(fā)布時間：2020-03-31 14:47

【摘要】：目的：1.建立輪狀病毒腸道外感染的BALB/C乳鼠模型，，檢測腸道外感染RVBALB/C乳鼠肝臟的NF-κB水平,以及IFN-γ干預(yù)后的肝臟NF-κB水平。探討NF-κB表達(dá)與IFN-γ的相關(guān)性。2.觀察BALB/C乳鼠感染RV后的肝臟病理變化，以及IFN-γ干預(yù)后的肝臟病理變化。3.肝臟病理變化聯(lián)合NF-κB水平變化來探討不同劑量IFN-γ在干預(yù)RV感染過程中的作用。4.通過監(jiān)測Th1/Th2失衡中IFN-γ起到的作用，探討IFN-γ是否能為臨床治療輪狀病毒腸炎提供一種新的方法。方法：猴輪狀病毒SA-11株，分裝，-80℃保存?zhèn)溆�。實驗動物選用1-2日齡的清潔級BALB/C乳鼠，將40只BALB/C乳鼠隨機(jī)分成5組，每組8只，其中空白組為腹腔注射0.1ml無菌生理鹽水組，并記為第一天，于第二天使用無菌生理鹽水0.1ml在BALB/C乳鼠背部進(jìn)行皮下注射三天。腸道外感染對照組為腹腔注射0.1mlSA-11株病毒并記為第一天，于第二天使用無菌生理鹽水0.1ml在BALB/C乳鼠背部進(jìn)行皮下注射三天。IFN-γ干預(yù)組為腹腔注射0.1ml SA-11株病毒并記為第一天，于第二天使用大中小劑量(2ug，0.2ug，0.02ug)IFN-γ在BALB/C乳鼠背部進(jìn)行皮下注射三天。感染病毒后，各組進(jìn)行隔離飼養(yǎng)。接種病毒后觀察BALB/C乳鼠的活動情況、飲食情況、毛色、體型、大便變化情況。于第五天處死BALB/C乳鼠，留取肝臟，免疫組化法檢測NF-κB水平及RV抗原并蘇木精-伊紅（HE）染色光鏡下觀察肝臟的形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果：1.腸道外感染組BALB/C乳鼠表現(xiàn)為食欲不振，體重不增，活動減少，體毛蓬松，嗜睡等。干預(yù)組中的中等劑量組的BALB/C乳鼠活動情況，食欲情況較好，體重略有增加，大劑量干預(yù)組和小劑量組BALB/C乳鼠體重不增，活動減少。2.BALB/C乳鼠的病理改變：空白對照組肉眼下小鼠肝臟色澤鮮紅，富有光澤。光鏡下肝臟組織未見病理改變。肝細(xì)胞呈多面體形，胞核大而圓，常染色質(zhì)豐富，有1至數(shù)個核仁。腸道外感染組肉眼下小鼠肝臟色黯紅、腫大，光鏡下可見肝臟細(xì)胞胞質(zhì)疏松，線粒體腫脹，大量脂肪變空泡變性。肝細(xì)胞周圍大量淋巴細(xì)胞中性粒細(xì)胞浸潤，細(xì)胞點狀壞死可見核分裂象。IFN-γ小劑量干預(yù)組肝臟肉眼腫大較腸道外感染組無明顯變化，光鏡病理改變較病毒感染組稍有減輕。IFN-γ中等劑量干預(yù)組肝臟肉眼腫大較病毒感染組明顯減輕，光鏡下可見肝臟線粒體腫脹，脂肪變空泡變性明顯減輕。部分炎癥細(xì)胞浸潤，可見少量點狀壞死和少量核分裂象。IFN-γ大劑量干預(yù)組肝臟肉眼腫大較病毒感染組加重，光鏡下可見肝臟線粒體腫脹，脂肪變空泡變性明顯嚴(yán)重。大量炎癥細(xì)胞浸潤，可見多量點狀壞死和核分裂象。3.腸道外感染組可見多數(shù)活化的NF-κB表達(dá)于細(xì)胞核中，呈棕黃色顆粒。大中小劑量干預(yù)組細(xì)胞核中的染色范圍及強(qiáng)度較病毒感染組均增加。4.RV感染后的各組肝細(xì)胞胞質(zhì)中可見棕黃色染色顆粒。結(jié)論：1.腸道外RV感染引起B(yǎng)ALB/C乳鼠肝臟病理改變，表現(xiàn)為脂肪變性，炎癥細(xì)胞浸潤，細(xì)胞點狀壞死。三種不同劑量IFN-γ干預(yù)后，中等劑量組肝臟病理損傷較腸道外感染組有所減輕，大劑量組肝臟病理損傷較腸道外感染組有所加重，小劑量組肝臟病理損傷較腸道外感染組無明顯變化。2.肝臟NF-κB的檢測顯示三種不同劑量干預(yù)組的NF-κB表達(dá)均較腸道外感染組增加，但是三組中大劑量干預(yù)組的表達(dá)增加更為明顯。3.肝臟NF-κB表達(dá)顯示，IFN-γ能刺激NF-κB的表達(dá)。NF-κB表達(dá)在適當(dāng)范圍內(nèi)增加會對抵抗RV起到積極作用，但是超過一定的限度則會損傷肝臟。4.Th1-Th2混合反應(yīng)中Th1分泌的促炎因子IFN-γ，在合適的劑量對機(jī)體抵抗RV感染起良好作用，過高的劑量則會損傷機(jī)體。
【圖文】：

乳鼠,肛門,感染后,腹部

1 BALB/C 乳鼠感染后的表現(xiàn)白對照組活動力強(qiáng)，體重逐日增加，且無一例死亡。腸道外感染組于感染后時開始有 BALB/C 乳鼠出現(xiàn)腹瀉，腹部膨脹，精神倦怠，肛門紅腫，大便量和均較正常對照組要多，體重增長較空白對照組緩慢甚至倒退。干擾素干預(yù)組染后 48 小時開始有 BALB/C 乳鼠出現(xiàn)腹瀉，其中大劑量干預(yù)組和小劑量干預(yù)LB/C 乳鼠體重不增，腹部膨脹，精神倦怠，肛門紅腫。中等劑量干預(yù)組體重增加，且腹瀉情況在第三天時較腸道外感染組有所減輕。2 BALB/C 乳鼠腸道外感染 RV 后肝臟 RV 抗原免疫組織化學(xué)檢測在肝細(xì)胞胞質(zhì)中復(fù)制，免疫組織化學(xué)檢測胞質(zhì)內(nèi)和細(xì)胞膜上可見大量棕黃色分布，可以證明RV腸道外感染動物模型建立成功。

化學(xué)染色,免疫組織化學(xué)